芹菜黄酮类提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究.pdf
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1、第 51 卷第 9 期2023 年 5 月广 州 化 工Guangzhou Chemical IndustryVol.51 No.9May.2023芹菜黄酮类提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究何方颖,裘钰颖,徐林通,邱竞瑶,沈芳仪,齐德强(浙江外国语学院,浙江 杭州 310023)摘 要:为探究芹菜中黄酮类提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用,本研究通过乙醇提取和酶解等优化方法,提取出西芹茎、西芹叶、香芹茎、香芹叶中的黄酮,得出黄酮得率芹菜叶明显高于茎。通过动力学分析测定出对酪氨酸酶的相对酶活力分别为81.18%、29.32%、74.84%、8.97%,以及酶抑制率分别为 18.82%、70.68%
2、、25.16%、91.03%。结果表明,芹菜叶对酪氨酸酶活性的抑制作用较茎强,为后期酪氨酸酶抑制剂的提取提供实验基础,为开发芹菜作为天然抗氧化剂和美白剂原料提供理论依据。关键词:芹菜;黄酮;提取物;酪氨酸酶;抑制作用中图分类号:O629.9 文献标志码:A文章编号:1001-9677(2023)09-0099-03 第一作者:何方颖,女,浙江外国语学院教育学院科学教育系学生。通讯作者:齐德强,男,博士,浙江外国语学院教育学院科学教育系系主任,主要从事分子荧光探针和中小学科学教学研究。Study on Inhibitory Effect of Flavonoids Extractsfrom Ce
3、lery on Tyrosinase ActivityHE Fang-ying,QIU Yu-ying,XU Lin-tong,QIU Jing-yao,SHEN Fang-yi,QI De-qiang(Zhejiang International Studies University,Zhejiang Hangzhou 310023,China)Abstract:In order to explore the inhibitory effect of flavonoids extract from celery on tyrosinase activity,theflavonoids was
4、 extracted from celery stalk,celery leaf,parsley stem and parsley leaf through optimization methods such asethanol extraction and enzymatic hydrolysis,and obtained that the yield of flavonoids from celery leaf was significantlyhigher than that from stem.The relative activity of tyrosinase was 81.18%
5、,29.32%,74.84%and 8.97%,and theinhibition rate was 18.82%,70.68%,25.16%and 91.03%,respectively.The results showed that celery leaves hadstronger inhibitory effect on tyrosinase activity than stems,which provided experimental basis for the extraction oftyrosinase inhibitors and theoretical basis for
6、the development of celery as a natural antioxidant and whitening agent.Key words:celery;flavonoids;extract;tyrosinase;inhibitory action酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)又名多酚氧化酶,在各种生物体内普遍存在,并且是生物体内黑色素合成的关键酶和限速酶。因此,抑制酪氨酸酶的活性,使黑色素减少或阻断其生成1,可用于预防和治疗与黑色素沉着有关的疾病,如黑斑病、黄褐斑等2。同时,酪氨酸酶抑制剂在多个领域都有广泛应用。有研究表明3,在食品加工方面,酪氨酸酶抑制剂可作
7、为一种保鲜剂,延长水果蔬菜的保质期;在农业方面,酪氨酸酶抑制剂可作为植物保护剂,用于农作物的害虫防治;在医药方面,酪氨酸酶抑制剂可用于治疗色素沉着疾病;在化妆品方面,酪氨酸酶抑制剂可用于身体美白4,因而酪氨酸酶抑制剂的开发在医疗美容、食品保鲜、农业害虫防治、生物抗菌等领域中都有着广阔的应用前景。虽然近年来国内外对酪氨酸酶抑制剂的研究已较为深入,但是由于对安全、环保以及成本等因素的考虑,目前只有少数抑制剂被应用于商业。因此,寻找绿色安全、来源丰富、高效价廉的天然酪氨酸酶抑制剂显得尤为必要5。芹菜作为一种两年生的伞形科植物,原产于地中海沿岸,引进后经历了两千多年历史的培育已在我国各地广泛分布。大量
8、研究表明6芹菜内含有多种有用的化学成分,其中就包括了维生素 C、糖类及芹菜素、芹菜苷等多种黄酮类化合物。另有研究发现7,芹菜黄酮提取物能够清除体内自由基,减少脂质过氧化物的含量,可降低血脂水平,对酪氨酸酶活性具有抑制作用。而我国芹菜资源丰富且价格低廉,提取工艺环保,因此芹菜资源具有较高的开发利用价值。目前,关于芹菜黄酮的提取以及其降血脂、抗氧化等方面已有较多研究文献,却少有对芹菜黄酮类提取物抑制酪氨酸酶活性作用效果的研究。因此,本研究将通过乙醇提取、醇解等优化方法来提取出芹菜中的黄酮化合物,并进行其对酪氨酸酶活性抑制作用的研究,为进一步提取并筛选新型酪氨酸酶抑制剂、开发天然抗氧化剂和美白剂原料
9、提供实验基础和理论依据。1 材料与方法1.1 材料与试剂香芹、西芹,购于杭州市西湖区菜市场;酪氨酸酶(500 U/mg),L-甲基多巴,芦丁标准品,纤维素酶(10000 U/g),95%100 广 州 化 工2023 年 5 月乙醇;亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠,以上试剂均为分析纯。1.2 仪器与设备FA2204 型电子分析天平,上海力辰仪器科技有限公司;DHG-9076A 型电热恒温鼓风干燥箱,上海精宏实验设备有限公司;DF-101ZF 型集热式恒温加热磁力搅拌器,杭州惠创仪器设备有限公司;UV-8000T 型紫外-可见分光光度计,上海元析仪器有限公司。1.3 实验方法1.3.1 样品处理将西
10、芹、香芹清洗干净,分别摘取茎和叶并切碎,分成西芹茎、西芹叶、香芹茎、香芹叶四组,置于65 烘箱中干燥8 h以上至烘干,用研钵研成粉末,过筛,放于四个大烧瓶中备用。1.3.2 黄酮标准曲线的制作本研究采用Al(NO3)3-NaNO2法8测定出黄酮含量:用电子分析天平精密称取0.0100 g 芦丁标准品,用配置好的60%乙醇溶解并定容至 100 mL 容量瓶中,最终得到 0.1 mg/mL 的芦丁标准溶液。用移液管精密吸取芦丁标准溶液 0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 各加入 6 只 10 mL具塞试管中,将 0 mL 的样品则作为对照组。之后在各试管
11、中均用移液管精确加入 60%乙醇溶液至 5 mL;用移液管精密吸取0.3 mL 的0.05 g/mL NaNO2溶液加入试管中,充分摇匀后静置6 min;再用移液管精密吸取0.3 mL 的0.05 g/mL Al(NO3)3溶液加入试管中,充分摇匀后,静置6 min;加入4.0 mL 的 1 mol/LNaOH 溶液,摇匀;最后加入 0.4 mL 蒸馏水充分摇匀后,静置20 min。分别将四组样品溶液置于紫外分光光度计中,在510 nm 处波长测定溶液吸光度。通过对比测定的结果,我们可以将标准液浓度 C(mg/L)作为 X 轴,吸光度 A510的值作为 Y轴,绘制出黄酮标准曲线。1.3.3 芹
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