高效液相色谱法测定酸奶中的乳果糖.pdf
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1、饮 料 工 业2023,Vol.26,No.4检测分析收稿日期:2022-08-16作者简介:刘春霞(1982),女,工程师,本科,研究方向为乳制品检测分析。E-mail:通讯作者:李翠枝(1969),女,高级工程师,硕士,研究方向为食品安全预防控制。E-mail:摘要:建立酸奶中乳果糖的高效液相色谱检测方法。样品经调节 pH 沉淀蛋白质,超声提取后过滤,利用高效液相色谱柱分离,示差折光检测器检测,外标法定量。参考的色谱条件如下:以氨基柱(4.6 mm 250 mm,5m,或具有同等性能的色谱柱)分离;以乙腈 水 甲醇=75 19 6 为流动相,采用等梯度洗脱;流速:1.0mL/min;柱温:
2、40;进样量:10L。酸奶中乳果糖的添加量为 25mg/100g100mg/100g 时,加标回收率为 95.1%104.9%,相对标准偏差为0.883%2.78%。本方法检出限为 5mg/100g;定量限为 25mg/100g。该方法具有操作简单、结果准确、重复性好等优点,适用于酸奶中乳果糖的测定。关键词:高效液相色谱;酸奶;乳果糖Determination of Lactulose in Dairy Products by High Performance Liquid ChromatographyLIU Chun-xia,DUAN Guo-xia,LIU Li-jun,LI Cui-zh
3、i*,LV Zhi-yong,GONG Hui-li,WU Lun-wei,CHEN Jing(Inner Mongolia Yili Industrial Group Co.Ltd.,Hohhot 010110,China)Abstract:To establish a HPLC(high performance liquid chromatography)method for the determination of lactulosein yogurt.The samples were precipitated by pH,extracted by ultrasonic and filt
4、ered,separated by HPLC column,detectedbydifferentialrefractiondetector,andquantifiedbyexternalstandardmethod.Thereferencechromatographic conditions are as follows:separation by amino column(4.6mm250mm,5m,or column withequivalent properties);Take acetonitrile:water:methanol=75 19 6 as the mobile phas
5、e,and use equal degreeelution;Flow rate:1.0mL/min;Column temperature:40;Injection volume:10L.When the lactulose content was25mg/100g100mg/100g,the recoveries were 95.1%104.9%with the relative standard deviations(RSDS)of0.883%2.78%.The detection limit of this method was 5mg/100g.The limit of quantita
6、tion was 25mg/100g.Themethod has the advantages of simple operation,accurate result and good repeatability,and is suitable for thedetermination of lactulose in yogurt.Key words:HPLC;yogurt;lactulose中图分类号:TS207文献标志码:A文章编号:1007-7871(2023)04-0018-04乳果糖,又名 4-D-吡喃半乳糖基-D-果糖。非天然存在的乳果糖由一分子半乳糖和一分子果糖组成,是生牛乳中乳
