口腔鳞状细胞癌中TRPV2的表达及其临床病理意义.pdf
《口腔鳞状细胞癌中TRPV2的表达及其临床病理意义.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《口腔鳞状细胞癌中TRPV2的表达及其临床病理意义.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15口腔鳞状细胞癌中TRPV2的表达及其临床病理意义王亚1 张林杰1 仵楠2 徐江2 代海涛21石河子大学医学院(新疆石河子832000);2石河子大学第一附属医院口腔科(新疆石河子832000)【摘要】目的探究口腔鳞状细胞癌(OSCC)中TRPV2的表达及其临床病理意义。方法免疫组化及Western blot检测TRPV2在OSCC中的表达水平,Pearson 2 检验分析TRPV2表达与OSCC患者临床病理的关系,Log-rank检验分析TRPV2对生
2、存期的影响。生物信息学方法探索TRPV2的潜在生物学功能,及免疫组化验证TRPV2与巨噬细胞浸润水平的关系。结果免疫组化及Western blot证实TRPV2在OSCC中高表达(P 0.05),且TRPV2高表达与OSCC患者T分期、肿瘤组织学分级、预后不佳具有相关性(P 0.05)。生物信息学方法发现TRPV2参与PI3K/AKT等通路及调控免疫细胞浸润水平,免疫组化验证TRPV2高表达与巨噬细胞浸润水平呈正相关(R=0.562,P 0.001)。结论TRPV2在OSCC中高表达且与预后不佳相关,可通过PI3K/AKT等通路及调控巨噬细胞免疫浸润水平参与OSCC的发生及发展。【关键词】口腔
3、鳞状细胞癌;transient receptor potential vanilloid type-2;预后;富集分析;免疫浸润【中图分类号】R739.8Expression and clinical significance of TRPV2 in oral squamous cell carcinoma WANG Ya*,ZHANG Linjie,WU Nan,XU Jiang,DAI Haitao.*School of Medicine,Shihezi University,Shihezi 832000,China Corresponding author:DAI Haitao Emai
4、l:【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of TRPV2 and its clinicopathological significance in oral squamous cell carcinoma(OSCC).MethodsImmunohistochemistry and western blot were used to detect TRPV2 expression level in OSCC;Pearson 2 test to analyze the association between TRPV2 expression le
5、vel and clinicopathological features of OSCC patients;log-rank test to analyze the effect of TRPV2 on survival.Bioinformatics method was used to explore the potential biological function of TRPV2,and immunohistochemistry to verify the relationship between TRPV2 and macrophage infiltration level.Resu
6、ltsImmunohistochemistry and western blot confirmed that TRPV2 was highly expressed in OSCC(P 0.05).TRPV2 expression was significantly correlated with T stage,tumor histological grade and poor prognosis(P 0.05).Bioinformatics method found that TRPV2 participated in PI3K/AKT pathway and regulated the
7、level of immune cell infiltration;TRPV2 expression had strong positive correlation with the macrophage infiltration level(R=0.562,P 52)、各种配体和机械应力激活2。TRPV2 广泛表达,已被证实在不同类型的癌症中发挥重要作用,参与癌细胞的凋亡、增殖和转移等3。另外 TRPV2 可被大麻素等抗肿瘤药物激活,进而发挥抑癌作用4-5。其家族成员TRPV4已被证明在口腔牙龈瘤及OSCC中高表达且与预后不佳相关6-7,但是分布最为广泛的成员TRPV2目前在OSCC中的表达
