苦杏仁苷测定前处理条件的比较优化.pdf
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1、为填补苦杏仁中苦杏仁苷测定的前处理条件研究的空白,通过比较不同去皮工艺下对苦杏仁苷含量的影响,确定了苦杏仁苷测定过程中宜选用的去皮方法。“杀酶保”作为前处理过程的核心工艺,对比不同灭酶工艺对苦杏仁中-葡萄糖苔酶的灭酶效果,确定苦杏仁苷测定前处理中宜采用的灭酶工艺,利用响应面试验进一步优化。结果表明:浸泡去皮为苦杏仁苷测定的最佳去皮方法,苦杏仁的损失最低,蒸汽灭酶工艺能够最好地达到“杀酶保苷”的效果。响应面试验确定了蒸汽灭酶的最佳工艺参数为:蒸汽温度117,蒸汽时间31min,蒸汽流量12 m/h,可将苦杏仁中-葡萄糖苷酶活性降低为0.6 5510 U/g,苦杏仁苷含量为5.0 3%。本研究为苦
2、杏仁的测定过程安全性评价和苦杏仁菩含量测定提供重要的理论依据。关键词:苦杏仁苷;前处理条件;蒸汽灭酶中图分类号:TS201.1文献标志码:A文章编号:16 7 4-4942(2 0 2 3)0 2-0 2 0 5-0 7Comparative Optimization of Pretreatment Conditions for theDetermination of AmygdalinGUO Penghui,ZHANG Qingan,LONG Feifei,SONG Lei(School of Food Engineering and Nutrition Sciences,Shaanxi N
3、ormal University,Xian 710119,China)Abstract:In order to fll the blank of the pretreatment conditions of amygdalin in apricot kernel,the suitable peeling meth-od for the determination of apricot kernel were confirmed by comparing the content change of amygdalin in different peelingprocesses.Enzyme ki
4、lling and glycoside protection was the core technology in the pretreatment process of apricot kernel.By comparing the effects of different enzyme killing processes on-Glucosidase in apricot kernel,the appropriate enzymeinactivation process in the pretreatment of amygdalin determination were confirme
5、d,and the further optimization was con-ducted by response surface experiment.The results showed that soaking peeling was the most suitable method for the deter-mination of amygdalin.The decrease of amygdalin was the lowest,and the steam sterilization process could achieve the ef-fect of killing enzy
6、me and protecting glycoside.The best process parameters for steam inactivation of enzyme were deter-mined by response test.The experiment results showed the optimal conditions of steam temperature 117 C,steam time 31min and steam flow 12 m/h,-Glucosidase activity decreased to 0.655x105 U/g,and the c
7、ontent of amygdalin was 5.03%.It provides an important theoretical basis for the safety evaluation of the determination process of apricot kernel and the truecontent of amygdalin.Keywords:amygdalin;pretreatment conditions;steam inactivation收稿日期:2 0 2 3-0 3-0 1基金项目:内蒙古鄂尔多斯市科技重大专项(2 0 2 2 EEDSKJZDZX02
8、2)第一作者:郭鹏辉(1999一),河南三门峡人,硕士研究生,研究方向为农副产品深加工及资源化利用。E-mail:*通信作者:张清安(197 6 一),河南南阳人,教授,研究方向为农副产品深加工及资源化利用。E-mail:q i n g a n z h a n g s n n LXO2062023年海南师范大学学报(自然科学版)苦杏仁苷是一种常见的氰苷类物质,又名维生素B17,广泛存在于李子、桃仁、杏仁等蔷薇科果实籽粒中,尤其在苦杏仁和扁桃仁中含量较多1-2。作为苦杏仁中特有的成分,除了含量较多的苦杏仁苷,还有具有活性特性的酶(-葡萄糖苷酶),以及野樱苷和与其关联的异构体等3。张馨予研究-葡萄
9、糖苷酶在苦杏仁脱苦及增香作用中发现,该酶可将苦杏仁苷分解生成氢氰酸和苯甲醛,从而影响苦杏仁苷含量的变化4。在传统的中国药典中采用银量法,以硝酸银滴定液滴定吸收的氢氰酸含量计算得出苦杏仁苷含量5。目前使用较多的测定方法为色谱法或光谱法,如高效液相色谱法6 、紫外分光光度法7 、薄层扫描法8 及酶联免疫法等9。这些方法分离效率高,分析速度快,检测限度低,已经取代传统的银量法为苦杏仁苷的主要检测手段。吴迪采用HPLC法与电泳色谱法测定苦杏仁苷7 ,测定结果较为准确,操作简单、快捷,因此HPLC法作为本研究测定苦杏仁苷的方法。在现有的苦杏仁苷的检测方法中尚无统一的标准方法,虽然采取的检测手段众多,但对
