体外培养细胞的一种简便计数方法.pdf
《体外培养细胞的一种简便计数方法.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《体外培养细胞的一种简便计数方法.pdf(5页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、h t t p:/bnxb cbp k do i:10.13473/k i.issn.1002-3186.2023.0221北京农学院学报 2023,38(2):116-120 Jo u rnal o f Beijing Universit y o f Agricu l t u re体外培养细胞的一种简便计数方法陈甲美1,代婉婉2,吴艳梅1,宋晓晓1,张 涛*(1.北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京102206;2.山西农业大学动物医学学院,太谷030801)摘 要:【目的】介绍一种利用数码显微镜进行细胞计数的简便方法。【方法】体外分离培养猪肺微血管内皮细 胞(
2、micro vascu l ar endo t h el ial cel l s,MVECs)和猪外周血中性粒细胞,利用数码显微镜对不同密度的2种细胞 进行计数,并与利用自动细胞计数仪和血细胞计数板的计数结果比较,分析其计数结果准确性、计数效率和绘 制细胞生长曲线情况。【结果】计数不同密度水平的细胞时,数码显微镜计数法与细胞计数仪法的结果均无显著 性差异,对MVECs计数结果的变异系数低于中性粒细胞;计数MVECs用时少于细胞计数板法和细胞计数仪 法,计数中性粒细胞时用时多于另外2种方法;3种方法绘制的细胞生长曲线呈趋势一致性,数码显微镜计数法 与细胞计数板法、细胞计数仪法的相关系数分别为0.
3、994和0.990。【结论】数码显微镜细胞计数法是一种便捷、易操作、准确、省时且不增加试验成本的计数方法,尤其适合于贴壁型细胞的原位计数,值得在细胞试验中推 广应用。关键词:数码显微镜;细胞计数板;细胞计数仪;微血管内皮细胞;中性粒细胞 中图分类号:Q2-33;S-3 文章编号:1002-3186(2023)02-0116-05 文献标志码:ASimple c ount ing met h od for t h e densit y of c ult ured c ells in vit roCHEN Jiamei1,DAI Wanwan2,WU Yanmei1,SONG Xiao xiao1
4、,ZHANG Tao1*(1.Beijing Key Labo rat o ry o f Tradit io nal Ch inese Vet erinary Medicine,Animal Science and Tech no l o gy Co l l ege?Beijing Universit y o f Agricu l t u re,Bejing 102206,Ch ina?2.Co l l ege o f Vet erinary MedicineSh anxi Agricu l t u re Universit y,Taigu 030801,Ch ina)Abst rac t:O
5、bject ive To int ro du ce a simp l e met h o d fo r cel l co u nt ing u sing t h e digit al micro sco p e(DM).Met h o ds Po rcine l u ng micro vascu l ar endo t h el ial cel l s(MVECs)and neu t ro p h il s were sep arat ed and cu l t u red in vit ro.Th ey were co u nt ed u sing t h e DM,and t h eir
6、accu racy,co u nt ing t imes and t h e gro wt h cu rve p l o t t ing were co mp ared t o t h o se fro m t h e cel l co u nt ing ch amber(CCC)and t h e cel l co u nt er(CC).Resu l t s Wh en co u nt ing t h e cel l s at different densit ies,t h ere were no significant difference bet ween t h e resu l
7、t s u sing t h e DM and CC,and t h e variabl e co efficient s o f MVECs were l o wer t h an t h at o f neu t ro p h il s.Th e t ime co u nt ing MVECs u sing t h e DM was sh o rt er t h an t h at u sing t h e CCC o r CC,wh il e t h e t ime co u nt ing neu t ro p h il s u sing t h e DM was mo re t h a
