WS∕T 639-2018(代替 WS∕T 125-1999, WS∕T 248-2005) 抗菌药物敏感性试验的技术要求.pdf
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1、ICS 11.020 C 50 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准 WS/T 6392018 代替 WS/T 125-1999,WS/T 2482005 抗菌药物敏感性试验的技术要求 Technical specification on antimicrobial susceptibility tests 2018 - 12 - 11 发布 2019 - 06 - 01 实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发 布 WS/T 6392018 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 术语和定义 . 1 3 常规药敏试验的药物选择和报告 . 4 4 药敏试验方法
2、. 6 5 各种属细菌药敏试验 . 11 6 质量控制 . 16 7 商品化药敏试验检测系统的性能验证 . 17 附录 A 临床各种属细菌的药敏试验方法和试验条件 . 21 附录 B 不常见苛养菌和非苛养菌药敏试验折点 . 25 参考文献 . 30 WS/T 6392018 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准代替 WS/T 125-1999纸片法抗菌药物敏感试验标准和 WS/T 248-2005厌氧菌的抗微生物药敏感试验方法 。本标准整合了 WS/T 125-1999 和 WS/T 248-2005 的内容,并做了以下变化: 增加了常规药敏试验报告原则
3、和报告格式; 增加了稀释法、梯度扩散法和自动化仪器法等其他药敏试验检测方法; 增加了少见菌药敏判定标准和商品化药敏试验检测系统的性能验证; 修改了常见菌特殊耐药表型检测和质量控制要求。 本标准起草单位: 北京大学人民医院、 安徽省立医院、 首都医科大学附属北京友谊医院、 北京医院。 本标准主要起草人:王辉、张正、马筱玲、胡云建、苏建荣、王晓娟、陈宏斌、李荷楠。 本标准实施之日起,WS/T 125-1999 和 WS/T 248-2005 废止。 WS/T 6392018 1 抗菌药物敏感性试验的技术要求 1 范围 本标准规定了临床抗菌药物敏感性试验的技术要求, 包括常规药敏试验的药物选择和报告
4、、 药敏试验方法、各种属细菌药敏试验、常见菌特殊耐药表型检测、药敏试验的质量控制、商品化药敏试验检测系统的性能验证。 本标准适用于开展临床微生物学检验的各级临床实验室。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 抗微生物药物敏感性试验 Antimicrobial susceptibility testing 检测微生物(本文件特指细菌)对抗微生物药物(本文件特指抗菌药物)的体外敏感性,以指导临床合理选用药物的微生物学试验,简称药敏试验。 2.2 最低抑菌浓度 Minimal inhibitory concentration;MIC 在琼脂或肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可
5、见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。 2.3 折点 Breakpoint 能预测临床治疗效果, 用以判断敏感、 中介、 剂量依赖型敏感、 耐药、 非敏感的最低抑菌浓度 (MIC)或者抑菌圈直径(mm)的数值。 2.3.1 敏感 Susceptible;S 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于敏感范围时,使用推荐剂量进行治疗,该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长,临床治疗可能有效。 2.3.2 中介 Intermediate;I 当菌株的MIC值或抑菌圈直径处于中介时,该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度,从而治疗反应率低于敏感菌群。 该分类意味着采用高于常规剂量治疗时或在药物