10、于苦杏仁的前处理方法很少具体描述。在可查询到的诸多文献中,测定苦杏仁苷的前处理操作各不相同9-12 。市售的苦杏仁都含有皮,在测定过程中应用的去皮方法是否会对苦杏仁苷的含量造成影响没有文献特别提及。为了避免内源酶对苦杏仁苷的分解,传统中药学中苦杏仁在人药时要先炮制3,炮制方法众多,现代炮制原理是“杀酶保苷”14,但在测定苦杏仁苷的过程中并没有涉及到测定前对苦杏仁中内源酶的考量。通过对比分析不同检测方法发现,苦杏仁苷的测定方法前处理工艺中,不同去皮和处理条件对苦杏仁中酶活性的影响和苦杏仁苷的含量有显著差异。因此,有必要系统研究样品处理方法对苦杏仁苷含量测定的影响,从而为苦杏仁苷含量的测定方法的构
11、建提供依据。本研究旨在确定最适合苦杏仁苷测定的去皮和灭酶工艺,为测定苦杏仁苷的前处理提供指导。1材料与方法1.1原料与试剂原料:苦杏仁,购于西安市西北药材市场同盛恒祥药材行,4冷藏保存。试剂:甲醇(色谱级),美国FisherScientific公司;苦杏仁苷标准品,成都普菲德生物技术有限公司;纯净水,杭州娃哈哈集团有限公司;-葡萄糖苷酶试剂盒,咸阳市秦都区博生商行1.2仪器与设备BS224S电子天平,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;10 1电热鼓风干燥箱,北京科伟永兴仪器有限公司;P230分析型高效液相色谱仪,大连依利特分析仪器有限公司;SB-500DTY超声波多频清洗机,江苏省昆山市超声
12、仪器有限公司;JYL-CO2OE九阳料理机,山东九阳股份有限公司;SHZ-D()循环水式多用真空泵,杭州仪表电机有限公司;HH-S4型电热恒温水浴锅,上海安亭科学仪器厂;SK2INUSE28TROIA蒸汽烤箱,德国CONVOTHERM公司;TGL-16冷冻离心机,广东志高精密机械有限公司;TU-1810紫外分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司2实验方法2.1去皮方法的选择选取4组颗粒饱满的杏仁(每组50 粒),烘箱干燥至恒重后,分别进行如下处理:A(浸泡去皮法):1:2(w:)的料液比加水浸渍5h,手动揉搓去皮。B(热烫去皮法):1:10(w:v)的料液比加水烫漂5min,手动揉搓去皮15
13、C(饱和热蒸汽去皮法):1:2(w:)料液比加水浸渍2 0 min,放入蒸汽烤箱中进行蒸汽处理,6 min后取出,手工揉搓去皮16 D.不主皮2.2灭酶工艺的选择对于去皮后的苦杏仁,选用如下方法处理:I(婵法):苦杏仁于10 倍沸水中煮沸5min,?水浸泡l17)图207第2 期郭鹏辉,等:苦杏仁苷测定前处理条件的比较优化I(蒸汽法):将杏仁均匀放置汽烤箱中,95开始计时,蒸汽温度到达10 0 后维持30 min,取出即可13。(热压蒸汽法):将苦杏仁置于热压灭菌柜中,内抽真空,压强达到0.1MPa迅速升温将酶灭掉,取出冷却8 IV(微波法):将苦杏仁放置于容器中,微波炉中高火档加热4min(
14、炉内温度约为95 110),取出后冷却92.3苦杏仁苷检测标准方法的建立苦杏仁苷含量的测定条件参照文献4,-葡萄糖苷酶活性测定参照文献2 0 ,根据对上述前处理操作的分析与处理,在探究合适的去皮方法、灭酶工艺后,经高效液相色谱仪检测,建立准确合理、安全可靠的苦杏仁苷分析方法,得到测定平均值与相对标准偏差(RSD),并与理论添加值比对,分析苦杏仁苷测定方法的重复性、精密度和加标回收率。2.4数据处理使用SPSS(SPSS26.0)通过Duncan检验确定显著性水平(P0.05)。使用Origin2021(O r i g i n L a b)绘3结果与分析3.1不同去皮方法和灭酶方式对苦杏仁中苦杏
15、仁苷含量和-葡萄糖苷酶活性的影响如图1所示,带皮苦杏仁中苦杏仁苷含量为5.10 3%,与高颖等所测的全国各地苦杏仁中苦杏仁苷的含量几乎一致。在未经过处理的苦杏仁中,除了特殊产地外,中国所产苦杏仁中苦杏仁苷含量为4%6%1,苦杏仁中的-葡萄糖苷酶活性为3.5410 5U/g。采用浸泡去皮法去皮时,苦杏仁苷含量为4.8 0 7%,-葡萄糖苷酶的活性也减少至2.98 x105U/g,苦杏仁中苦杏仁苷会部分迁移到水中。此外,苦杏仁皮中含有部分苦杏仁苷2 2)。相较于热烫去皮法和饱和热蒸汽法去皮,浸泡去皮法造成的苦杏仁苷损失最少,浸泡去皮法的缺点为去皮率相对较低,耗时时间较长。热烫去皮后的苦杏仁苷含量为
16、3.197%,-葡萄糖苷酶的活性为2.98 10 U/g。高温不仅会导致苦杏仁苷的分解,也会加速苦杏仁苷的迁移过程,加快-葡萄糖苷酶的失活,这一结论与申辉的研究结果一致5)。而经过饱和热蒸汽法去皮的苦杏仁,苦杏仁苷含量为4.6 43%,-葡萄糖苷酶的活性为2.6 910 5U/g,酶活性和苦杏仁苷含量的损失对比热烫去皮的苦杏仁有所下降,这可能是因为水蒸气的穿透作用小于热水烫漂带来的分子迁移2 3。为了最大程度地减少苦杏仁苷的损失,在测定苦杏仁苷含量时,宜选择浸泡去皮方法,在工业生产中,可以考虑饱和热蒸汽法和热烫去皮法进行工业去皮。66苦杏仁苷苦杏仁苷含量5.103(8/501x)/县-8-葡萄
17、糖苷酶活性54.807-葡萄糖苷酶活性4.6434.644.22443.93.542.983.1973.233.0632.692.4421.8821.5610.530.520.70不去皮浸泡去皮法热烫去皮法饱和热蒸汽去皮0煮沸灭煮沸灭酶蒸汽灭酶微波灭酶热压蒸汽灭酶去皮方式5min10min灭酶方式图1不同去皮方式和灭酶方式对苦杏仁苷含量和-葡萄糖苷酶活性的影响Figure1EEffect of different peeling and enzyme killing methods on amygdalin content and-Glucosidaseenzymeactivity无论是测定苦
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