柯乐猪和大白猪胎盘发育与繁殖性能的相关性分析.pdf
《柯乐猪和大白猪胎盘发育与繁殖性能的相关性分析.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《柯乐猪和大白猪胎盘发育与繁殖性能的相关性分析.pdf(10页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、-10.Husbandry&Veterinary Medicine,2023,55(6)HU G L,SHEN T,WU Z M,et al.Correlation anafplacentaldevelopmentandperformance in Kele pigs and Yorkshire pigsJ.Animal10.胡光玲,申涛,伍治敏,等.柯乐猪和大白猪胎盘发育与繁殖性能的相关性分析J畜牧与兽医,2 0 2 3,55(6):2023年第55卷畜牧与兽医第6 期柯乐猪和大白猪胎盘发育与繁殖性能的相关性分析胡光玲1.2.3,申涛1.2 3,伍治敏1-2.3,谭元成1.2.3,张依裕1.
2、2.3,数政1.2.3*(1.贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,贵州贵阳550 0 2 5;2.贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室,贵州贵阳550 0 2 5;3.贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550 0 2 5)摘要:旨在探讨柯乐猪与大白猪胎盘组织形态及营养转运、血管生成、抗氧化应激和细胞亡与其繁殖性能差异的相关性。比较大白猪与柯乐猪窝均产仔数、产活仔率、初生重、胎盘绒毛数量、血管数量,以及胎盘营养转运、血管生成、抗氧化应激、细胞调亡相关基因的mRNA表达水平。结果显示:柯乐猪的窝均产仔数、产活仔率和平均初生重均显著低于大白猪(P0.05);通过组织形态学分析发现,柯乐猪胎
3、盘相较于大白猪表现为绒毛数量不足和发育不良;实时荧光定量PCR显示,柯乐猪胎盘中葡萄糖转运基因溶质载体家族2 成员1(SLC2A1)和氨基酸转运基因溶质载体家族38 成员10(SLC38A10),抗氧化应激相关基因铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和过氧化氢酶(CAT),抗细胞凋亡基因B淋巴细胞瘤-2 基因(BCL-2)的转录水平显著低于大白猪胎盘(P0.05),而脂肪酸转运蛋白4(FATP4)的转录水平显著高于大白猪胎盘(P0.05);柯乐猪胎盘中超氧化物歧化酶(SOD)、CA T 酶活性显著低于大白猪胎盘(P0.05),而活性氧(ROS)自由基水平显著
4、高于大白猪胎盘(P0.05);通过TUNEL分析显示,柯乐猪胎盘组织的细胞调亡水平极显著高于大白猪胎盘(P0.01)。结论:胎盘组织形态发育不良以及营养转运、抗氧化、抗调亡能力不足可能是造成柯乐猪胎儿数量少和初生重低的重要原因,这可为探究柯乐猪繁殖性能的调控机制提供重要依据关键词:柯乐猪;初生重;胎盘;营养转运;抗氧化应激中图分类号:S814.4文献标志码:A文章编号:0 52 9-5130(2 0 2 3)0 6-0 0 0 1-10Correlation analysis of placental development and reproductive performancein Kel
5、e pigs and Yorkshire pigsHU Guanglig,SHEN Tao,U Zhimin2,AN Yuancheng,HANG Yiy-,O Zheng1,2.3*(1.Key Laboratory of Animal Genetics,Breeding and Reproduction in the Plateau Mountainous Region,Ministry of Education,Guizhou University,Guiyang 550025,China;2.Guizhou Province Key Laboratory of Animal Genet
6、ics,Breeding and Reproduction,Guizhou University,Guiyang 550025,China;3.College of Animal Science,Guizhou University,Guiyang 550025,China)Abstract:This study was to investigate the correlation of differences in placental morphologies,nutrient transport,angiogenesis,antioxi-dant stress and apoptosis
7、with reproductive performances in Kele pigs and Yorkshire pigs.The average litter size,live birth rate,birth weightand number of placental villi,number of blood vessels,placental nutrition transport,angiogenesis,antioxidant stress and apoptosis-relatedgenes mRNA expression levels were compared betwe
8、en Yorkshire pigs and Kele pigs.We found that the average litter size,live birth rate andbirth weight of Kele pigs were significantly lower than those of Yorkshire pigs(P0.05).Histomorphological analysis revealed that the pla-centa of the Collembola pigs had an insufficient number of villi and poorl
