SN∕T 3395-2012 蜱类携带森林脑炎病毒、伯氏疏螺旋体、贝氏柯克斯体PCR检测方法(出入境检验检疫).pdf
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1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 蜱类携带森林脑炎病毒、 伯氏疏螺旋体、贝氏柯克斯体犘 犆 犚检测方法犘 犆 犚犱 犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊 犳 狅 狉 狋 犻 犮 犽犫 狅 狉 狀 犲犲 狀 犮 犲 狆 犺 犪 犾 犻 狋 犻 狊狏 犻 狉 狌 狊,犫 狅 狉 狉 犲 犾 犻 犪犫 狌 狉 犵 犱 狅 狉 犳 犲 狉 犻,犮 狅 狓 犻 犲 犾 犾 犪犫 狌 狉 狀 犲 狋 犻 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准蜱类携带森林脑炎病毒、 伯氏疏螺旋体、贝氏柯克斯体犘 犆 犚检测
2、方法 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京市朝阳区和平里西街甲号( )北京市西城区三里河北街 号( )总编室: ( ) 网址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号: 定价 元书书书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位: 中国检验检疫科学研究院、 中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、 中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人: 杨宇、 韩辉、 慈颖、 李明、 宋锋林、 王静、 胡孔新、 包力、 姚李四、 魏莲、 王勤忠、刘丰、 孙肖红。犛 犖犜 蜱类携带森林脑炎病毒、 伯
3、氏疏螺旋体、贝氏柯克斯体犘 犆 犚检测方法范围本标准规定了国境口岸蜱类携带病原体中森林脑炎病毒、 伯氏疏螺旋体、 贝氏柯克斯体 检测方法。本标准适用于国境口岸蜱类携带重要病原( 森林脑炎病毒、 伯氏疏螺旋体、 贝氏柯克斯体) 的排查。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件。 实验室生物安全通用要求 国境口岸蜱类监测规程 实验室生物安全级实验室要求术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 森林脑炎病毒 狋 犻 犮 犽犫 狅 狉 狀 犲 犲 狀 犮 犲 狆 犺 犪
4、 犾 犻 狋 犻 狊 狏 犻 狉 狌 狊属于黄病毒科黄病毒属, 衣壳二十面体对称外有包膜, 含血凝素糖蛋白, 核酸为单链正股 , 病毒在自然界循环于蜱和野生动物中, 啮齿动物如灰鼠、 野鼠、 刺猬等均为本病的传染源。当蜱吸吮受染啮齿动物的血液后, 病毒在蜱体内繁殖, 并可越冬和经卵传代, 故蜱不仅是传播媒介也是重要的储存宿主。 伯氏疏螺旋体犅 狅 狉 狉 犲 犾 犻 犪犫 狌 狉 犵 犱 狅 狉 犳 犲 狉 犻属于疏螺旋体属, 是引起莱姆病的病原体, 革兰氏染色阴性, 基因组由一个线性染色体和许多环形和线性质粒组成, 传播媒介主要是某些硬蜱, 主要储存宿主是野鼠类和哺乳动物。 贝氏柯克斯体犆
5、狅 狓 犻 犲 犾 犾 犪犫 狌 狉 狀 犲 狋 犻属于柯克斯体属, 是引起人畜共患病热的病原体, 革兰氏染色阴性, 通过蜱传播给野生啮齿动物和家畜, 再经受染动物的粪便、 尿污染环境, 由接触或呼吸道感染人。生物安全要求蜱传病原体检测应在生物安全级以上实验室( ) 内进行, 实验室操作依照 , 要求进行。实验仪器设备 扩增仪; 生物安全柜; 电泳仪; 冰箱; 普通台式离心机; 高速冷冻离心机( 转速可达 犵) ;凝胶成像系统; 微量可调移液器( 、 、 ) ; 旋涡混匀器; 超净工作台。犛 犖犜 主要试剂 提取试剂盒; 提取试剂盒; ; 缓冲液;犜 犪 狇酶; 反转录试剂; 引物, 引物序列
6、见表; 电泳缓冲液; 琼脂糖; 乙醇; 。表犘 犆 犚检测所用引物序列病原种类引物名称引物序列( )扩增片段大小森林脑炎病毒伯氏疏螺旋体贝氏柯克斯体上游引物 下游引物 上游引物 下游引物 上游引物 下游引物 上游引物 下游引物 注:其他等效商品化试剂盒或等效引物也可使用。检测程序 蜱类标本的采集按照 要求采集蜱标本, 装入 螺口塑料血清管内, 于 以下保存待检。 蜱类标本的处理方法在无菌操作台上, 将蜱取出放在无菌的平皿内, 用 酒精浸泡 , 用无菌滤纸吸干蜱体表酒精,再用生理盐水漂洗次, 用无菌滤纸吸干蜱体表水分后, 倒入研磨器中, 加入 或生理盐水吹洗,弃去液体后加入 或生理盐水, 反复研
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