7、糖经热处理后碱基异构化而形成的双糖产物,也就是说乳果糖是乳糖在牛奶热处理过程中的异构化产物1。生牛乳经不同工艺热处理后的液态乳中乳果糖含量差异明显2。因此,分离乳糖和乳果糖并准确测定乳果糖在牛奶中的含量是很关键的。目前乳果糖测定方法有酶解分光光度法3,4、离子色谱法59、气相色谱法10,11和液相色谱法12-14以及液相色谱-串联质谱法15。对于我国农业部颁布的 巴氏杀菌乳和UHT 灭菌乳中复原乳的鉴定(NY/T 939-2016)标准为酶解分光光度法,该方法操作繁琐,使用多种酶,酶的活性直接影响实验结果,其他方法都各具特色。目前尚未查到酸奶中乳果糖的测定,刘萌萌12等的高效液相色谱蒸发高效液
8、相色谱法测定酸奶中的乳果糖刘春霞,段国霞,刘丽君,李翠枝*,吕志勇,宫慧丽,武伦玮,陈静(内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特010110)182023,Vol.26,No.4检测分析饮 料 工 业光散射检测法测定乳制品中乳果糖,生鲜乳酸奶和复原乳酸奶中的乳果糖和旁边杂峰未达到 中国药典 分离度大于1.5 的要求。本方法避免了 巴氏杀菌乳和 UHT 灭菌乳中复原乳的鉴定(NY/T 939-2016)标准的操作繁琐,不需要李盛楠14的改性酰胺基色谱柱,与使用液相色谱-串联质谱法相比具有成本优势15,解决了牛奶中乳糖浓度高于乳果糖浓度三个数级而导致两者在色谱柱上分离效果不佳的问题16。进
9、一步实现酸奶中乳果糖与杂峰(乳果糖和乳糖两者之间的峰)的有效分离,此方法前处理操作简单、准确性高、重复性好,且能用常规的液相色谱仪示差折光检测器测定。1 1材料与方法材料与方法1.1材料与试剂酸奶市售;氢氧化钠(分析纯)天津市风船化学试剂科技有限公司;乙腈(色谱纯)诺尔施科技有限公司。1.2仪器与设备高效液相色谱仪(配备示差折光检测器)美国安捷伦公司;分析天平瑞士 Mettler-Toledo 公司;超纯水机美国赛默飞世尔公司;涡旋振荡器德国 IKA 公司;pH计瑞士 Mettler-Toledo 公司。1.3方法1.3.1材料处理1.3.1.1酸奶样品市场随机抽取共 7 种酸奶样品,6 个样
10、品(酸奶 1-6)作为盲样测试,1 个样品作为本底样品(酸奶 7)(本底样品分别加不同体积的标准溶液得到样品 1、样品 2、样品 3)1.3.1.2乳果糖标准储备液制备准确称 1g 乳果糖标准品,用水溶解并定容到 100mL容量瓶中,制成 10mg/mL 乳果糖标准储备液,备用。1.3.1.3乳果糖标准工作液制备分别吸取乳果糖标准储备液 0.05、0.1、0.2、0.5、1、2mL,用水定容至 10mL 容量瓶。该标准系列浓度分别为0.05、0.1、0.2、0.5、1、2mg/mL。临用前配制,根据样品含量可以调整标准工作液的浓度。1.3.2试样制备称取 20g 酸奶,加入 15mL 水,用
11、4mol/L 的氢氧化钠溶液调 pH 值至 4.554.60,将所有溶液转移到 50mL 容量瓶中,并用水定容至刻度,摇匀后再超声 10min。混匀后经滤纸过滤,滤液再经 0.2m 微孔滤膜过滤,滤液待上机检测。1.3.3仪器工作条件色谱柱:Shodex Asahipak 氨基柱 4.6mm250mm,5m,或具有同等性能的色谱柱;流动相:乙腈水甲醇=75196;流速:1.0mL/min;柱温:40;进样量:10L。1.3.4标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。1.3.5试样溶液的测定将试样溶液
12、注入高效液相色谱仪中,以保留时间定性,以峰面积外标法定量,测定峰面积,从标准曲线中计算得试样溶液中乳果糖的浓度。1.3.6计算公式按照下式计算样品中乳果糖的含量:X=CV100m式中:X试样中乳果糖的含量,mg/100g;C样液中乳果糖的浓度,mg/mL(由以上标准曲线得出);V试样定容体积,mL;m试样的质量,g。结果保留三位有效数字。1.4数据处理采用 EXCEL 对所涉及到的数据和图谱进行处理和绘制。2 2结果与分析结果与分析2.1流动相的选择对于液相色谱法测定乳果糖,现有文献1214报道采用乙腈和水作为流动相进行洗脱,有梯度,有等度。但是都很难实现乳糖和乳果糖的分离,尤其酸奶基质,乳糖
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