8、及所发挥的作临 床 研 究doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2023.15.010基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号:82160572);石河子大学校级科研项目资助项目(编号:zzzc202194)通信作者:代海涛 E-mail:1913实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15用尚不明确。因此,本实验使用免疫组织化学及Western blot实验探索了TRPV2在OSCC中的表达水平,并探讨了其与OSCC患者临床病理特征及预后的关系。最后,还进行了GSEA及GO
9、富集分析及免疫浸润分析,以进一步了解 TRPV2 在 OSCC发病机制中的生物学作用,以期为后期临床应用提供可靠的理论依据。1资料与方法1.1一般资料选取2012-2020年间在石河子大学第一附属医院确诊为 OSCC 的石蜡包埋组织标本 129 例,另外选取配对癌旁组织 50 例,依据AJCC 分期第 8 版划定 TNM 分期,伦理审批号:KJX-2021-002-01。随访时间从手术日起,截止到2022年11月31日或死亡日期。OSCC细胞系(Cal-27、Scc-15)来自美国典型培养物保藏中心(ATCC),正常口腔角质细胞(HOK)来自北纳生物。1.2方法1.2.1免疫组化采用EnVis
10、ion两步法检测OSCC中TRPV2、巨噬细胞蛋白CD68表达水平。由 2 名中级以上职称病理医师采用双盲法进行评定,TRPV2、CD68 定位于细胞膜和(或)细胞浆中。细胞染色程度(未着色=0,浅黄色=1,黄色=2,棕黄色=3),阳性细胞百分率(0%5%=0,6%25%=1,26%50%=2,51%75%=3,76%100%=4)。根据细胞染色程度和阳性细胞百分率得分乘积计为总分:4分标记低表达组,4分标记高表达组。1.2.2Western blot检测将细胞在RIPA裂解缓冲液中裂解,提取细胞总蛋白。通过SDSPAGE电泳将总蛋白进行分离后转移到PVDF膜上。抗体封闭液封闭30 min,T
11、RPV2抗体(1/500)4 过夜孵育,室温下二抗孵育2 h。使用ECL化学发光系统进行显影,于暗室中暴露于X射线胶片。使用Image J软件测蛋白灰度值。目的蛋白相对表达量=目的蛋白灰度值/内参灰度值。1.2.3生物信息学方法使用 R(4.2.1)采用 DESeq2 R 包从 TCGA 数据库中获取 320 例 OSCC 中TRPV2的差异表达基因用于功能富集分析。使用GEOquery 2.64.2 从 GEO 数据库中下载共 264 例OSCC 芯片表达数据(GSE30784、GSE41613,平台GPL570),将样本以TRPV2表达中位数分为高低表达组,使用 limma 3.52.2
12、进行差异分析获取差异基因,使用ClusteProfiler 4.4.4 包实施GO 功能分析及GSEA通路富集分析。GSEA选择MSigDB集合中的 c2.cp.all.v2022.1.Hs.symbols.gmt 作为参考基因集合。对 TCGA 中 OSCC 数据,使用 GSVA R包(4.2.1)的ssGSEA算法将TRPV2与24种免疫细胞进行免疫浸润相关性分析。1.3统计学方法对所有数据使用 R(4.2.1)及Graphpad prism 8 进行统计学分析,采用 Mann-Whitney U 检验来分析非配对样本之间的表达水平差异。使用 Pearson 2检验分析 TRPV2 表达与
13、OSCC临床病理特征及免疫细胞浸润之间的关联。经 Log-rank 检验分析 TRPV2 表达 OSCC 患者术后总生存时间之间的关系,并构建Kaplan Meier生存曲线。以P 0.05为差异有统计学意义。2结果2.1TRPV2表达情况免疫组化检测TRPV2主要在胞质及细胞膜中显色,OSCC组织中TRPV2的阳性表达率为81.4%(105/129),癌旁组织中为32.0%(16/50)(图1A-B),差异有统计学意义(P 0.001)。Western bolt 实验发现在 OSCC 细胞系 Scc-15、Cal-27中TRPV2表达显著高于口腔正常角化上皮细胞HOK,差异有统计学意义(P
