双酚S对秀丽隐杆线虫精子生成相关基因表达的影响.pdf
《双酚S对秀丽隐杆线虫精子生成相关基因表达的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《双酚S对秀丽隐杆线虫精子生成相关基因表达的影响.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、1 8 3CARCINOGENESIS,TERATOGENESIS&MUTAGENESIS论著癌变畸变突变2023 年 5 月第 35 卷第 3 期双酚S对秀丽隐杆线虫精子生成相关基因表达的影响唐娇1,2,谭剑斌2,#,茅莉娜3,张紫虹2,李文立2,胡帅尔2,赵敏2,*(1广东省公共卫生研究院健康风险评估研究室,广东广州511430;2广东省疾病预防控制中心卫生毒理所,广东广州511430;3广东省生物制品与药物研究所药理研究室,广东广州510440)Effects of bisphenol S onexpression of spermiogenesisgenes in C.elegansT
2、ANG Jiao1,2,TAN Jianbin2,#,MAO Lina3,ZHANG Zihong2,LI Wenli2,HU Shuaier2,ZHAO Min2,*(1.Institute of Health Risk Assessment,Guangdong Provincial Instituteof Public Health,Guangzhou 511430;2.Institute of Toxicology,Guangdong Provincial Center for Disease Control and Prevention,Guangzhou 511430;3.Depar
3、tment of Pharmacological Research,Guangdong Provincial Institute of Biological Products andMateria Medica,Guangzhou 510440,Guangdong,China)收稿日期:2022-11-03;修订日期:2023-04-17基金项目:广东省医学科学技术研究基金(A2019562,C2019055);广东省中医药局科研项目(20201042,20202026,20212028)作者信息:唐娇,E-mail:;#并列第一作者,谭剑斌,E-mail:tan-。*通信作者,赵敏,E-ma
4、il:。【摘要】目的:探讨双酚S对模式生物秀丽隐杆线虫精子生成相关基因表达的影响。方法:根据双酚S的急性毒性试验结果确定本研究剂量为0、3、30、300 mol/L,对同步化至L4期的线虫进行24 h暴露,测定其子代数目并用实时荧光定量PCR(qPCR)检测akt-1、swm-1、try-5、spe-4、spe-6 基因表达水平。结果:秀丽隐杆线虫于双酚 S 中暴露 24 h 后,其半数致死浓度(LC50)为2 773.672 mol/L;与对照组相比,暴露后的L4期秀丽隐杆线虫在双酚S剂量为3、30、300 mol/L时子代数目均显著降低(P0.05或P0.01);akt-1 mRNA在3
5、mol/L时的表达水平升高(P0.05);swm-1、try-5、spe-4、spe-6 mRNA在30和300 mol/L时表达水平均升高(P0.05或P0.01)。结论:双酚S对秀丽隐杆线虫精子生成相关基因表达有影响。【关键词】秀丽隐杆线虫;双酚S;精子生成;模式生物中图分类号:R994.6文献标志码:A文章编号:1004-616X(2023)03-0183-04doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2023.03.004【ABSTRACT】OBJECTIVE:To investigate effects of bisphenol S on expression of
6、spermiogenesis genes inCaenorhabditis elegans(C.elegans).METHODS:Nematodes at L4 stage were exposed to bisphenol S for 24 h(with the concentrations of 0,3,30,300 mol/L based on the acute toxicity test),brood size and expressionlevels of akt-1,swm-1,try-5,spe-4 and spe-6 genes were detected by real-t
