复发性流产患者胎盘绒毛滋养细胞LC3、Beclin-1表达及意义.pdf
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1、 1878 四川生理科学杂志 2023,45(10)临床研究 复发性流产患者胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 表达及意义#徐丽伟*张圆圆 康乐 王杉杉 赵青竹(河南大学第一附属医院妇科,河南 开封 475100)摘要 目的:分析复发性流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)患者胎盘绒毛滋养细胞微管相关蛋白轻链 3(Light chain,LC3)、自噬相关蛋白 Beclin-1 表达及意义。方法:回顾性分析 2021 年 1 月至 2021 年 12月河南大学第一附属医院收治的 50 例 RSA 患者及 50 例胚胎发育正常行人工流产者的临床资料,
2、将 RSA 患者纳入 RSA 组,将人工流产者纳入人工流产组,清宫术后采集其胎盘绒毛滋养细胞使用免疫印迹法检测胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 相对表达量水平,使用 Spearman 分析模型分析胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 水平与复发性流产的相关性,使用受试者工作曲线(Receiver operator characteristic,ROC)计算胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 预测复发性流产发生的预测价值。结果:RSA 组患者胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 水平显著高于人工流产组(P0.05);经 Spearman 分析模型分析,胎盘绒毛滋养细
3、胞 LC3、Beclin-1 水平与 RSA 发生呈正相关(P0.05)。ROC 曲线中,胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 水平预测 RSA 发生的曲线下面积(Area under the curve,AUC)分别为 0.862、0.862,截断值分别为 1.29、1.43;联合预测的AUC 为 0.942,敏感度为 92.00%,特异度为 86.00%。结论:胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 水平与 RSA发生存在明显相关性,检测胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 水平预测 RSA 发生具有较高预测价值,为临床治疗提供方向。关键词:复发性流产;胎盘绒毛滋养细胞;微
4、管相关蛋白轻链 3;Beclin-1 复发性流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)指连续发生率两次及以上自然流产,其发生原因较复杂,可能与免疫、内分泌、遗传等因素有关,RSA对孕妇生理及心理均造成较大影响,临床需根据 RSA 患者情况准确判断其 RSA 发生原因并及时采取应对、治疗措施,降低流产风险,预防患者再次流产。胎盘绒毛滋养细胞在胚泡侵袭子宫内膜、胎盘形成及孕期内分泌等存在重要作用,胎盘绒毛滋养细胞凋亡与胎盘生长发育密切相关。自噬为真核细胞基础代谢反应之一,可维持细胞动态稳定,辅助物质、能量再利用,参与妊娠各个时期的生理及病理过程,正常自噬对妊娠存在
5、促进作用,但自噬过度会破坏细胞稳定,导致胎盘组织细胞、内皮细胞等损伤甚至凋亡,引发胚胎死亡及流产。胎盘绒毛滋养细胞微管相关蛋白轻链 3(Light chain,LC3)能靶向定位于自噬体膜,参与自噬过程。自噬相关蛋白 Beclin-1 为自噬体形成的必须分子之一,监测胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1水平可反应胎盘绒毛滋养细胞自噬水平。目前临床大多研究胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1 水平与子痫前期的关系。因此,本次旨在分析 RSA 患者胎盘绒毛滋养细胞 LC3、Beclin-1表达及其意义,为临床防治 RSA、降低流产率提#基金项目:开封市科技发展计划项目(编号:21060
6、03);*作者简介:徐丽伟,女,主治医师,主要从事妇科肿瘤研究,Email:;通讯作者:张圆圆,女,副主任医师,主要从事妇科肿瘤研究,Email:。供参考。1 资料与方法资料与方法 1.1 一般资料 回顾性分析 2021 年 1 月至 2021 年 12 月河南大学第一附属医院收治的 50 例 RSA 患者及 50例胚胎发育正常行人工流产者的临床资料。将RSA 患者纳入 RSA 组,将人工流产者纳入人工流产组。纳入标准:RSA 组患者均符合 RSA 诊断标准1;月经正常,无肿瘤、畸形等生殖系统疾病;无糖尿病等内分泌疾病;夫妻双方染色体均正常;人工流产组均有正常妊娠、分娩史。排除标准:存在明确环
7、境、遗传因素导致流产;人工流产组存在不良妊娠、分娩史;高龄产妇。RSA组中年龄2231 岁,平均26.522.33 岁;流产次数 24 次,平均 3.120.46 次;早期流产29 例,晚期流产 21 例。人工流产组中年龄 2133 岁,平均 26.892.41 岁;妊娠次数 24 次,平均3.080.42 次;分娩次数 13 次,平均 1.970.43 次。本次研究经我院医学伦理委员会审核批准。1.2 方法 1.2.1 样本采集 RSA组及人工流产组均在其清宫术后采集其 四川生理科学杂志 2023,45(10)1879 胎盘绒毛滋养细胞,并使用等渗生理盐水漂洗其中血液,漂洗后放在冻存管内,放
8、入-80 环境下保存。1.2.2 胎盘绒毛滋养细胞 LC3 检测 取出冻存的绒毛组织,加入细胞裂解液,在4条件下以 10000 rmin-1转速离心 10 min,取30 L 上层清液使用考马斯亮蓝法调整蛋白浓度,依次使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、电转膜至聚偏二氟乙烯膜、5%脱脂奶粉封闭 1 h后,分别加入鼠抗人 LC3、LC3一抗,在 4 条件下放置过夜,然后使用缓冲盐水和洗涤剂洗涤,加入辣根过氧化物酶标记的二抗,在室温下放置 1 h,再次洗涤,洗涤后使用增强化学发光法试剂盒进行显影、定影,使用以色列 DNR 成像系统仪器分析蛋白条带灰度值,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glycera
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