14、0.05),但与病理学分级(P=0.031,2=4.636)及肿瘤直径范围 T 分期(P=0.024,2=5.109)有着密切关联。见表1。2.3TRPV2高表达与预后不良结局相关在129例OSCC 患者中获得 118 例完整的预后随访信息。Log-rank生存分析比较OSCC中TRPV2表达与患者预后的关系,结果显示 TRPV2 高表达 OSCC 者生存时间较低表达组显著缩短,TRPV2高表达OSCC患者预后不佳(P=0.015,HR=2.697,图2)。HOK Scc15 Cal27TRPV282 kDactin42 kDHOK Scc15 Cal272.01.51.00.50.0TRPV
15、2蛋白相对表达ABCD 注:A,TRPV2在OSCC组织中高表达,40;B,TRPV2在癌旁组织中低表达,40;C、D,TRPV2 在 OSCC 细胞 Scc-15、Cal-27 表达高于正常口腔角化上皮HOK图1TRPV2在口腔鳞状细胞癌中的表达Fig.1Expression of TRPV2 in oral squamous cell carcinoma1914实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.152.4GO 及 GSEA 信号通路分析GSEA 通路富集发现TRPV2在OSCC中主要参
16、与细胞因子与细胞因子受体相互作用、PI3K/AKT、横纹肌收缩途径、Sarscov 2参与的免疫反应、同种异体移植排斥反应等通路(图3A、3B),GO富集分析主要在白细胞介导的免疫、T 细胞参与的免疫反应、淋巴细胞参与的免疫反应、质膜外侧及免疫受体活性等(图3C、3D)。2.5TRPV2表达与免疫细胞浸润的相关性GO及GSEA富集分析发现TRPV2与免疫反应具有密切相关性,所以基于TCGA数据库研究了OSCC中TRPV2表达与免疫细胞浸润的关系。结果显示,TRPV2的表达与巨噬细胞、树突状细胞、辅助型T细胞1、T细胞、调节性T细胞这5种免疫调节细胞的浸润水平呈强正相关(R 0.6,P 0.00
17、1,图4A)。进一步探索 OSCC 中 TRPV2 表达对免疫细胞浸润的影响,将TRPV2 mRNA依据中位数分为高、低表达组,以探究免疫细胞浸润水平的表达差异。结果发现,上述 5 种具有强相关的免疫细胞的浸润水平具有显著性差异(图4B)。结果还表明,TRPV2表达与NK CD56 bright cells、效应记忆T细胞、Tgd这三种细胞不相关。2.6TRPV2与巨噬细胞免疫浸润的关系通过对90 例同一 OSCC 组织进行免疫组化验证,结果提示TRPV2高表达伴随高的巨噬细胞蛋白CD68 浸润表达水平,差异分析具有统计学意义(R=0.562,P 60岁 60岁病理分级 高 中-低T分期 T3
18、-T4 T1-T2淋巴结转移 N+N0TNM分期-例数6960863383465970291006663TRPV2高表达58(45)47(36.4)81(62.8)24(18.6)63(48.8)42(32.6)53(41.1)52(40.3)24(18.6)81(62.8)57(44.2)48(37.2)低表达11(8.5)13(10.1)15(11.6)9(7)20(15.5)4(3.1)6(4.7)18(14)5(3.9)19(14.7)9(7)15(11.6)P值0.4050.1380.0310.0240.8300.1382值0.6952.2004.6365.1092.2022.203
19、低表达高表达HR=2.694(1.453 4.992)Logrank P=0.0150255075100125时间(月)1.00.80.60.40.20.0总生存率(OS)图2TRPV2蛋白表达与OSCC患者预后的关联Fig.2Association of TRPV2 protein expression withthe prognosis of OSCC patients1915实用医学杂志 2023年第39卷第15期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.15本研究具有一致性,TRPV2在多数肿瘤中与肿瘤组织学分级具有相关性。目前
20、研究表明,TRPV2 高表达是各种肿瘤的不良预后生物标志物,所以实验进一步分析TRPV2表达与 OSCC 预后的关系,在 112 例随访的 OSCC患者中发现,TRPV2高表达患者的生存期显著缩短,预后不佳。另有多项研究都表明TRPV2与预后密切相关,包括在子宫内膜癌,肺癌、乳腺癌、胶质母细胞瘤、消化系统肿瘤、血液肿瘤8-15等都发现TRPV2高表达患者预后不佳。这与本研究结果相同,证明了TRPV2是OSCC中具有预后价值的新型生物标志物。TRPV2作为调节Ca2+通道的因子,在导致肿瘤发展的各种生物学功能如迁移、侵袭及增殖凋亡方面发挥重要作用。但目前尚无研究发现TRPV2在 OSCC 中所具
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 口腔 细胞 TRPV2 表达 及其 临床 病理 意义
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。