H3型组胺受体在结直肠癌中作用研究.pdf
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1、直肠瘾癌558Clin J Med Offic,Jun,2023临床军医杂志2023年6 月第51卷第6 期H3型组胺受体在结直肠癌中作用研究边振远,王鑫宇,张成北部战区总医院普通外科,辽宁沈阳110 0 16摘要目的探讨H3型组胺受体在结直肠癌中的作用。方法去人结直肠癌组织和癌旁组织样本来自于北部战区总医院普通外科。将人结肠癌细胞HCT-116细胞分人siCtrl组和siH3HR组。采用WesternBlot检测结直肠癌和癌旁组织中的H3HR表达水平;使用H3HR干涉片段对结直肠癌HCT-116细胞进行处理,采用EDU、划痕实验检测H3HR干涉对siH3HR组、siCtrl组细胞增殖能力的影
2、响及对HCT-116细胞迁移能力的影响。结果果在10 对结直肠癌和癌旁组织中,结直肠癌组织中H3HR表达水平高于癌旁组织。H3HR干涉后,siH3HR组细胞增殖能力低于siCtrl组(P0.05)。干涉降低H3HR表达后,HCT-116细胞迁移能力下降(P0.05)。结论H3HR与结直肠癌细胞的增殖和迁移相关。关键词结直肠癌;H3型组胺受体;增殖;迁移中图分类号:R735.3doi:10.16680/j.1671-3826.2023.06.03文章编号:16 7 1-38 2 6(2 0 2 3)0 6-0 558-0 3The role of H3 histamine receptor in
3、 colorectal cancerBIAN Zhen-yuan,WANG Xin-yu,ZHANG Cheng(Department of General Surgery,General Hospital of Northern Theater Command,Shenyang 110016,China)Abstract:Objective To investigate the role of H3 histamine receptor(H3HR)in colorectal cancer.MethodsHuman colorectalcancer tissue and paracancer
4、tissue samples were collected from General Hospital of Northern Theater Command.Human colon cancercells HCT-116 were divided into siCtrl group and siH3HR group.Western Blot was used to detect the expression of H3HR in colorectalcancer and adjacent tissues.Colorectal cancer HCT-116 cells were treated
5、 with H3HR interference fragments.EDU and scratch testswere used to detect the effects of H3HR interference on cell proliferation and migration of HCT-116 cells in siH3HR group and siCtrlgroup.Results In 10 pairs of colorectal cancer and paracancer tissues,the expression level of H3HR in colorectal
6、cancer tissues washigher than that in paracancer tissues.After H3HR interference,the cell proliferation ability of siH3HR group was lower than that ofsiCtrl group(P0.05).The migration ability of HCT-116 cells was decreased after interference decreased H3HR expression(PO.05).Conclusion H3HR is associ
7、ated with the proliferation and migration of colorectal cancer cells.Key words:Colorectal cancer;H3 histamine receptor;Proliferation;Transfer结直肠癌是一种高度恶性肿瘤,其发病率和病死率分别排在肿瘤的第3位和第4位1-2 。目前,针对结直肠癌的药物治疗手段比较缺乏,有待进一步开发。有研究报道,组胺作为一种内源性胺类物质,结合相应的组胺受体可以作用于肿瘤细胞的增殖,目前,已经发现的组胺受体包括H1、H 2、H 3、H4型组胺受体4种,组胺通过与这些不同的受体
8、结合会发挥不同的作用3。人HRH3基因定位于第2 0 号染色体,编码的蛋白由446 个氨基酸组成4。有学者发现,H3型组胺受体(H3 histaminereceptor,H3HR)具有调控肿瘤细胞增殖和迁移的作用5。有研究证实,肝细胞肝癌、胆管细胞癌、黑基金项目:辽宁省科学技术计划项目(2 0 2 1JH2/10300106)第一作者:边振远(1992-),男,河北石家庄人,副主任医师通信作者:张成,E-mail:c z 17 91 16 3.c o m色素瘤、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤组织中的H3HR表达水平显著增高6-。本研究旨在探讨H3HR在结直肠癌中的作用。现报道如下1材料与方
9、法1.1实验材料人结直肠癌组织和癌旁组织样本来自于北部战区总医院普通外科。胎牛血清购自Gibco公司;RPMI1640培养基及0.2 5%胰酶由课题组专业技术人员配置;二甲基亚矾购自SIGMA公司;酒精(无水乙醇、7 5%乙醇)购自天津市富宇精细化工有限公司;光学显微镜购自OLYMPUS,全自动酶标仪(BIO-RAD550)购自美国bio-rad公司,离心机购自Thermo;EDU试剂购自广州锐博生物科技有限公司;H3HR干涉片段由吉玛基因公司合成。1.2实验方法1.2.1实验分组及干涉片段转染(1)组织样本559.ClinJMedOfficJun,20232023年6 月第51卷第6 期临床
10、军医杂志按照结直肠癌和癌旁组织分为10 对。(2)将传代好的人结肠癌细胞HCT-116细胞分人siCtrl组和siH3HR组。siH3HR 组接种细胞于6 孔板中。用无血清培养基配制lip2000混合液,室温静置5min;再用无血清培养基配制干涉片段混合液。将两种混合液混匀后静置2 5min,分别加入到相应的6 孔板中,正常条件下培养(37,5%CO,),再进行干涉片段的转染。1.2.2EDU实验(1)接种细胞:将常规处理过的siCtrl组、siH3HR组细胞消化离心后以适宜密度种于2 4孔板中,于37、5%CO2培养2 4h。(2)ED U标记细胞:制备50 mEDU培养基并加人2 4孔板中
11、,孵育2 h后用PBS清洗。(3)细胞固定化:加人含4%多聚甲醛的PBS,室温脱色摇床孵育30 min,然后用2 mg/ml甘氨酸溶液中和,继续加PBS清洗,清洗结束后加人含0.5%TritonX-100的PBS,室温脱色摇床孵育10 min,最后用PBS清洗。(4)ED U 反应:于2 4孔板中加人1Apollo反应液孵育30 min,然后加人含0.1%TritonX-100的PBS,重复2 次,每次10 min。(5)D NA 染色:配制适量1Hoechst33342反应液并加入2 4孔板中,避光孵育30 min,再用PBS清洗,重复2 次,每次10 min。(6)荧光显微镜获取图像进行分
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