9、y developed villi as compared to that of the white pigs.Real-timequantitative PCR results showed that the transcription levels of the glucose transporter solute carrier family 2 member 1 Gene(SLC2A1)and收稿日期:2 0 2 2-0 7-2 1;修回日期:2 0 2 3-0 3-2 1基金项目:促进与加拿大、澳大利亚、新西兰及拉美地区科研合作与高层次人才培养项目(留金美【2 0 2 110 9号)
10、;贵州省优秀青年科技人才培养计划(黔科合平台人才【2 0 2 1】56 30 号);贵州省普通高等学校青年科技人才成长项目(黔教合KY字【2 0 2 1】0 8 1号);贵州省2 0 2 2年财政第二批种业发展项目(黔农计财【2 0 2 2 】10 号)第一作者:胡光玲,女,硕士研究生*通信作者:敖政,讲师,主要从事猪遗传育种与繁殖研究,E-mail:z a o g z u.e d u.c n。No.6Vol.552023Animal Husbandry&Veterinary Medicinethe amino acid transporter solute carrier family 38
11、 member 10 Gene(SLC38A10),the antioxidant stress-related genes cytoplasmic copper/zinc superoxide dismutase(CuZn-SOD),the manganese superoxide dismutase(Mn-SOD)and catalase(CAT)and anti-apoptotic geneB-cell lymphoma-2(BCL-2)in the placenta of the Kele pigs were significantly lower(P0.05),but the tra
12、nscription level of the fattyacid transporter gene fatty acid transport protein 4(FATP4)were significantly higher than those in the placenta of the Yorkshire pigs(P0.05).Furthermore,the enzyme activities of superoxide dismutase(SOD)and CAT in the placentas of the Kele pigs were significantly lower(P
13、0.05)and the level of the reactive oxygen species(ROS)was significantly higher than that of the Yorkshire pigs(P0.05).TheTUNEL analysis showed that the level of apoptosis in the placentas of the Kele pigs was significantly higher than that of the Yorkshire pigs(P0.01).Poor morphological development,
14、defects in placental nutrient transport,antioxidant and anti-apoptotic abilities might be the im-portant reasons for the low number of fetus and birth weight of the Kele pigs,which provided important basis for exploring the regulationmechanism of reproductive performance of Kele pigs.Keywords:Kele p
15、igs;birth weight;placenta;nutrient transport;antioxidant stress柯乐猪是我国优良地方猪种之一,是乌金猪系列的一个品种,属于西南高原放牧型猪种,具有抗寒、耐粗饲、抗逆性强、肉质优良、后腿发达等特征,是制作火腿的优质原料,主产地为贵州省威宁县和赫章县。然而,柯乐猪的繁殖性能较差,严重制约了柯乐猪的开发利用。柯乐猪的乳头数多在6 对左右1,经产母猪的窝均产活仔数为6 8 头2-3。前期研究发现,胎次和季节是影响柯乐猪繁殖性能的重要因素,柯乐猪产仔性能的最佳胎次为第3胎,夏季的窝产活仔数和窝断奶仔猪数均显著低于其他季节3。Liu等2 发现柯
16、乐猪卵泡刺激素亚基(folliclestimulating hormone-subunit,FSH-)基因第一内含子内存在多态性可能与其繁殖性能有关。柯乐猪乳头数性状的全基因组关联分析显示候选基因含有E3泛素蛋白连接酶的-转导蛋白重复序列(BTRC)、成纤维生长因子5(fibroblastgrowthfactor5,FCF5)、成纤维生长因子8(FGF8)、骨形态发生蛋白基因(b o n e mo r p h o g e n e t i c p r o t e i n s 3,BM P3)、Ra s G EF域家族成员1B(RA SCEF1B)、高迁移率族蛋白-B1(H M CB3),可能影响
17、猪的乳头数或繁殖性状)。然而,影响柯乐猪繁殖性能的潜在调控机制仍然不清晰。胎盘是母体与胎儿进行物质交换和信号传导的重要纽带,对宫内胎儿的生长发育发挥着重要调控作用。大量研究证据表明在胚胎附植和胎儿快速生长阶段,胎盘形态异常和胎盘功能障碍是造成宫内胎儿发育不良的主要原因之一4。随着胚外滋养层细胞的快速增殖,滋养层细胞以类似“手套”的方式嵌人到子宫内膜的基质内而形成胎盘褶皱,进一步加大胎盘与子宫内膜的接触面积,胎盘绒毛深人并连通子宫内膜的毛细血管,建立母-胎血液循环,负责母胎的营养物质交换5-6 。因此,胎盘的形态发育和转运功能都可能是造成母猪繁殖性能差异的关键因素。前期研究发现,妊娠后期梅山猪的
