巴布亚企鹅(Pygosce...a)精子形态及超微结构观察_于丽娜.pdf
《巴布亚企鹅(Pygosce...a)精子形态及超微结构观察_于丽娜.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《巴布亚企鹅(Pygosce...a)精子形态及超微结构观察_于丽娜.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、2023(03):12 15DOI:1019848/j cnki ISSN 1005 27392023 030003收稿日期:2023 03 02作者简介:于丽娜(1998),女,硕士研究生,研究方向为巴布亚企鹅迁地保护,781656711 通信作者:王伟(1978),男,教授,博士,博士生导师,研究方向为鱼类应用生物学及增养殖,wangwei 巴布亚企鹅(Pygoscelis papua)精子形态及超微结构观察于丽娜1,2,罗珺1,李艳秋1,刘友林1,2,贾一帆1,2,赵诗文1,王伟2*(1 大连圣亚海洋生物研究所,辽宁 大连 116023;2 大连海洋大学,辽宁 大连 116023)摘要:
2、为探明巴布亚企鹅精子的形态结构及超微结构特征,试验对 5 只处于繁殖季节的雄性巴布亚企鹅采用无创的背部按摩法获得新鲜精液,经扫描电镜和透射电镜对精子形态与超微结构分别进行分析。结果表明:利用扫描电镜观察到的巴布亚企鹅精子属于典型的鞭毛精子,头部呈椭球形,长11.40 11.60 m;精子中段较短,长 1.83 2.69 m;精子尾部细长,长 47.50 59.74 m;精子超微结构显示,精子的头部长而窄,呈椭球形,在中段发现了自噬体,长 0.61 0.81 m,呈新月形,精子的尾部细长、呈鞭毛状。同时观察到了9+2 微管结构0.30 0.42 m 与尾部中心轴平行排列。此研究从试验层面阐明了巴
3、布亚企鹅精子的超微结构,对巴布亚企鹅授精机制的研究、繁殖和种质资源库建设提供了基础,为有效遏制巴布亚企鹅遗传多样性的降低、也为珍稀动物巴布亚企鹅异位保存提供技术支持。关键词:巴布亚企鹅;精子;扫描电镜;透射电镜;形态;超微结构中图分类号:S864 3文献标识码:A巴布亚企鹅(Pygoscelis papua)又名白眉企鹅、金图企鹅,身长 60 80 cm,重约 6 kg,眼睛上方有一个明显的白斑,嘴细长,嘴角呈红色,眼角处有一个红色的三角形,显得眉清目秀。因其模样憨态有趣,有如绅士,十分可爱,因而俗称“绅士企鹅”,平均寿命为 20 年。巴布亚企鹅的自然分布数量正在迅速减少,根据世界自然保护联盟
4、(IUCN)调查显示,巴布亚企鹅的数量接近近危1。为了保护巴布亚企鹅,迁地保护成为一种重要的生物资源保护方式和策略2,迁地保护主要是在动物园、水族馆中进行。2000 年我国首次引进 16 只巴布亚企鹅,随后成功繁殖 12 只幼企鹅3。国外企鹅的迁地保护比国内进行得早。1919 年,爱丁堡 7 只王企鹅中的一对成功孵化并养育了一只小企鹅,这是圈养企鹅群首次成功繁殖。本研究通过对巴布亚企鹅精子形态的观察,将为企鹅精子形态学研究和评价提供素材,也为进一步开展巴布亚企鹅人工繁育和迁地保护工作提供技术支持。精子超微结构研究是检验精液品质、揭示精子发生机制、开展受精生物学研究的一项重要内容4。精子的形态和
5、品质会直接影响穿卵能力和母体的受孕率5 7,对研究企鹅授精机制、繁殖和种质资源库建设8 9,特别是对利用人工繁育保护濒危物种的应用具有重要意义10。巴布亚企鹅精子形态的扫描电镜和透射电镜研究尚未见报道,本研究使用扫描电镜和透射电镜对 5 只正处于繁殖期的巴布亚企鹅精子进行形态观察,观察其表面的结构,阐明巴布亚企鹅精子的超微结构,现报道如下。1材料与方法1.1试验动物及精液的采集达到性成熟的雄性巴布亚企鹅 5 只,来源于大连圣亚旅游控股股份有限公司。其繁育区陆地面积200 m2,水体体积 90 m3,温度控制在 1 0,水温21控制在 5 8,光照强度控制在 1 500 2 000 lx。采精前
6、将雄性企鹅单独在企鹅展厅中进行隔离,采精时工作人员一只手抱住企鹅固定身体和翅膀,另一只手握住腿;另一名工作人员对企鹅进行刺激,左手抚摸腹部,右手抚摸背部,用脱脂棉轻轻刺激泄殖腔。采集过程中要求无粪便、血液等污染物,采集到的精液立即放入冻存管中,每只雄性企鹅精液采集时间为 5 8 min。采集后将雄性企鹅放回繁育区,观察到人工采精并没有影响雄性巴布亚企鹅筑巢和配对行为。1.2精子扫描电镜观察固定:从冻存管用胶头滴管小心吸取新鲜精液,此过程中为减少对样本的机械损伤,要在 1 3 min内完成取样,均匀涂布于3 mm2组织块,用磷酸盐缓冲液(PBS)轻轻漂洗去除杂质,并对需要扫描的面进行标记。迅速投
