不同绵羊品种发情期卵巢组织lncRNA和mRNA的差异表达分析.pdf
《不同绵羊品种发情期卵巢组织lncRNA和mRNA的差异表达分析.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《不同绵羊品种发情期卵巢组织lncRNA和mRNA的差异表达分析.pdf(11页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 南京农业大学学报():/.:./.收稿日期:基金项目:国家自然科学基金项目()作者简介:杨帆硕士研究生通信作者:王锋教授研究方向为肉羊繁殖调控:.杨帆姚晓磊李康等.不同绵羊品种发情期卵巢组织 和 的差异表达分析.南京农业大学学报():.():.不同绵羊品种发情期卵巢组织 和 的差异表达分析杨帆姚晓磊李康李晓丹唐轮尤佩华蔡庆贤王锋(.南京农业大学动物科技学院江苏 南京.广西大化瑶族自治县畜牧管理站广西 大化.江苏波杜农牧股份有限公司江苏 南京)摘要:目目的的 本文旨在探究不同绵羊品种发情期卵巢组织中长链非编码()和信使()的差异表达筛选绵羊繁殖力相关的分子标记 方方法法 根据羊场生产记录挑选
2、岁体型、生理状态相似的空怀蒙古羊()和湖羊()各 只对其进行同期发情处理发情时密集采血 (每次隔 )检测血清中促卵泡刺激素()和促黄体生成素()含量各组随机挑选 只屠宰采集卵巢组织用于转录组测序()从 数据库中下载小尾寒羊()和陶赛特羊()发情期卵巢 数据整合分析不同绵羊品种卵巢中 和 的表达特征 结结果果 湖羊血清中 和 含量均显著高于蒙古羊(.)共鉴定到 个 转录本在 个差异分组均获得一定数量的差异 和 并从中筛选与繁殖相关的共有和特有 和 去除新基因后分别构建 和 互作网络筛选到、和 等与繁殖相关的共有差异基因与繁殖相关的共有差异 主要注释到受精、卵母细胞成熟和配子发生等条目富集于 和
3、等信号通路关键基因()在蒙古羊和湖羊全身组织中表达趋势一致均在卵巢组织中高表达且在湖羊垂体、卵巢和子宫组织中均检测到 蛋白阳性信号 结结论论 本研究绘制了湖羊和蒙古羊卵巢组织中差异 和 表达图谱筛选到与繁殖相关的 和 为绵羊繁殖调控及育种分子标记奠定基础 关键基因 可能通过生殖轴调控绵羊的繁殖性能关键词:绵羊发情期繁殖性状卵巢中图分类号:.文献标志码:文章编号:()(.):()().()().(/)()().().(.).第 期杨帆等:不同绵羊品种发情期卵巢组织 和 的差异表达分析 .:绵羊作为我国重要的经济动物能够提供肉、奶、纤维等优质的农畜产品 虽然我国绵羊品种资源丰富但绝大部分表现为产羔
4、率低、季节性发情规模化舍饲的快速发展对种羊繁殖性能提出了更高的要求 因此选育优良品种提高绵羊繁殖力一直是绵羊育种的关键 湖羊和小尾寒羊是我国优良的多胎绵羊品种湖羊更是以性早熟、全年发情以及高繁殖力而闻名 蒙古羊和陶赛特羊作为地方性品种具有适应性强、产肉性能高等特点但其繁殖力较低 因此开展绵羊不同品种间繁殖力差异的研究显得尤为重要绵羊的多胎性或高繁殖力现象早就引起科学界的高度重视并已经成功鉴定出多个绵羊繁殖力相关基因(骨形态发生蛋白受体)、(生长分化因子)、(骨形态发生蛋白)和(乙酰氨基半乳糖转移酶)等但数量还较为有限 湖羊和小尾寒羊是我国少有携带多胎主效基因()的绵羊品种 但在实际生产中携带纯
5、合 基因的湖羊也存在产单羔现象这种差异表明 与多胎性之间可能存在其他调控机制长链非编码()作为一种新的表观遗传调控分子在家畜繁殖中直接或间接参与基因调控过程 为揭示 对哺乳动物繁殖力的调控机制研究者围绕不同繁殖力母羊的下丘脑垂体卵巢子宫轴开展了相关研究 郑健等对单多羔湖羊下丘脑进行转录组分析发现下丘脑中神经信号传递通路和 氨基丁酸信号通路可能间接调控卵泡发育及排卵过程 从高、低繁绵羊垂体的 调控网络中筛选到(家庭成员)、(神经介素)和(肝配蛋白)等与繁殖相关的基因 此外在不同繁殖力湖羊卵巢的研究中卵泡发育相关 可吸附颗粒细胞中的 并阻止 与核心蛋白聚糖()基因的区域结合导致湖羊 基因转录激活和
