高效液相色谱-串联质谱测定食用植物油中7种植物甾醇含量.pdf
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1、2023年第36 卷第9 期食品安全与检测高效液相色谱串联质谱测定食用植物油中7 种植物笛醇含量王宏萍,李国琴2 3,权源,刘建涛(1.临汾市综合检验检测中心,山西临汾0 410 0 0;2.山西师范大学现代文理学院,山西临汾0 410 0 0;3.山西师范大学食品科学学院,山西太原0 30 0 31)摘要:建立高效液相色谱-串联质谱外标法测定6 种食用植物油中7 种植物笛醇含量的分析方法。样品经微沸回流提取后在8 0 0 0 r/min离心5min,上清液经0.2 2 m尼龙滤膜过滤后进样。采用PhenomenexKinetexCis(3mm10 0 mm,2.6 m)分离,使用体积分数0.
2、1%甲酸水溶液-甲醇洗脱,在正离子模式下电离,多反应模式检测,外标法定量。结果表明:麦角笛醇和豆笛烷醇在201000ng/mL范围内线性关系良好,-谷笛醇、菜籽笛醇、岩藻笛醇、豆笛醇和菜油笛醇在2 0 0 10000ng/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99,定量限为0.7 mg/kg,平均回收率为88.6%110.8%,相对标准偏差为3.1%8.7%。方法具有灵敏度高、重现性好、适用性强等优点,适用于6 种食用植物油中7 种植物笛醇的测定。关键词:食用植物油;植物笛醇;高效液相色谱-串联质谱;外标法Determination of seven phytosterols in edi
3、ble vegetable oilsby high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometryWANG Hong-ping,LI Guo-qin2,QUAN Yuan,LIU Jian-tao(1.Linfen Comprehensive Inspection and Testing Center,Linfen 041000,Shanxi,China;2.Modern College of humanities and sciences of Shanxi Normal University,3.School of Fo
4、od Science,Shanxi Normal University,Taiyuan 030031,Shanxi,China)Abstract:A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was establishedfor the determination of 7 phytosterols in 6 edible vegetable oils.The samples were extracted by micro-boil-ing reflux and centrifuged at 8
5、 000 r/min for 5 min,and the supernatant was filtered through 0.22 m ny-lon filter membrane and then injected.The samples were separated by Phenomenex Kinetex Cis(3 mm x100 mm,2.6 m),eluted with formic acid aqueous solution-methanol of 0.1%volume fraction,ion-ized in positive ion mode,detected in mu
6、ltiple reaction mode and quantified by external standard meth-od.The results showed that the linearity was good in the range of 20-1 000 ng/mL for ergosterol andstigmastanol,and in the range of 200-10 000 ng/mL for-sitosterol,brassicasterol,fucosterol,stig-masterol and campesterol.The correlation co
7、efficients were greater than O.99,and the limit of quantifica-tion(LOQ)was 0.7 mg/kg.The average recoveries ranged from 88.6%to 110.8%with the relativestandard deviations(RSD)of 3.1%-8.7%.The method had the advantages of high sensitivity,goodreproducibility and applicability,and was suitable for the
8、 determination of 7 phytosterols in 6 kinds of ed-ible vegetable oils.收稿日期:2 0 2 3-0 5-31基金项目:山西省基础研究计划(2 0 2 10 30 2 12 4515);山西省高等学校教学改革创新项目(J20221509)作者简介:王宏萍(197 5一),女,本科,副高级工程师,研究方向为食品、农产品检测。粮食与油脂Linfen 041000,Shanxi,China;133134Key words:edible vegetable oil;phytosterol;high performance liquid
9、 chromatography-tandem massspectrometry;external standard method中图分类号:TS227文献标志码:A植物留醇又名植物固醇,是多种激素、维生素D及留族化合物生物合成的前体,具有降血脂、降胆固醇、治疗心血管疾病、抗癌、抗炎等多种生理功效,常见于各类食用植物油中。食用植物油富含多种植物笛醇,如-谷笛醇、豆笛醇、菜油笛醇、菜籽笛醇、岩藻甾醇等2 。一般-谷甾醇是食用植物油凿醇的主要成分,占总植物留醇含量的6 0%90%3。目前检测植物留醇的方法有分光光度法、酶法、液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱-质谱串联
10、法等4-7 ,高效液相色谱-质谱串联法由于其高灵敏度和选择性等优点,已成为目前最为常用的检测手段8-10 。GB/T399952021笛醇类物质的测定采用高效液相色谱-质谱串联法检测猪油和菜籽油中植物留醇,需以6-酮胆笛烷醇为内标,影响了检测效率。本文采用高效液相色谱-质谱串联外标法测定食用植物油中7 种植物笛醇含量,通过回收率和精密度实验进行验证,为食用植物油中植物醇的检测提供技术参考。1材料与方法1.1材料与试剂花生油、大豆油、棉籽油、菜籽油、葵花籽油、玉米油,市售;-谷笛醇(纯度9 5.0 0%)、麦角留醇(纯度95.0 0%)、菜籽笛醇(纯度98.0 0%)、菜油笛醇(纯度9 8.0
11、0%)、豆笛醇(纯度97.00%),St a n f o r d C h e m ic a ls 公司;豆笛烷醇(纯度93.00%),C A T O 公司;岩藻笛醇(纯度99.7%),坛墨质检标准物质中心;甲醇、无水乙醇,色谱纯;超纯水,实验室自制。1.2仪器与设备TRIPLEQUADTM液相色谱-质谱联用仪(配大气压化学离子源),美国ABSciex公司;PhenomenexKinetex Cis 色谱柱(3.0 mm 100 mm,2.6 m)、Phenomenex Kinetex Fs(3.0 mm 100 mm,2.6 m),艾杰尔-飞诺美公司;ACQUITYUPLC BEHCis(2.