7、入到扫描电镜固定液室温固定2 h,随后转移至 4 冰箱中保存。后固定:采用 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值7.4)对固定好的精液样品漂洗 3 次,每次 15 min。并使用 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值 7.4)配制 1%锇酸,室温下避光固定 1 2 h。再次采用 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 值 7.4)对精液漂洗 3 次,每次时长为 15 min。脱水:将样品依次放入 30%、50%、70%、80%、90%、95%乙醇进行梯度脱水,每次 15 min;放入100%乙醇脱水 30 min;再放入 100%乙酸异戊酯置换 15 min。干燥:将巴布亚企鹅精子样本放入
8、临界点干燥仪内进行干燥。样本导电处理:将企鹅精液样本放入离子溅射仪样品台上喷金 30 s 左右,此过程精子样本需紧贴于导电碳膜双面胶上。扫描电子显微镜下观察,进行精子图像分析。1.3精子透射电镜观察固定:将新鲜精液吸入离心管内,放入离心机,以3 000 r/min 离心 2 min,细胞团要有绿豆大小。去培养基后样本中加入电镜固定液,在 4 冰箱中进行保存。琼脂预包埋:精液采用离心机 3 000 r/min 离心 2 min,弃去上清液,加入 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值 7.4),混匀漂洗 3 min 后再于 3 000 r/min离心 2 min,重复漂洗 3 次。提前加热溶解
9、,制备1%琼脂糖溶液,稍冷却后加入 EP 管内,在琼脂糖凝固之前将沉淀用镊子挑起,使悬浮物包裹于琼脂糖内。后固定:使用 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值7.4)配制 1%锇酸,室温下进行避光固定 2 h。采用0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值 7.4)对精子样本漂洗3 次,每次 15 min。室温脱 水:样 品 依 次 放 入 30%、50%、70%、80%、90%、95%乙醇进行梯度脱水,每次 20 min;再放入 100%乙醇脱水 40 min;然后用 100%丙酮置换30 min。渗透与包埋:脱水后样本采用丙酮 812 包埋剂=1 1的体积比例,在 37 静置 2 4 h;
10、丙酮 812包埋剂=1 2的体积比例在 37 下静置开盖过夜;再用纯 812 包埋剂在 37 静置 5 8 h,然后将纯812 包埋剂倒入包埋板,37 烤箱处理 12 h 以上。聚合:将渗透与包埋后的样品在恒温箱内 60 聚合 2 d,取出树脂块,备用。超薄切片:用超薄切片机对树脂块进行切片,厚度为 60 80 nm,用 150 目方华膜铜网捞起,放入培养皿中。染色:对切片进行双重染色,将铜网放在 2%醋酸铀饱和乙醇溶液避光染色 8 min;用 70%乙醇清洗3 次;超纯水清洗3 次;使用2.6%枸橼酸铅溶液避二氧化碳染色8 min;超纯水清洗3 次,滤纸吸出多余的水分后将铜网切片,放入铜网盒
11、内,在室温下进行干燥。透射电子显微镜下观察,对巴布亚企鹅精子进行图像分析。2结果与分析2.1企鹅精子的外部形态通过扫描电镜,观察到巴布亚企鹅精子主要由头部 11.40 11.60 m(见图 1 A)、中段 1.83 2.69 m(见图 1 B)和尾部 47.50 59.74 m(见图1 C)组成,属于典型的鞭毛精子。2.2巴布亚企鹅精子的超微结构通过透射电镜观察到巴布亚企鹅精子的头部长而窄,呈椭球形(见图 2A)。在巴布亚企鹅精子的中段发现了 0.61 0.81 m 自噬体,呈新月形(见图2B)。巴布亚企鹅精子的尾部细长,呈鞭毛状(见图2C);同时观察到了 9+2 微管结构,长 0.30 0.
12、42 m,与尾部中心轴平行排列(见图 2D)。3讨论与结论本研究中,通过腹部按摩采集企鹅精液的技术,313 期黑龙江动物繁殖研究与探讨图 1巴布亚企鹅精子扫描结果Fig.1Gentoo penguin sperm scan results图 2巴布亚企鹅精子透射结果Fig.2Sperm transmission results of Gentoo penguin由饲养人员进行无创精液样本采集11,这使雄性企鹅的压力和胁迫感降低。通过观察人工采精行为并没有影响雄性巴布亚企鹅筑巢和配对行为。本研究对巴布亚企鹅精子进行了扫描电镜和透射电镜观察,经扫描电镜观察巴布亚企鹅精子与其他动物正常精子的形态与结
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 巴布亚 企鹅 Pygosce 精子 形态 超微结构 观察
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。