7、ime fluorescence quantitativePCR.RESULTS:After the 24 h exposure to bisphenol S,the LC50was determined to be 2 773.672 mol/L.Compared to the control group,exposure with the concentrations of 3,30 and 300 mol/L significantlyreduced the brood size(P0.05 or P0.01).In addition,the mRNA level of akt-1 wa
8、s increased at theconcentration of 3 mol/L(P0.05);the expression level of swm-1,try-5,spe-4 and spe-6 mRNA wereincreased in the 30 and 300 mol/L treatment groups(P0.05 or P0.01).CONCLUSION:Expressions ofspermiogenesis genes in C.elegans were affected from exposure to bisphenol S.【KEY WORDS】Caenorhab
9、ditis elegans;bisphenol S;spermiogenesis;model organism双 酚 S 化 学 名 称 为 4,4-磺 酰 基 二 苯 酚(4,4-sulfonyldiphenol,BPS),是双酚 A 的结构类似物。毒理学研究和人群流行病学调查证明双酚A具有雌激素作用,对生殖系统、肝脏具有一定损伤作用1,被禁止用于食品包装材料2-3,双酚S由于具有耐热、耐光、抗氧化等性能而成为双酚A最普遍的替代物用于食品包装材料4。然而,近年研究发现,在油脂、酸性或外界环境的影响下,包装材料中的双酚S极易迁移至食品中,导致人体生物样本中双酚S的检出率逐年上升,人群暴露水平呈
10、递增趋势5。双酚S的安全性及人群暴露风险受到越来越多的关注。秀丽隐杆线虫由于遗传背景清晰,与人类基因同源性高,符合国际要求的“3R”原则等多种优点,成为评价食品毒理效应及机制探讨的理想模式生物6。因此,本实验以秀丽隐杆线虫为研究对象,探讨双酚S对线虫精子生成相关基因表达的影响,为双酚S的安全性研究资料提论著癌变畸变突变1 8 4CARCINOGENESIS,TERATOGENESIS&MUTAGENESISVol.35No.3May 2023供有益补充。1材料与方法1.1主要材料和仪器设备双酚 S(CAS:80-09-1)购自阿拉丁公司,纯度99%;秀丽隐杆线虫N2野生型、大肠杆菌OP50由华
11、南农业大学植物病理学教研室惠赠;Trizol 试剂、cDNA反转录试剂盒、SYBR Green半定量PCR试剂盒购自碧云天生物技术有限公司;CFX96 Touch实时荧光 定 量 PCR(quantitativereal-time,qPCR)仪(Bio-Rad,美国);生化培养箱(ZHUJIANG LRH-250A)购于广东泰宏君公司;电热恒温培养箱(DHP-9052)购于中仪国科(北京)科技有限公司;涡旋振荡器(IKA,德国);高速离心机(Thermo Fisher Scientific,美国);体视显微镜(Nikon SMZ745,日本);细胞组织破碎仪(Bullet Blender Go
12、ld,Next Advance,美国)。1.2试验方法1.2.1剂 量 设 计将 双 酚 S 溶 解 于 二 甲 基 亚 砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)中,根据试验设计配置浓度分别为5 000、2 000、200、20、2 mol/L的双酚S溶液,溶液中DMSO的终浓度全部为0.2%,进行急性毒性试验,求得半数致死浓度(lethal concentration50%,LC50)后,以1/1 000、1/100和1/10的LC50浓度分别为约3、30和300 mol/L进行子代数目和精子生成相关基因表达的测定试验。1.2.2秀丽隐杆线虫同步化用S缓冲液将体内含有大量虫卵的成