6、生理浓集的部位, 临床治疗可能WS/T 6392018 2 有效。该分类同样可作为“缓冲域”,以防止由微小、不可控的技术因素导致的重大偏差,尤其是毒性范围较窄的药物。 2.3.3 剂量依赖型敏感 Susceptible-dose dependent;SDD 细菌菌株对抗菌药物的敏感性依赖于抗菌药物的剂量。 当某种药物对菌株的MIC或抑菌圈直径在SDD范围时,临床可通过提高剂量和(或)增加给药频率等修正给药方案以达到临床疗效。 2.3.4 耐药 Resistant;R 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于该分类范围时,使用常规治疗方案,该药在感染部位所达到的药物浓度不能抑制细菌的生长,和
7、(或)被测菌株获得特殊耐药机制,且治疗性研究显示该药临床疗效不确切。 2.3.5 非敏感 Nonsusceptible;NS 对于那些因未现或罕现耐药, 而仅具有敏感折点的抗菌药物, 当该药对某分离株的MIC值高于或抑菌圈直径低于敏感折点时,此分类为非敏感。 2.4 流行病学界值 Epidemiological cutoff value;ECV 将微生物群体区分为有或无获得性耐药的MIC值或抑菌圈直径,是群体敏感性的上限。根据ECV,可将菌株分为野生型和非野生型。 2.4.1 野生型 Wild-type;WT 根据ECV值,将抗菌药物(包括抗真菌药物)评估中未获得耐药机制或无敏感性下降的菌株定
8、义为野生型。 2.4.2 非野生型 Non-wild-type;NWT 根据ECV值,将抗菌药物(包括抗真菌药物)评估中获得了耐药机制或存在敏感性下降的菌株,定义为非野生型。 2.5 效价 Potency 抗菌药物中具有抗菌活性的成分,通过同类标准物质测定得出。单位mg/g、IU/g或用百分比表示。 WS/T 6392018 3 2.6 基本一致性 Essential agreement;EA 待测MIC系统与参考方法MIC值相差不超过1个稀释倍数。 当待评估方法为纸片扩散法时, 不计算EA。 2.7 分类一致性 Categorical agreement;CA 被评估药敏方法与参考方法判断试
9、验结果为敏感、中介、耐药的一致性。 2.8 极重大误差 Very major error;VME 将耐药误判为敏感,即假敏感。 2.9 重大误差 Major error,ME 将敏感误判为耐药,即假耐药。 2.10 小误差 Minor error 将中介判为敏感或耐药、或者将耐药或敏感判为中介。 2.11 常规药敏试验 Routine test 用于临床常规检测的纸片扩散法、肉汤或琼脂稀释法。 2.12 补充(非常规)药敏试验 Supplemental (not routing) test 通过常规纸片扩散法、 肉汤或琼脂稀释法以外的方法检测某种或某类药物的敏感性或耐药性, 且该方法无需额外试
10、验确证药物的敏感性或耐药性。 2.13 筛选试验 Screening test 提供假定结果的试验。当筛查结果阳性时,需进行附加试验进行确认。 2.14 替代药物试验 Surrogate agent test 当目标抗菌药物的药敏无法检测或替代药物的药敏检测性能优于目标药物时, 该药物可替代目标药物进行药敏试验。 WS/T 6392018 4 2.15 等效药物试验 Equivalent agent test 某药可预测与其密切相关的同类药物的药敏结果, 测定该药的药敏试验可减少其他相关药物的检测数量以提高检测效率。 3 常规药敏试验的药物选择和报告 3.1 药敏试验测试药物的分组 A组:对特
11、定的菌种,常规测试并报告的基本抗菌药物。 B组:常规测试,但只选择性报告的基本抗菌药物,例如当对A组同类药物耐药时。选择性报告指征还包括:特定部位分离菌(如三代头孢菌素对脑脊液中肠杆菌科菌)、混合感染、多部位感染、患者对A组药物过敏/不耐受/无反应、出于感染控制目的。 C组:包括替代性或补充性的抗菌药物。在某些医疗机构,地方或流行菌株对A组/B组多个药物耐药时,需测试该组药物;当对基本测试药物过敏、或测试少见细菌时、或流行病学和感染控制需要时,需测试的补充药物。 U组:包括那些仅仅或主要用于治疗泌尿道感染的抗菌药物。 各级实验室结合当地病原谱特征、药物代表性、临床需求和本实验室条件等,确定本室
12、不同菌种/药物测试和报告组合。综合上述原则选择自动化药敏板,当药敏板无法满足需求时,予以补充。 3.2 结果解释分类 实验室测试和报告抗菌药物的MIC值或抑菌圈直径(mm)的结果,按折点分为:敏感(S)、剂量依赖型敏感(SDD)、中介(I)、耐药(R)或非敏感(NS);按ECV分为野生型(WT)或非野生型(NWT)。 3.3 报告原则 3.3.1 基本原则 只有当分离株可能有临床意义而非定植或污染时, 才可报告药敏试验。 药敏试验检测获得性耐药而非天然耐药,实验室应明确各类菌属的天然耐药谱,避免将天然耐药误报为敏感。个别菌属对某些药非常敏感, 或该菌引起的感染不需使用抗菌药物时 (如大肠埃希菌
