大鼠肾皮质淋巴管内皮微通道.pdf
《大鼠肾皮质淋巴管内皮微通道.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《大鼠肾皮质淋巴管内皮微通道.pdf(5页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 435 组织工程与重建外科 2023 年 10 月 第 19 卷第 5 期基金项目:国家自然科学基金(31671252);徐州医科大学校长专项基金(53051116);徐州医科大学国际合作与交流处海外专家专项基金(537101)。作者单位:221004江苏省徐州市徐州医科大学基础医学院解剖学教研室。通信作者:潘伟人(E-mail:)。论著doi:10.3969/j.issn.1673-0364.2023.05.001大鼠肾皮质淋巴管内皮微通道马巧英潘伟人曾凡强栗峣马传响刘志安【摘要】目的探查大鼠肾皮质淋巴管内皮微通道及其超微结构。方法获取 6 只大鼠的 12 个肾脏,对其中 8 个肾脏进行组
2、织切片、苏木精-伊红(HE)和免疫组织化学(IHC)染色检查。另 4 个经处理后作扫描电镜检测。结果大鼠肾脏的 HE 染色切片很难发现具特征性的淋巴管管壁,但通过 LYVE-1 的 IHC 染色可见其呈散在分布,外形不规则,管壁菲薄,并以不同的形状及大小存在,有些细胞核突入管腔中。扫描电镜观察,大鼠肾皮质中淋巴管外表可见散在分布的内皮微通道入口,其包含半圆形的“穹隆顶部”和平坦的“底部”,代谢产物散布在其周围或聚集在入口处。结论初步介绍了大鼠肾皮质淋巴管内皮微通道的形态结构,其结果可为进一步的基础研究、组织工程和 3D 组织打印以及临床应用提供实验动物的形态学理论基础。【关键词】肾皮质;淋巴管
3、;淋巴管内皮微通道;大鼠【中图分类号】Q464【文献标志码】A【文章编号】1673-0364(2023)05-0435-05The lymphatic endothelial microchannel in the renal cortex of the ratMA Qiaoying,PAN Weiren,ZENG Fanqiang,LI Xiao,MA Chuanxiang,LIU Zhian.Department of Human Anatomy,Biomedical College,Xuzhou Medical University,Xuzhou 221004,China.Corresp
4、onding author:PAN Weiren(E-mail:).【Abstact】ObjectiveToexploretheendothelialmicrochannelandultrastructureofthelymphaticvesselintherenalcortexoftherat.MethodsTwelvekidneyswereobtainedfromsixrats.Eightofthemwereexaminedbyhistologicalsection,Haema-toxylinEosin(HE)andImmunohistochemical(IHC)staining.Theo
5、therfourwereexaminedbyscanningelectronmicroscopyaf-tertissueswerepre-prepared.ResultsLymphaticvesselswerehardlyrecognizedintheHEstainingsectionoftheratkidney,butcouldbedetectedbyIHCstainingofLYVE-1.Theyhadirregularandthinwallswithvaryingshapesandsizes.Somenucleioftheendothelialwereprotrudedintothelu
6、men.Thescanningelectronmicroscopeshowedthatscatteredentrancesoftheendo-thelialmicrochannelwereseenonthelymphaticvesselintherenalcortexoftherat,whichcontainedasemicircular“roof”andaflat“floor”.Metaboliteswerescatteredaroundorgatheredattheentrance.ConclusionThisstudyintroducesthemorpholog-icalstructur
7、eofendothelialmicrochannelsofthelymphaticvesselintherenalcortexoftherat.Theresultcanprovideamorpho-logicaltheoreticalbasisofexperimentalanimalsforfurtherbasicscientificresearch,tissueengineering,3Dtissueprinting,andclinicalapplications.【Key words】Renalcortex;Lymphvessel;Lymphaticendothelialmicrochan
8、nel;Rat肾淋巴管是肾脏脉管系统的一部分,在生理和病理过程中,其在收集细胞间质液并将其返回循环系统方面发挥着重要作用1。虽然近几十年来文献已报道了在人体和各种动物的生理和病理条件下肾脏的血管系统、淋巴分布和形态学特征1-7,但一些问题尚未解决。例如,淋巴是如何从肾间质进入淋巴-循环系统的,淋巴的微通道在形态学上是什么样子的?一些研究表明,淋巴通路可以以某种方式在其内皮细胞之间找到8-13,但是,事实上肾脏的“真正”淋巴内皮微通路尚未在形态学上得到权威证实,这不仅阻碍了生物技术研Journal of Tissue Engineering and Reconstructive Surgery,
