DB23∕T 3168—2022 盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术规程(黑龙江省).pdf
《DB23∕T 3168—2022 盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术规程(黑龙江省).pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB23∕T 3168—2022 盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术规程(黑龙江省).pdf(8页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、ICS 65.020.20 CCS B 05 DB23 黑龙江省地方标准 DB23/T 31682022 盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术规程 2022-05-09 发布 2022-06-08 实施 黑龙江省市场监督管理局 发 布 DB23/T 31682022 I 前 言 本文件依据 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出。 本文件起草单位:黑龙江省农业科学院土壤肥料与环境资源研究所。 本文件主要起草人:王爽、孙磊、金品娇
2、、李伟群、陈雪丽、万书明、刘凯、李一丹、孙秀君。 DB23/T 31682022 1 盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术规程 1 范围 本文件规定了盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术的术语和定义、原理、一般要求、分离方法和分类方法。 本文件适用于盐碱土壤中嗜盐细菌和嗜盐古菌的分离与快速分类。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求 GB/T 1949
3、5.3 转基因产品检测 核酸提取纯化方法 NY/T 1114-2006 微生物肥料实验用培养基技术条件 NT/T 1377 土壤pH的测定 NT/T 1121.16 土壤检测 第16部分:土壤水溶性盐总量的测定 NY/T 2066-2011 微生物肥料生产菌株的鉴别 聚合酶链式反应(PCR)法 NY/T 2321-2013 微生物肥料产品检验规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 嗜盐微生物(Halophiles) 在盐环境中生长旺盛的一类喜盐的微生物,包括原核生物(细菌和古菌)和真核生物。根据它们对氯化钠的需求,可分为轻度(最适盐浓度0.2 mol/L0.5 mol/L)
4、、中度(最适盐浓度0.5 mol/L2.5 mol/L)和极端嗜盐菌(最适盐浓度2.5 mol/L5.2 mol/L)。 3.2 嗜盐细菌(Halophilic bacteria) 分类学上属于细菌域(Bacteria domain),在0.2 mol/L2.5 mol/L盐浓度范围内有最佳生长的一类嗜盐微生物,主要为轻度和中度嗜盐细菌。 3.3 嗜盐古菌(Halophilic archaeon) 分类学上属于古菌域(Archaea domain),在含2.5 mol/L5.2 mol/L盐浓度范围生长最好的一类极端嗜盐微生物。 3.4 DB23/T 31682022 2 分类(classif
5、ication) 选择特定的引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法快速扩增嗜盐细菌和嗜盐古菌分离株的16S rRNA基因,在进一步测序的基础上进行16S rRNA基因序列的系统发育学分析来判定所属细菌或古菌的类别。 4 原理 16S rRNA序列的系统发育学进化距离与表型特征及化学分类数据有非常好的相关性, 但传统的微生物分类学方法比较繁琐费时,而PCR快速扩增嗜盐细菌和嗜盐古菌的16S rRNA基因相对简单快捷。本方法采用细菌和古菌的特异性引物对分离菌株的16S rRNA基因进行PCR扩增,对PCR产物进行电泳检测、纯化和测序,并将测得的分离菌株的16S rRNA基因序列和来自GenBank数
6、据库中的序列进行比较和系统发育学分析,来鉴定其为细菌还是古菌。 5 一般要求 试验操作人员应具备良好的微生物学知识积累和分子生物学专业技能,操作熟练。实验室有毒、有害、废弃物质的处理及个人安全防护应符合GB/T 19495.2的要求。 6 分离方法 6.1 工具 电子天平(万分之一),2 mm 孔径的筛子,往复式电动振荡机,锥形瓶,无菌大试管,无菌水,微量可调移液器(100 L1000 L),培养皿,玻璃刮铲,接种环,全自动高压灭菌锅,超净工作台,恒温培养箱。 6.2 培养基的选择与培养基平板的制备 6.2.1 嗜盐细菌分离培养基的选择 营养琼脂培养基(NA),复合培养基(CM),TSA 培养
7、基,培养基成分及配制要点见附录 A ;R2A培养基和海盐琼脂培养基(2216E)可于厂家购买。 6.2.2 嗜盐古菌分离培养基的选择 稀释 10 倍的复合培养基(CM),改良高氏一号(Cause1)培养基,稀释 10 倍的改良 S-G 培养基,培养基成分及配制按附录 A。 6.2.3 培养基平板的制备 培养基的配制按照 NY/T 1114-2006 中 6 的要求进行。培养基平板的制备应符合 NY/T 2321-2013中 5.1.4.1 的要求, 对于培养古菌的固体培养基要稍厚一些, 且制备好的培养基应放置无菌密封袋中于4 C 保存。 6.3 土壤样品的预处理及土壤悬浮液的制备 新鲜土壤样品
8、需进行过 2 mm 孔径筛的预处理,按照 NY/T 2321-2013 中 5.1.4.2 的要求用系列稀释方法获得不同浓度的土壤悬浮液(菌悬液)。对于不能立即用于微生物分离的新鲜土样应暂存于 4 C冰箱中。 DB23/T 31682022 3 6.4 土壤 pH 和水溶性盐总量的测定 土壤 pH 和水溶性盐总量的测定分别按照 NT/T 1377 和 NT/T 1121.16 的规定进行。 6.5 菌悬液的加样及培养 6.3 中的土壤悬浮液按照 NY/T 2321-2013 中 5.1.4.3 的要求涂布在制备好的培养基平板上,在 30 C35 C 恒温静置培养箱中倒置培养。培养极端嗜盐古菌的
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB23T 31682022 盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术规程黑龙江省 DB23 3168 2022 盐碱 土壤 细菌 资源 分离 快速 分类 技术规程 黑龙江省
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【曲****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【曲****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。
链接地址:https://www.zixin.com.cn/doc/74234.html