13、O157引起的腹泻) , 常规不需药敏试验。实验室根据药物分组、标本类型等,选择性报告药敏结果。 3.3.2 药敏方法和折点的选择 针对不同药物/菌种组合,实验室应选择适当的药敏方法,并制定相应药敏试验的操作程序(包括质控标准、结果解释等)。实验室宜采用国内、外权威机构近两年发布的折点,并每年评审本室药敏检测系统的折点范围;因药敏板条浓度范围受限,无法采用新折点时,需补充相应的耐药表型检测试验,且告知临床。 判定折点的适用性与菌种、药敏方法、检测条件、纸片含量、感染部位、药物(种类、剂量、频次、途径)有关。当上述条件符合相应要求时,折点方适用。对于国际药敏委员会未给出折点的药物,建议采用国内、
14、外专家共识和权威文献等进行操作和判断,并告知临床。 3.3.3 药敏报告特殊注意事项 WS/T 6392018 5 a) 肠道分离的沙门菌属和志贺菌属仅需报告氨苄西林、一种氟喹诺酮类药物和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。肠道外分离的沙门菌属,需增加测试并报告一种三代头孢菌素,必要时测试并报告氯霉素。伤寒样沙门菌(伤寒沙门菌和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌)应进行药敏试验,肠道分离的非伤寒样沙门菌一般不进行药敏试验。沙门菌属和志贺菌属对第一代、第二代头孢菌素、头霉素和氨基糖苷类体外可能敏感,但临床治疗无效,所以不测试和报告这些药物。 b) 苯唑西林耐药葡萄球菌对目前可用的-内酰胺类(除头孢洛林等外)均耐药。测试
15、青霉素和苯唑西林或头孢西丁可以推测其它-内酰胺类的敏感性。 c) 肠球菌属对氨基糖苷类(除外高浓度的氨基糖苷类)、头孢菌素类、克林霉素和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑体外可能出现敏感,但临床治疗无效,不应报告为敏感。 d) 脑脊液分离菌株,不宜常规测试和报告下列药物:仅有口服剂型的药物、第一代和第二代头孢菌素(除外头孢呋辛注射剂)和头霉菌素类、克林霉素、大环内酯类、 四环素类和氟喹诺酮类。 e) 呼吸道分离株不应测试和报告达托霉素,尿液分离株不报告氯霉素、克林霉素和红霉素,非尿液分离株不测试和报告呋喃妥因。 f) 罕见耐药表型、 广泛耐药或全耐药菌应复核后方可发出药敏报告。 一旦确认应报告医院感染控制办
16、公室。实验室保留这些菌株,以备流行病学调查或临床追加额外的药敏试验之需。 3.3.4 报告单内容和形式 3.3.4.1 一般信息 报告单包括:患者信息(姓名、年龄、性别、病历号等)、临床信息(如科室、临床诊断、抗菌药物使用、标本类型等)、实验室信息(包括标本采集时间、送检时间、接收时间和审核报告时间、操作人和审核人双签名)等。 3.3.4.2 药敏试验 3.3.4.2.1 细菌和药物名称 细菌名称应规范化, 参见细菌命名标准。 宜标注拉丁文名称。 药物名称应使用规范的化学通用名称,不使用商品名。宜同时显示药物的中英文名称,且同一类药物不同品种集中排列。 3.3.4.2.2 结果呈现 a) 报告
17、单应明确列出各类药物对该菌种的折点、本实验室所用标准的版本号或出版时间。 b) 若没有折点而借用其他菌种折点或采用权威文献折点,需备注说明。 c) MIC 法报告 MIC 值(单位为 mg/L 或 g/mL)和结果解释;纸片扩散法报告抑菌圈直径值(应为整数,单位为 mm)。结果解释根据折点或 ECV 判断为 S、I、R、SDD、NS、WT、NWT 等类型。 d) 不报告替代药物的药敏结果。 如用于判断金黄色葡萄球菌对苯唑西林耐药性的头孢西丁不应报告。 3.3.4.2.3 特殊耐药表型 宜在报告中明确标注特殊耐药表型,同时对特殊耐药表型进行专业解释,包括含义、机制、用药限制和建议等。对于罕见耐药
18、现象,进行复核,并标示结果状态,如复核中、已复核等。少见和矛盾耐药表型进行确认。 3.3.4.3 报告单备注或注释 a) 形式性注释:用于符号、缩写等的详细解释。 WS/T 6392018 6 b) 专业性注释:包括概念解释(如特殊菌天然耐药)、临床意义和治疗建议等,专业性注释宜有科学依据。 c) 重要性提示:如“高致病性/高传播性”。 d) 时效性提示:如“若有疑义,请于 48 h 内与实验室联系”。 e) 管理性提示:如“需要上报传染病卡”。 f) 免责提示:如“该结果仅对该标本负责”,“该结果解释宜结合患者临床表现与治疗反应,仅供参考”等。 g) 医院地址和实验室联系方法等。 3.3.5