9、October 2023,Vol.19 No.5 436 究的进展,还影响了精准医学的发展,尤其是肾脏生物工程和三维(3D)组织打印14。近年来,免疫荧光(IF)染色和组织清除的组合方法已被应用于检测 3D 组织结构中的神经血管结构15-17,此法的应用得以使这些结构在动物模型的生理和病理状况下全面展现。因此,如果使用相同的方法来检测肾脏厚组织切片中的淋巴结构,可能会获得相同的结果。最近,有报道显示在小鼠肾脏皮质厚组织切片中显示了淋巴管的形态结构,并在其管壁上发现了“隧道”样开口18。本研究旨在通过组织学切片、HE 染色、免疫组化(IHC)染色以及扫描电子显微镜(SEM)等技术,探寻大鼠肾皮质
10、中淋巴管的分布并揭示其内皮微通道的形态结构。1材料与方法本实验由徐州医科大学动物伦理委员会批准(L20210226466,中国江苏),并根据徐州医科大学实验动物管理和使用指南进行。1.1主要实验试剂及仪器水 合 氯 醛(CAS#302-17-0,BBI 生 命 科 学有限公司);LYVE-1 抗体(NB600-1008,NovusBiologicals,美 国);二 抗(GoatAnti-RabbitIgGSecondaryAntibodyVC002,NovusBiologicals,美国);组织切片机(LeicaRM2125RTS,LeicaMicrosys-temsP/L,德 国);扫 描
11、 电 镜(HT7700,HitachiHigh-TechnologiesCo.Ltd,日本)。1.2实验动物及取材前准备成 年 雄 性 Sprague-Dawley(SD)大 鼠 6 只,体质量 250350g,由徐州医科大学实验动物中心提供。取肾前,每只大鼠接受 10%水合氯醛(0.35mL/100g)腹腔注射麻醉。1.3取材从 4 只大鼠中获取 8 个肾脏,每个肾脏按其水平面切取 2mm 厚的组织块,作为 HE 染色和免疫组化检测的组织切片标本,置入 4%多聚甲醛(PFA)溶液中固定保存。肾组织获取后,供体大鼠断颈处死。另 2 只大鼠获得 4 个肾脏,并即刻从每个肾脏水平切面切取 1mm2
12、mm2mm厚组织,作为扫描电镜检测的标本,快速置入 2%戊二醛与 4%多聚甲醛混合液中固定,放入冰箱保存。肾组织获取后,供体大鼠断颈处死。1.4组织石蜡包埋肾组织经 4%多聚甲醛溶液固定 2d 后,取出,PBS 清洗 3 次,置入不同浓度的乙醇梯度脱水:50%乙醇 2h、75%乙醇 2h、80%乙醇 2h、90%乙醇 1h、95%乙醇 30min、无水乙醇 30min2 次、无水乙醇+二甲苯 1:120min,二甲苯透明30min,浸蜡 2h 后进行石蜡组织包埋。1.5HE 染色观察石蜡冷却后切 7m 薄片,48温水中展片,载玻片捞片,50烤片 30min,再经二甲苯脱蜡、梯度乙醇复水(无水乙
13、醇、90%、80%和 70%乙醇各 5min,蒸馏水洗),苏木精溶液中浸染 10min,清洗 2min,移入 1%盐水乙醇 20s,流水清洗30min,0.6%氨水返蓝,流水冲洗 5min,移入伊红液浸染 3min,水洗,梯度脱水(95%乙醇 5min2 次,无水乙醇 5min2 次),二甲苯(5min2 次)透明后,中性树胶封片,观察和拍照。1.6免疫组织化学显色观察石蜡切片后经二甲苯脱蜡、梯度乙醇复水(同1.4)、3%H2O2孵育、柠檬酸盐溶液高温修复抗原,加 LYVE-1 抗体,1:800 浓度 4过夜,次日复温加二抗,1:2000 浓度室温下孵育 50min,切片温箱烘干,经二甲苯透明
14、、封片、观察后拍照。1.7扫描电镜(SEM)检测固定标本送扫描电镜检测,PB 漂洗(34h)、置入 1%锇酸溶液再固定、漂洗、梯度脱水、临界点干燥、组织块粘托、镀膜后寻找和观察目标结构,并拍照留存。2结果2.1HE 染色与免疫组织化学显色大鼠肾脏的 HE 染色切片上除了可见肾小球、肾小管和动静脉外,难以发现淋巴管管壁,但通过 LYVE-1 的 IHC 染色可见其散在地分布(图 1),外形不规则,管壁菲薄,在二维图像中以不同的形状及大小(管径在 1030m)存在,有些细胞核突入管腔中。2.2扫描电子显微镜检测大鼠肾皮质中淋巴管外表可见散在分布的内皮微通道入口,包含半圆形的“穹隆顶部”和平坦的“底
15、部”(图 2)。高度约为 8m,宽约 14m。代 437 组织工程与重建外科 2023 年 10 月 第 19 卷第 5 期谢产物散布在其周围,其中一些聚集在入口处。3讨论肾淋巴管在收集细胞间液和大分子代谢产物等返回循环系统、肿瘤转移和免疫活动中发挥着非常重要的作用1。对于肾淋巴管解剖的认识始于早期的水银灌注研究19,以及随后的间接注射染料混合物的研究2-5,8-10,20-21,其仅显示了肾脏周围淋巴管的分布和引流,但肾内淋巴管的分布及详细超微结构尚未完全被显示。最近的报道显示,利用 IF 染色、组织清除和扫描电子显微镜(SEM)技术,在小鼠厚肾组织切片中揭示了肾内淋巴管(特别是内皮微通道)
16、的三维分布和细节18。在本研究中,我们通过组织切片、HE 染色、IHC 染色和扫描电子显微镜(SEM)技术,揭示了大鼠肾内淋巴管(尤其是内皮微通道)的细节。此外,将本实验结果与本研究团队已报道的小鼠实验结果相比较18,我们注意到大鼠与小鼠的肾皮质组织结构相似,由于肾皮质内的淋巴管排列无序,腔内淋巴液充盈程度的不同,因此组织切面上可见大小不一、形状各异的淋巴管的形态学表现(图 1)。从 SEM 的结果对照来看,大、小鼠的肾皮质淋巴管壁上内皮微通道入口的微观形态特征相同(图 3),都包含一个半圆形的“穹隆顶部”和平坦的“底部”(图 2、3)。代谢产物散布在其周围,其中一些聚集在入口处。不同之处在于
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 大鼠 皮质 淋巴管 内皮 通道
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。