12、1mm100mm,1.7m),美国Waters公司;Multifuge1R高速冷冻离心机,德国ThermoFisher公司;ME204电子天平,美国METTLERTOLEDO公司;QUINTIX125D-1CN电子天平,德国Sartorius公粮食与油脂文章编号:10 0 8-9 57 8(2 0 2 3)0 9-0 133-0 5司;HVM1涡旋混合器,HENGWELL公司;2 50 mL回流冷凝装置,天津玻璃仪器厂。1.3试验条件1.3.1色谱条件采用Phenomenex Kinetex Ci:色谱柱;柱流速0.6mL/min;柱温40;进样量5L;流动相A,体积分数0.1%甲酸水溶液;流
13、动相B,甲醇;采用梯度洗脱,洗脱程序为 0 1 min 70%B,1 7 m i n70%98%B,7 14 min 98%B,14.0 14.1 min98%70%B,14.1 20.0 min 70%B。1.3.2质谱条件大气压化学离子源(APCI);扫描方式,正离子模式;NC电压,3V;气帘气,2 0 psi;雾化气Gasl,40psi;离子源温度TEM,500;碰撞器CAD,8。1.4试验方法1.4.1标准溶液配制留醇单一标准储备液:分别准确称取适量的笛醇标准品(精确至0.1mg),用无水乙醇溶解并制成质量浓度为50 0 g/mL的笛醇单一储备液,冷冻保存,有效期为1个月。留醇混合标准
14、溶液:分别准确移取各留醇单一标准储备液适量,用无水乙醇溶解,混匀,配制成-谷醇、菜籽笛醇、岩藻笛醇、豆笛醇、菜油笛醇质量浓度为50 g/mL和麦角醇、豆笛烷醇质量浓度为5g/mL的笛醇混合标准溶液,现配现用。笛醇混合标准工作溶液:准确移取适量笛醇混合标准溶液,用无水乙醇稀释配制成-谷笛醇、菜籽笛醇、岩藻笛醇、豆笛醇、菜油笛醇质量浓度分别为2 0 0 50 0 、1 0 0 0、2 0 0 0 ,5 0 0 0 、10 0 0 0 ng/mL;麦角笛醇、豆笛烷醇质量浓度分别为2 0、50、10 0、200、50 0、10 0 0 n g/m L系列留醇混合标准工作溶液,现配现用。1.4.2样品前
15、处理称取0.5g(精确至0.1mg)食用植物油于250mL烧瓶中,加入7 0 mL无水乙醇溶液,称重(精确至1mg),充分混匀后放入回流冷凝器中,小心加热并保持提取液微沸,30 min后停止加热并冷却至室温,用无水乙醇补足失重,混匀,吸取10 mL以8000r/min离心5min,取上清液,待测。2023年第36 卷第9 期2023年第36 卷第9 期1.4.3样品测定取2 mL上清液过0.2 2 m尼龙滤膜,使用自动进样器进样5L,在1.3所述的色谱、质谱条件下进行分析,根据定量离子色谱峰的峰面积和外标法标准工作曲线对样品进行定量。应使样品溶液中各被测物的响应值在仪器测定的线性范围内,如果含
16、量超过标准工作曲线范围,应稀释到合适浓度后再进样分析。1.4.4结果计算样品中某种植物笛醇含量的计算见式(1)。x=-pxVm 1 000式中:为试样中被测组分含量,g/g;p为根据外标标准工作曲线所得被测组分溶液质量浓度,ng/mL;V为试样溶液定容体积,mL;m为试样的质量,g。2结果与讨论2.1液相色谱柱和流动相的选择本试验比较了 Phenomenex Kinetex F,、Ph e-nomenex Kinetex Cis、A CQ U IT Y U PLC BEH Ci s 色谱柱对醇化合物的分离效果,发现Ci8色谱柱比其他色谱柱有更好的分离度和峰形,笛醇化合物的极性较弱,C1:色谱柱
17、适用范围更广一些,对于中等、弱极性都有较好的保留分离效果,故最终选择Phenome-nexKinetexCi:色谱柱作为笛醇化合物的分析柱。留醇化合物结构中带有醇羟基1,流动相选择中甲醇比乙腈会有更好的溶解度及分离效果,在水相中添加甲酸可以帮助提高目标物质的离子化效率2 ,本试验考察了体积分数0.1%甲酸水溶液-甲醇、水溶液-甲醇、体积分数0.1%甲酸水溶液-乙腈作为流动相的分离效果。结果表明,不同体系作流动相分离效果差异很大,当流动相分别为水溶液-甲醇、体积分数0.1%甲酸水溶液-乙时,岩藻笛醇和豆植物笛醇麦角笛醇菜籽笛醇岩藻笛醇菜油笛醇-谷笛醇豆笛烷醇豆笛醇粮食与油脂留醇分不开。因此,最终
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