19、 报告发放 药敏报告应尽快发放。 紧急情况应将部分结果先行发出, 如血培养和脑脊液等其他无菌体液培养的初步药敏试验结果。 无论提前还是延时, 报告上应显示时间, 并注明报告级别(初步报告或最终报告) 。 保存抗菌药物敏感性试验资料,至少每年向临床报告流行病学分析结果。 4 药敏试验方法 4.1 药敏试验方法的分类 药敏试验方法包括:稀释法(包括琼脂稀释法和肉汤稀释法)、纸片扩散法、梯度扩散法和自动化仪器法。稀释法是检测抗菌药物敏感性的定量试验方法,为药敏试验的参考方法。 4.2 稀释法 4.2.1 琼脂稀释法 4.2.1.1 材料 4.2.1.1.1 Mueller-Hinton 琼脂(Mue
20、ller-Hinton Agar,MHA) a) 按产品说明称量 MHA 干粉。 b) 103.4 Kpa、121.3 高压蒸汽灭菌 15 min。 c) 立即放至 40 50 水浴锅备用。 d) 培养基制备完毕后室温下(25 )校正 pH 值为 7.27.4。 e) 某些营养要求高的苛养细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌属等,MHA 培养基须加入相应补充物质或使用特殊培养基,详见附录 A。 4.2.1.1.2 抗菌药物梯度稀释 a) 抗菌药物梯度稀释液的整个配制过程严格无菌操作。 见光易分解的替加环素避光保存, 易降解、不稳定的药物如头孢克洛、氨苄西林、克拉维酸和亚胺培南现用现配。 b)
21、 抗菌药物粉末可采用标准品或药厂生产的商品化粉末。 c) 采用分析天平称药,抗菌药物的有效成分按如下公式计算: 实际称取抗菌药物粉末重量(mg)=实际配制抗菌药物储液的体积(mL)储液浓度(mg/L)/抗菌药物的效价(g/mg) 或 实际配制抗菌药物储液的体积(mL)=实际称取抗菌药物粉末重量(mg)抗菌药物的效价 (g/mg)/储液浓度(mg/L) WS/T 6392018 7 d) 配制药物储液: 药物储液的浓度不低于 1000 mg/L 或高于待测抗菌药物最高检测浓度的 10 倍。对大多数稳定、且不易降解的抗菌药物,将未用完的储液分装至无菌小管,置于-70 或更低温度贮存,时限为 6 个
22、月。每次使用取一管,避免反复冻融影响其活性。 e) 抗菌药物储液的稀释:采用倍比稀释法制备一系列所需抗菌药物检测梯度。 4.2.1.1.3 含药的 MHA 平皿 a) 将梯度对倍稀释的抗菌药物 (生长对照 MHA 平皿加无菌水) 按 1:9 比例加入 4.2.1.1.1 制备的已高压灭菌完毕且温度在 40 50 的 MHA 琼脂中。 b) 将琼脂和抗菌药物充分混匀。 c) 倾注平皿, MHA 含药琼脂平皿厚度为 3 mm4 mm。 d) 室温放置冷却至凝固,当日使用或将平皿装入密闭塑料袋中,置于 2 8 保存,贮存时限为 5 天。 e) 平皿使用前置室温平衡,可置于孵箱中 30 min 使琼脂
23、表面干燥。 4.2.1.2 操作步骤 4.2.1.2.1 制备初始接种菌悬液 被测菌株和质控菌株配制0.5麦氏浊度单位的菌悬液,约1108 CFU/mL2108 CFU/mL,作为初始接种物,并按一定顺序放入试管架。 4.2.1.2.2 稀释接种菌悬液 用无菌肉汤或生理盐水将初始接种物1:10稀释,混匀后将稀释后的接种物按排列顺序分别吸取0.1 mL至96孔微孔板。 4.2.1.2.3 接种菌悬液 a) 标记含药 MHA 平皿接种点方向。 b) 采用多点接种仪或标准接种环等将稀释后的接种物按顺序分别接种 1 L3 L 至无抗菌药物的生长对照平皿、含梯度药 MHA 平皿表面(从低浓度到高浓度)和
24、第二块生长对照平皿。最终菌液接种量为 104 CFU/点(点直径为 5 mm8 mm)。 c) 平皿室温放置至菌点干燥,但放置时间不超过 30 min。 4.2.1.2.4 孵育 置于35 2 空气环境中孵育16 h20 h。苛养菌的药敏试验平皿孵育条件和时间见附录A。 4.2.1.2.5 结果判读 将平皿置于黑色、无反光背景上读取结果。以抑制细菌肉眼可见生长的最低浓度为MIC。 4.2.2 肉汤稀释法 4.2.2.1 材料 4.2.2.1.1 阳离子校正的 Mueller-Hinton 肉汤 (Cation-adjusted Mueller-Hinton broth,CAMHB) a) 按产
25、品说明称量 CAMHB 干粉。 b) 103.4 Kpa、121.3 高压蒸汽灭菌 15 min,冷却至室温备用。 WS/T 6392018 8 c) 培养基制备完毕后宜在室温环境(25 )校正 pH 值为 7.27.4。 4.2.2.1.2 抗菌药物梯度稀释液 a) 抗菌药物储液配制、保存和稀释同琼脂稀释法。 b) 将配制好的梯度稀释抗菌药物溶液每个梯度按 0.05 mL/孔分装至 96 孔微孔板(微量肉汤稀释法)或按 1 mL/管分装至 13 mm 100 mm 带螺帽的试管中(宏量肉汤稀释法),当日使用或冻存于 -20 备用。 4.2.2.2 操作步骤 4.2.2.2.1 制备初始接种菌
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