13、虫从线虫生长培养基(nematode growthmedium,NGM)冲洗至15 mL离心管中,反复冲洗两次以洗去线虫身上的大肠杆菌OP50,弃上清,将配置好的碱性裂解液(4%的NaClO、2 mol/L的NaOH、灭菌水体积比为111)按线虫体积等比例加入离心管中,边振荡边观察,至虫体全部裂解,离心去上清,将虫卵用S缓冲液反复冲洗3次,取100 L沉淀接种到涂布有大肠杆菌OP50的NGM培养基上,放入20 生化培养箱过夜得到L1期线虫,继续培养约48 h,得到L4期线虫。1.2.3急性毒性试验在96孔板上加入不同浓度双酚S溶液200 L,每个浓度设3个平行孔,然后用挑针在每孔中加入约 40
14、 条 L4 期线虫,记录受试虫数(n总)。染毒24 h,用显微镜观察每孔线虫状态,记录线虫死亡数目(n24 h)。线虫死亡的判断标准:咽泵停止运动,用铂丝多次触碰虫体无反应。死亡率(%)=n24h/n总100%。1.2.4子代数目的测定挑取同步化培养至L4期的雌雄同体线虫到涂布有不同浓度双酚S的NGM培养基上,进行24 h暴露。暴露结束后,在每个平板中挑取1只待测的线虫,放入20 生化培养箱培养。在产卵期内每天将线虫转移到一个新的平板上,含有虫卵的旧平板继续放置在20 生化培养箱培养24 h,然后对每个平板上的线虫数目进行统计,待线虫排卵期结束,将每个平板线虫数目相加,计算每条线虫总的子代数目
15、。1.2.5精子生成相关基因测定使用qPCR检测精子生成相关基因的表达。将同步化培养至L4期线虫分别在涂布有不同浓度双酚S的NGM培养基上,进行24 h暴露后,采用Trizol法提取线虫的总RNA,然后逆转录成cDNA进行qPCR。引物根据线虫数据库的序列以及美国国家生物技术信息中心进行设计,具体引物序列 见 表 1。反 应 体 系 为:SYBR Green qPCR Mix(2,High ROX)10 L,上、下游引物(3 mol/L)各1 L,去离子水7 L,cDNA 1 L,组成20 L反应体系。扩增步骤为:95 预变性 2 min,95、15 s,60 退火 30 s,采集荧光信号,4
16、0 个循环,72、30 s延伸,act-1作为参考基因,使用2-CT法分析比较akt-1、swm-1、try-5、spe-4、spe-6基因的mRNA相对表达水平。1.3统计方法所有实验均重复3次,采用SPSS 18.0软件对数据进行统计学分析,急性毒性试验采用概率分析(probitanalysis-Spearman),计算线虫双酚 S 染毒 24 h 后的LC50;计量资料用x s表示,采用单因素方差分析,两两比较选择Dunnett-t检验,P0.05为差异有统计学意义。表1精子生成相关基因的引物序列(5-3)基因akt-1swm-1try-5spe-4spe-6act-1上游序列GTGGG
17、GAGTTGGAGTTGTGGAAAATGCGTCGAAGTATCTGACTTCATTTGGATGGGGTTCATTTCTGCCGCTCTTGGTATGAAGGAGTCCCGAAGCAATATGTGTGACGACGAGGTT下游序列CTTGCTTGGGAACCTTAGACGAACGAAACCTTTGGAGCCACCACTGTCACCAGAGCAATCATCCGTAAAGTTGCTCCCCTGAGACAGCAAATCACCGAGAAGCACTTGCGGTGAAC论著癌变畸变突变1 8 5CARCINOGENESIS,TERATOGENESIS&MUTAGENESIS2023 年 5 月第 35
18、卷第 3 期2结果2.1双酚S对秀丽隐杆线虫的急性毒性试验经24 h暴露得到不同浓度双酚S对秀丽线虫的致死数据,如表2所示。利用SPSS软件中的PROBIT模块进行计算,根据 3 次毒性试验结果,取 3 次平均死亡率进行分析,可得到双酚 S 暴露 24 h 的 LC50为2 773.672 mol/L,故后续以 1/1 000、1/100 和 1/10的LC50浓度分别为约3、30和300 mol/L进行子代数目和精子生成相关基因表达的测定。2.2双酚 S 暴露 24 h 对秀丽隐杆线虫子代数目的影响3、30和300 mol/L双酚S作用24 h后秀丽隐杆线虫子代数目分别为197.632.4、
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 双酚 秀丽 线虫 精子 生成 相关 基因 表达 影响
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。