6、 通路抑制 同时研究者以发情期不同繁殖力的寒泊羊、小尾寒羊与陶赛特、安徽白山羊卵巢为对象通过转录组测序()后均获得一定数量与繁殖相关的差异 也有研究者发现 还参与绵羊卵巢、睾丸发育及初情期启动等过程 以上研究表明 在调控肉羊繁殖性能中发挥着关键作用 然而上述研究大多数侧重于筛选同一品种不同繁殖力绵羊之间的差异 而关于不同绵羊品种之间的研究相对较少本研究选取地方特色绵羊品种湖羊()和蒙古羊()为研究对象在发情期采集卵巢组织进行再结合 数据库中已有的小尾寒羊()和陶赛特羊()发情期卵巢数据比较分析不同绵羊品种发情期卵巢中差异表达的 和 构建 和 调控网络筛选关键基因并探究其表达规律为绵羊繁殖调控及
7、育种分子标记提供理论依据 材料与方法.试验动物本试验于江苏省泰州市姜堰某羊场进行根据生产记录选择 岁体况相近、生殖生理状态相似的空怀湖羊(.)只 同时选择相同条件的空怀蒙古羊(.)只 试验羊只每天:、:饲喂全混合()日粮自由饮水.试验材料绵羊促卵泡激素()和促黄体生成素()试剂盒()均购自上海卡迈舒生物科技有限公司 试剂盒购自 反转录试剂盒()和荧光定量试剂盒南 京 农 业 大 学 学 报第 卷()均购自南京诺唯赞生物科技有限公司即用型免疫组化试剂盒()购自上海爱必信生物科技有限公司基质金属蛋白酶()抗体()购自沈阳万类生物有限公司.试验设计蒙古羊和湖羊各 只于 月份采用单栏方式饲养于第 天:
8、放拴处理 后撤拴并注射氯前列烯醇每只.次日用公羊试情接受公羊爬跨视为发情 到下一次自然发情时颈静脉密集连续采血每 次连续采集 分离血清后置于 保存备用 采血后随机挑选蒙古羊和湖羊各 只进行屠宰分别采集下丘脑、垂体、卵巢、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织样单侧发育较好的卵巢放入液氮用于后续 另一侧卵巢以及垂体和子宫组织用布氏固定液固定用于后续免疫组化检测 其余组织样经液氮速冻后于 冰箱保存.试验方法.生殖激素的测定 对上述置于 的血清进行 和 含量测定试验步骤严格按照 和 检测试剂盒说明书进行.总 提取及建库 利用 法对蒙古羊和湖羊全身组织提取总 卵巢 的质量测定、文库构建和测序交由北京
9、百迈客生物科技有限公司采用 系统进行 同时小尾寒羊(、)和陶赛特羊(、)的测序原始数据下载于(:/./)的 数据库.转录组数据分析 对测序的原始数据()进行过滤使用 软件将质控后序列()与绵羊基因组(.)进行序列比对获得 在绵羊基因组上的位置信息()以及湖羊卵巢组织特有序列信息使用 软件对转录本和基因表达量进行分析同时利用 软件将 进行转录本拼接以此对 进行鉴定 鉴定 包括筛选和潜在编码能力分析选择长度 数 ().的转录本和利用、和 等 种编码潜能的分析方法评估使用顺式作用(邻近 )和反式作用(软件)种方法预测 靶基因使用 方法对基因和转录本的表达量进行差异分析获得差异 和 差异分组:、前者为
10、对照组限定条件:差异倍数()错误发现率().使用 语言包中 对差异 的靶基因和 在 功能数据库中进行富集分析使用 软件进行 通路显著富集分析使用 数据库(:/./)预测并绘制 的蛋白互作()网络利用 软件绘制 互作图.实时荧光定量()为验证测序结果的准确性从测序结果中随机挑选 个 和 进行验证 根据 公布的绵羊基因序列以及测序拼接后获得的 序列采用.软件设计引物以 为内参基因引物由南京擎科生物有限公司合成(表)按照诺唯赞公司试剂盒操作说明进行反应体系为 采用 法计算基因的相对表达量表 引物序列信息 基因引物对序列 ()产物长度/登录号././././././././././.注:):分泌型卷曲
11、相关蛋白 :低密度脂受体蛋白 :卷曲同源物 :基质金属蛋白酶 :生长分化因子 :甘油 醛 磷 酸 脱 氢 酶 基 因 .).、.、.、.和.为 绵 羊 .第 期杨帆等:不同绵羊品种发情期卵巢组织 和 的差异表达分析.免疫组化检测 湖羊垂体、卵巢和子宫组织采用布氏固定液固定 后进行石蜡包埋和组织切片切片厚度 烤片 免疫组化检测步骤参考本实验室的前期研究 一抗为 兔多克隆抗体以 进行稀释二抗 酶标抗小鼠和兔二聚物为试剂盒即用试剂对照组用兔血清代替一抗其余步骤保持一致.数据分析所有数据使用 软件初步处理后使用 软件进行差异显著性检验和单因素方差分析并绘图 数据结果以平均值标准误表示 结果与分析.发情
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 不同 绵羊 品种 发情期 卵巢 组织 lncRNA mRNA 差异 表达 分析
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。