反相高效液相色谱法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量.pdf
《反相高效液相色谱法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《反相高效液相色谱法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、2023年第36 卷第11期2.合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心,安徽合肥2 30 6 0 1)摘要:建立一种通过反相高效液相色谱-紫外测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的方法。结果表明:方法的流动相为异丙醇-甲醇-水,且大豆磷脂酰胆碱在0.46 15 2.30 7 5mg/mL范围内线性关系良好(R=0.9977);方法的检出限为1.4mg/g、平均回收率为9 9.8%、相对标准偏差(RSD)为2.41%。方法的精确度高、重复性好,适用于大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的测定。关键词:反相高效液相色谱;大豆;磷脂;磷脂酰胆碱Determination of phosphatidylcholin
2、e contentin soybean phospholipids by reversed phase highperformance liquid chromatography methodZHU Meng-nan,JIN Ri-sheng*,ZHANG Hua,YUAN Chuan-xun1,2(1.School of Food and Biological Engineering,Hefei University of Technology,Hefei 230601,Anhui,China;2.Engineering Research Center of Ministry of Educ
3、ation for Agricultural Products and Biochemistry,Hefei University of Technology,Hefei 230601,Anhui,China)Abstract:A method was established for the determination of phosphatidylcholine content in soybeanphospholipids by reversed phase high performance liquid chromatography with ultraviolet.The result
4、sshowed that the mobile phase of the method was isopropanol-methanol-water,the linear relationship ofsoybean phosphatidylcholine was good in the range of 0.461 5-2.307 5 mg/mL(R=0.997 7).Thedetection limit of the method was 1.4 mg/g,the average recovery rate was 99.8%,and the relativestandard deviat
5、ion(RSD)was 2.41%.The method had high accuracy and good repeatability,and wassuitable for the determination of phosphatidylcholine content in soybean phospholipids.Key words:reversed phase high performance liquid chromatography;soybean;phospholipid;phos-phatidylcholine中图分类号:TS207.4磷脂酰胆碱(PC)是由亲水的磷酸脂基
6、团和亲油的脂肪酸基团组成的两亲分子,因此具有很好的乳化性能,同时还具有调节血脂、降低胆固醇 1、强化脑部功能、增强记忆力 2 、调节脂肪代谢、防治脂肪肝的功效 3-41。因此,PC被广泛应用于食品、医药及化妆品等行业 5-6.收稿日期:2 0 2 2-12-0 6基金项目:安徽省科技重大专项(2 0 2 0 0 3a06020011)作者简介:朱梦男(19 9 2 一),女,硕士,研究方向为农产品加工。通信作者:金日生(19 8 2 一),男,博士,助理研究员,研究方向为农产品加工。粮食与油脂反相高效液相色谱法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量朱梦男,金日生?,张华,袁传勋 2(1.合肥工业大学食品
7、与生物工程学院,安徽合肥2 30 6 0 1;文献标志码:A159文章编号:10 0 8-9 57 8(2 0 2 3)11-0 159-0 4目前PC含量的测定方法主要有紫外分光光度法 7 、薄层层析法 8 、核磁共振法 9 、红外光谱法 10 、高效液相色谱法11-12 、质谱分析法 13 等,其中高效液相色谱法灵敏度高、稳定性和重现性好,是检测PC最为有效的方法。而GB5009.272一2016食品安全国家标准食品中磷脂酰胆碱、磷脂160酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定中使用的流动相为正己烷-异丙醇-乙酸水的混合溶液,由于某些高效液相色谱仪的密封圈不耐正已烷,在使用该流动相时易受到限制。为解决
8、该问题,本研究对国标方法中的高效液相色谱法进行改进,建立不含正已烷的反向高效液相色谱法测定大豆磷脂中PC的含量的方法。通过对流动相的分析选择,确定适宜的色谱分离条件,使PC与其他磷脂能有更好的分离度,以期能够准确定量分析大豆磷脂中PC的含量。1材料与方法1.1 材料与试剂大豆粉末磷脂,安徽元创科技有限公司;PC标准品(纯度9 2.3%),上海源叶生物科技有限公司;体积分数9 5%乙醇,分析纯;甲醇、异丙醇,色谱纯。1.2仪器与设备DHG型智能电热鼓风干燥箱,上海成顺仪器仪表有限公司;BSG-26电热恒温水浴锅,上海一恒科学仪器有限公司;Agilent-1260高效液相色谱仪,美国安捷伦公司;E
9、Q-500超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;RE-52CS-1型旋转蒸发器、SHB-I型循环水式多用真空泵,上海亚荣生化仪器厂;JA-2003分析天平,力辰仪器科技有限公司;TG16-WS离心机,湖南湘仪实验室仪器开发有限公司。1.3试验方法1.3.1色谱分析色谱条件:Eclipse Plus Cis色谱柱(4.6 mm 250mm,5m);柱温35;检测波长2 0 5nm;以异丙醇-甲醇-水作为流动相等度洗脱;流速0.5mL/min;进样量2 0 L。1.3.2标准系列溶液的配制1.3.2.1标准储备液的配制称取PC标准品适量,用10.0 mL甲醇溶解并定容至50.0 mL,得PC标准储
10、备液(2.30 7 5mg/mL),密封后置于-2 0 冰箱保存备用。1.3.2.2标准工作曲线溶液的配制分别吸取PC标准储备液于10.0 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度线,配制成PC质量浓度分别为0.46 15、0.9 2 30、1.38 45、1.8 6 40、2.3075mg/mL的标准工作曲线溶液,通过0.2 2 m膜过滤,密封后置于-2 0 冰箱保存备用。1.3.3供试样品的制备粮食与油脂1.3.3.1样品前处理根据大豆PC易溶于低级醇,而其他磷脂几乎不溶于低级醇的特点,选用乙醇作为大豆PC的萃取剂;称取0.5g大豆磷脂粉末于圆底烧瓶中,加人体积分数9 5%乙醇溶液4.0
11、mL,以35萃取30min后,以6 0 0 0 r/min离心10 min;取上层清液先在温度为35的旋转蒸发仪上旋转蒸发,之后用氮气吹干,备用。1.3.3.2供试液的制备称取适量的乙醇提取物用5.0 mL甲醇溶解后倒人2 5.0 mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度线,通过0.2 2 m膜过滤,密封后于-2 0 保存备用。1.3.4方法验证根据GB/T274042008实验室质量控制规范食品理化检测建立校准曲线及校准曲线的工作范围。称取大豆磷脂样品,按照色谱优化后的方法,平行测定6 次,计算PC 的相对标准偏差(RSD),考察方法的重现性;根据大豆磷脂中PC的含量,按本底值的0.5、1.0、1
12、.5倍3个水平,进行加标回收率测定,以回收率的高低评价方法的准确度。1.3.5实际样品的测定选取不同批次的大豆磷脂,按1.3.3.1的方法制备PC,按1.3.1的色谱条件进行液相色谱分析,计算不同批次大豆磷脂中PC的含量1.4统计分析采用 SPSS 软件对结果进行统计学分析(P0.05)。2结果与分析2.1流动相的选择高效液相色谱法在测定PC含量时,根据流动相的不同,色谱柱的选择可以分为正向色谱柱和反向色谱柱。反向色谱柱的流动相为甲醇-乙-水、氯仿-甲醇-水等,但氯仿-甲醇-水洗脱体系的缺点是氯仿有低紫外线波长的高吸收,在使用紫外检测器测定PC含量时会受到紫外吸收峰的影响。当异丙醇:甲醇:水体
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 高效 色谱 测定 大豆磷脂 磷脂 胆碱 含量
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。