18、胎盘褶皱宽度小于大白猪,但是其滋养层细胞的增殖能力更强7 胎盘的主要功能之一是通过被动扩散、主动转运、胞饮等方式为胎儿转运营养物质和氧气。在胎盘中,氨基酸、葡萄糖、脂肪酸等营养物质转运需要溶质载体(solute carrier,SL C)的参与,这些溶质载体的表达与胎儿的生长发育密切相关。绵羊和大鼠的相关研究发现,下调胎盘葡萄糖转运基因溶质载体家族2成员3(SLC2A3)表达水平与胎儿体重降低有关8-9。血管生成和形成也会影响到胎盘的转运效率,血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowthfactor,VECF)及其受体(VEGFR)是调控血管生成的主要基因,胎盘VEG
19、F-A和VECFR表达失调被发现参与多种妊娠并发症的发生和发展10-1。此外,在胎盘生长发育过程中不可避免地受到氧化应激和细胞凋亡的影响。在临床研究中发现,先兆子痫、宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IU G R)等患者胎盘中抗氧化和抗凋亡性能减弱,造成胎盘形态异常和功能障碍,从而诱发胎儿宫内发育不良12 。因此,本研究通过比较柯乐猪与大白猪胎盘组织形态及营养转运、血管生成、抗氧化应激和细胞凋亡基因转录水平差异,分析与其繁殖性能的相关性,为解析柯乐猪母猪繁殖性能的调控机制提供重要依据。1材料与方法1.1主要试剂Omega总RNA提取试剂盒(R6934
20、-02),疏基乙醇(M8210-100),St a r St a i n Re d Pl u s 核酸染料(E110-0 1),琼脂糖(118 6 0),50 TAE缓冲液(T 10 6 0 -50 0),G e n s t a r 的 2 Taq PCR StarMix(A 0 12-10),购自贵州西宝生物有限公司;4%多聚甲醛(G1101-500ML)购自武汉塞维尔生物科技有限公司;反转录试剂盒(TaKaRaPrimeScriptRTreagent Kit with gDNA Eraser,RR047A),DL500 DNAMarker(3590 A),购自宝日医生物技术(北京)有限公司
21、;SYBRSelectMasterMix(447 2 90 8)购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;活性氧(ROS,20233年第55卷畜牧与兽医第6 期E004-1),总超氧化物歧化酶(SOD,A 0 0 1-1),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px,A 0 0 5-1),过氧化氢酶(CAT)汉测定试剂盒(A007-1),均购自南京建成生物工程研究所;CD31一抗(G5001),荧光二抗,4,6-二基-2-苯基吲哚(DAPI)(G 10 12),抗荧光淬灭封片剂(G1401),T U NEL 试剂盒(G1501),均购自武汉赛维尔生物科技有限公司;荧光定量96孔板(MQ50501S)购自莫纳生
22、物科技有限公司1.2动物与组织样品试验动物为遗传背景清楚、胎次为2 4胎、健康的大白猪和柯乐猪,其体重范围分别为197 228kg和148 16 7 kg,由贵州优农谷生态产业有限公司饲养。妊娠期第90 天根据文献描述的技术方法13,测定母猪P2位点的背骠厚。母猪正常分娩后,根据脐带标记区分每头仔猪的胎盘,采集后立即放入液氮中暂存,后放人-8 0 冰箱保存。此外,采集2 cm2cm的胎盘组织置于4%多聚甲醛中,用于制作石蜡切片观察胎盘组织形态。此外,母猪分娩时记录其产仔数、死胎数、存活仔猪数以及仔猪初生重,计算死胎数和存活仔猪数分别占产仔数的比例得到死胎率和产活仔率。1.3胎盘组织形态观察随机
23、选择6 头柯乐猪和6 头大白猪胎盘组织制作石蜡切片,经HE染色后观察组织形态。胎盘组织的石蜡包埋、切片和HE染色由武汉塞维尔生物科技有限公司完成。利用正置显微镜,每头猪胎盘组织取3个不同的视野,在40 倍和2 0 0 倍视野下观察胎盘整体组织形态、绒毛数量和血管数量1.4免疫荧光检测胎盘组织CD31的表达石蜡切片厚度为4m,石蜡切片脱蜡至水,用EDTA抗原修复缓冲液高温修复抗原,自然冷却后PBS洗涤3次(每次5min);甩干PBS,滴加BSA封闭30 min;去掉封闭液后在切片上滴加CD31一抗并4孵育过夜;PBS洗涤3次(每次5min),加入二抗,避光室温孵育50 min;PBS洗涤3次(每
24、次5min),滴加DAPI染液,避光室温孵育10 min;PBS洗涤3次(每次5min),加人自发荧光淬灭剂5min,流水冲洗10 min;用抗荧光淬灭封片剂封片,选用SpOrange滤光块类型,置于荧光显微镜下观察并采集图像。采用AIPATHWELL软件自动定位阳性细胞的细胞核并扩展胞质范围,计算阳性细胞面积,累计光密度和组织面积进行计算分析1.5胎盘组织的TUNEL检测利用TUNEL法检测胎盘组织的细胞凋亡情况。将石蜡切片经二甲苯浸泡2 次(5min/次),乙醇(7 0%10 0%)水合,PBS漂洗2 次。参照细胞调亡检测试剂盒说明书操作试验:滴加蛋白酶K工作液覆盖组织,37 孵育2 2
25、min,PBS洗涤3次(每次5min);切片稍甩干后滴加破膜工作液并常温孵育20min,PBS洗涤3次(每次5min);稍甩干后滴加buffer并常温孵育10 min;取适量TDT酶、dUTP、buffer按1:5:50 比例混合并覆盖组织,37 孵育2h;PBS洗涤3次(每次5min),滴加DAPI染液,避光室温孵育10 min;洗涤3次(每次5min),封片,选用SpGreen滤光块类型,镜下观察并拍照。通过计算TUNEL阳性细胞占总细胞数的比例来测定TUNEL调亡指数。TUNEL调亡指数为TUNEL-FITC染色(绿色)与细胞核DAPI染色(蓝色)的比值。每片在10 0 倍视野下随机取5
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 柯乐猪 大白 胎盘 发育 繁殖 性能 相关性 分析
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。