miR-375调控RWDD3参与脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖的机制研究.pdf
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1、作者单位 福建中医药大学附属第二人民医院 病理科福州 福建作者简介 程焰红()女初级病理技师大学通信作者 魏霖 :.:./.论著 调控 参与脑胶质母细胞瘤 细胞增殖的机制研究程焰红魏霖钟国栋李颜摘要目的:探讨 调控 参与脑胶质母细胞瘤 细胞增殖的作用机制 方法:采用 技术检测正常脑组织及脑胶质瘤组织中 和 的表达 以人脑胶质母细胞瘤细胞 为研究对象设立对照组和相应的 组空载体组和 过表达组分别过表达 及 蛋白利用 及细胞划痕实验检测 或 过表达对 细胞增殖和迁移能力的影响 在 组中利用 及 免疫印迹法检测脑胶质母细胞瘤 细胞中 及蛋白水平的变化在 联合 组细胞中共转 和 质粒观察 是否可以恢复
2、 对脑胶质母细胞瘤 的抑制作用 结果:高级别胶质瘤组织中 的表达水平低于正常和低级别胶质瘤组织而 的表达水平高于正常和低级别胶质瘤组织差异均有统计学意义()及细胞划痕实验结果显示与对照组比较 可抑制脑胶质瘤细胞的增殖和迁移能力与空质粒组比较 可促进脑胶质瘤细胞的增殖和迁移能力 及 结果表明在 联合 组中水平升高可有效抑制 及蛋白水平的表达共转染 及 后 可恢复由 抑制的脑胶质瘤细胞增殖和迁移能力 结论:在胶质瘤组织中表达水平降低而 的表达水平升高 表达下调可以促进 的表达进而促进对脑胶质母细胞瘤 细胞的增殖和迁移能力关键词 脑胶质瘤 增殖 迁移中图分类号 文献标识码 文章编号()()【】:.:
3、.:.:.【】脑胶质瘤为一种常见的中枢神经系统原发性肿瘤发病率占全身恶性肿瘤的 虽然手术切除联合术后放化疗的综合治疗手段已经取得长足进步但脑胶质瘤细胞较强的增殖和迁移能力的特点使此类患者治疗效果不佳 因此深入了解脑胶质瘤增殖、迁移的分子机制有助于为脑胶质瘤的治疗提供理论基础 在内的多种分子可参与调控肿瘤细胞的增殖、侵袭等诸多病理性行为淮海医药 年 月 第 卷 第 期 中多种 可通过逆调控一些关键基因或者信号通路的表达来抑制肿瘤的发生发展 研究表明在乳腺癌、肝癌及胃癌等多种肿瘤组织中 均呈现出差异性的表达 等研究发现 在脑胶质瘤组织中表达水平显著降低且与患者的预后有关即 的低表达可促进脑胶质瘤的
4、发生发展 是 结构小泛素化增强子最初在垂体瘤细胞中发现 等研究表明 在脑胶质瘤组织中表达水平明显升高且与肿瘤恶性程度和预后密切相关考虑到 在脑胶质瘤发生发展中的重要作用并且 及 在脑胶质瘤中均呈现差异性表达 因此 有可能是通过调控 的表达来对肿瘤的发生发展起调控作用鉴于此本研究通过检测 靶向调控 对脑胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响探究其在脑胶质瘤中的潜在作用 材料及方法.脑胶质瘤标本本研究经我院医学伦理委员会审批同意 例脑胶质瘤标本来源于 年 月 年 月我院神经外科经手术切除后组织病理学检查证实为恶性胶质瘤的患者所有患者术前均未接受放化疗及其他免疫治疗 根据 年 中枢神经系统肿瘤分类修订版的标
5、准对肿瘤组织进行分级其中级(毛细胞星型细胞瘤)例、级(弥散性星型细胞瘤)例、级(间变星型细胞瘤)例、级(胶质母细胞瘤)例、级为低恶性度组、级为高恶性度组 正常脑组织取自脑外伤患者颅内减压术后切除的部分组织共 例 标本采集后立即置于冻存管中液氮保存.细胞及试剂盒 人脑胶质母细胞瘤细胞购自美国 细胞库 及相应阴性对照()购买自中国广州锐博生物科技公司过表达质粒 及相应阴性对照()购买自中国苏州吉玛基因股份有限公司兔源抗、抗体()购于 公司总 提取试剂盒()购自 公司 逆转录试剂盒()购自美国 公司.和 法检测脑胶质瘤组织中 及 的表达():向正常对照组脑组织及胶质瘤组织加入液氮后进行研磨加入适量的
6、蛋白裂解液在冰浴条件下充分裂解 收集至 离心管中于 离心 吸取上清经 变性 后放置于 冰箱中备用 将 的各样品加入相应的凝胶孔中进行 电泳 脱脂牛奶封闭 后加入一抗(、)孵育过夜 洗膜 次后加入相应的 标记的二抗()孵育 洗膜 次使用 液进行显影并使用 软件对薄膜带上的蛋白进行半定量分析():使用总 提取试剂盒提取各组细胞的 并利用逆转录试剂盒将提取的 逆转录为 设计、相关基因的上下游引物(如表 所示)进行实时定量 反应并使用 仪器检测胶质瘤组织中、以及各组 细胞中 水平的表达情况数据分析采用 法进行 见表 表 引物序列引物 序列:.法 及 细 胞 划 痕 实 验 检 测、对 细胞增殖和迁移能
7、力的影响()实验:使用含 双抗的 培养基在 的条件下培养 细胞收集对数生长期细胞 洗涤并重悬后以每孔 的密度接种于 孔板中 设立以下几组实验:对照组、转染 组、空载体组、过表达组每一组设置 个复孔 待细胞生长至 融合后分别根据分组转染相应试剂培养 后向每孔加入 溶液并于细胞培养箱中孵育 随后使用酶标仪在 波长下测定各孔下的吸光度()值()细胞划痕:将 细胞以个/孔接种于 孔板中根据上述分组进行转染 后用直尺比对用 的枪头在每孔竖直划 条直线 缓冲液漂洗 次后换无血清培养基进行培养并在显微镜下观察拍照、之后分别使用 缓冲液漂洗 次后再次观察拍照使用 软件测量划痕的宽度并进行统计分析淮海医药 年
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