8、n t h at u sing t h e CCC o r CC.Mo reo ver,t h e gro wt h cu rves o f MVECs fro m t h ree met h o ds were in agreement,and t h e co rrel at io n co efficient s bet ween t h e DM and CCC and CC were 0.994 and 0.990,resp ect ivel y.Co ncl u sio n Th e DM co u nt ing met h o d is co nvenient,maneu ver
9、abl e?accu rat e,t ime-saving,and co st l ess.It is esp ecial l y su it abl e fo r co u nt ing adh erent cel l s,and deserves t o be p o p u l arized in cel l exp eriment s.Keywords:digit al micro sco p e;cel l co u nt ing ch amber;cel l co u nt er;micro vascu l ar endo t h el ial cel l s;neu t ro p
10、 h il体外细胞培养时,细胞计数对于确定最佳传代 条件、评价细胞增殖水平、分析细胞生长状况等均收稿日期:2023-02-07基金项目:国家自然科学基金资助项目(32273050)第一作者:陈甲美(1998),女,河南省淅川县人,硕士研究生,研究方向为中兽医学,E-mail:2606126437q q.co m通信作者:张涛(1980),河南省夏邑县人,副教授,博士,研究方向为中兽药防治动物疾病的机制,E-mail:zh an-gt ao bu 2023年第2期陈甲美等:体外培养细胞的一种简便计数方法117有重要意义。当前,实验室常用的细胞计数方法是 细胞计数板法和细胞计数仪法m幻,前者方法简
11、单、成本低廉,但贴壁生长细胞需要事先消化脱壁,不 适于对同一板细胞连续多次计数,而且操作费时、结果受操作的影响较大;后者操作省时,计数结果 准确,但是需购买专门的细胞计数仪,而且一次性 细胞计数板的购置增加试验成本,亦不能对贴壁生 长细胞进行原位计数。流式细胞仪等其他仪器设 备虽也可以进行细胞计数,但价格昂贵,主要用于 细胞分选和功能分析。数码显微镜是细胞培养室普遍配备的一种仪 器设备,不仅用于观察细胞,也能对细胞拍照后进 行长度和面积的测量等。在试验过程中,将数码显 微镜分析技术应用于细胞计数,给相关试验带来了 便利。就此介绍利用数码显微镜进行细胞计数的 操作方法,及其计数结果与细胞计数板和
12、细胞计数 仪进行比较,以供相关人员试验时参考采用。1材料与方法1.1材料主要仪器:倒置数码显微镜(Ol ymp u s,型号 1X71)、自动细胞计数仪(Bio-Rad,型号TC20)、血 细胞计数板(上海市求精生化试剂仪器有限公司,型号02270113)、细胞培养箱(Sanyo,型号MCO-17AC),超净工作台(苏州净化设备有限公司,型号 SW-CJ-IFD)等。主要试剂:胎牛血清(SORFA,货号SX3000),DME M 培养基(Gibco,货号 H2387),RPMI 1640 培养基(Gibco,货号C11875500BT),胰蛋白酶-EDTA溶液(So l arbio,货号P73
13、40),台盼蓝染液(So l arbio,货号 T8070)等。细胞:猪肺微血管内皮细胞(micro vascu l ar endo t h el ial ce l l s,MVECs)由兽医学(中医药)北京市 重点实验室参照前述方法分离培养;猪外周血中 性粒细胞分离自约1月龄仔猪静脉血,参照文献报 道方法固。以此2种细胞分别代表贴壁细胞和悬浮 细胞,分析其利用数码显微镜计数的效果。猪肺 MVECs在用数码显微镜拍照用于计数后,立即用 0.05%胰蛋白酶-0.005%EDTA溶液消化脱壁,离 心后重悬于一定体积的PBS,制备单细胞悬液,用于 计数板计数或细胞仪计数。1.2方法1.2.1 数码显
14、微镜计数法 将细胞培养板置于倒 置数码显微镜下,每孔细胞随机选择3个以上视野,采用DP2-BSW图像采集处理系统拍照,利用图像 采集处理系统的“面积测量”功能,每张数码照片随 机选择3个以上区域,每个区域的面积不少于 100 000 p m?,计数选区内的细胞数,对选区边界线 上的细胞全部计数后除以2M。以每个视野3个选 区的总面积和总细胞数,计算每100 000 Mm2面积 内细胞的平均数,将其乘以103得每cm?的细胞数,根据细胞板每孔的底面积,计算每孔内的细胞总数。1.2.2计数板计数法 计数板法参考相关文献 待检单细胞悬液用台盼蓝溶液染色后,吸取10 滴加于细胞计数板,计数4个大方格内
15、的细胞数,细 胞团按单个细胞计算,大方格边界线上的细胞全部 计数后除以2,按下面公式计算细胞的单位体积密 度。细胞悬液内的细胞数/mL=4个大方格内细胞 总数/4X10 000。1.2.3 细胞计数仪计数法 将待检细胞悬液与台 盼蓝溶液混匀、染色,滴加于1次性计数板,插入细 胞计数仪,读取并计算细胞的数量或单位体积密度。细胞计数时每组设3孔重复,细胞密度以“平均 值士标准差”表示,数据采用Micro so ft Exce l软件 中“数据分析”工具进行“检验”统计分析,以PV 0.05示为具有统计学显著性差异。2结果2.1数码显微镜计数法的计算示例利用数码显微镜对细胞拍照,用图像处理软件 的测
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 体外 培养 细胞 一种 简便 计数 方法
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。