高脂饮食促进病毒性肝炎小鼠肝内细胞因子表达.pdf
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1、基础研究论著基金项目:湖北省自然科学基金面上项目(:)同济医院优秀青年科学基金(:)通信作者:宁琴:.湖北省武汉市硚口区解放大道 号高脂饮食促进病毒性肝炎小鼠肝内细胞因子表达吴婷 海素平 胡军剑 王晓晶 王洪武 宁琴华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科湖北武汉 摘要 目的:研究高脂饮食对病毒性肝炎小鼠肝内细胞因子表达的影响 方法:选取/小鼠共 只随机分为标准饮食组(只)、高脂饮食组(只)、标准饮食感染组(只)、高脂饮食感染组(只)标准饮食组及标准饮食感染组持续予以标准饮食喂养高脂饮食组及高脂饮食感染组持续予以高脂饮食喂养 喂养第 周末标准饮食感染组及高脂饮食感染组予以腹腔注射 型鼠肝炎病毒
2、()诱导病毒性肝炎 于感染后不同时间点采用定量逆转录聚合酶链式反应()检测肝内肿瘤坏死因子()、白介素()、表达 结果:高脂饮食喂养 周诱导小鼠出现代谢异常 感染后第 天标准饮食感染组小鼠肝内仅 表达上调而高脂饮食感染组、表达上调(均.)感染后第 天标准饮食感染组及高脂饮食感染组小鼠肝内、表达上调且高脂饮食感染组表达水平显著高于标准饮食感染组(均.)感染后第 天标准饮食感染组小鼠肝内、表达回落至未感染水平高脂饮食感染组仅 表达回落感染后第 天标准饮食感染组小鼠肝内炎性细胞因子表达均回落至未感染水平高脂饮食感染组仅、表达回落 结论:高脂饮食促使病毒性肝炎小鼠肝内炎性细胞因子表达上调出现更早、幅度
3、更高、持续更久 关键词 高脂饮食 代谢异常 病毒性肝炎 细胞因子中图分类号.文献标识码 ./.:.:.:/()()()().().:.(.).(.).:.肥胖、型糖尿病、脂肪肝、高血压等代谢性疾病已成为全球高发疾病 在新型冠状病毒肺炎()全球大流行的背景下也成为了 最常见的合并症有基础代谢性疾病的 患者进展为重症及死亡的风险更高同时也会消耗更多医疗资内科急危重症杂志 年 第 卷 第 期源 这一现状再次引发了对代谢性疾病与病毒感染性疾病相关性的关注 免疫系统活化炎性细胞因子释放是病毒感染的重要致病机制 临床研究显示有基础代谢性疾病的患者感染病毒后外周血细胞因子水平升高更为显著与病情加重密切相关
4、然而临床数据多来自于回顾性研究难以动态观察基础代谢性疾病在病毒感染病程中对细胞因子水平的影响且不能检测病变组织内细胞因子的变化本研究采用高脂饮食喂养/小鼠诱导代谢异常继而采用 型鼠肝炎病毒()感染诱导病毒性肝炎 属于鼠冠状病毒在 周龄 小鼠中可引起病毒持续感染大部分小鼠症状轻微或症状明显但可恢复仅部分小鼠进展为死亡 比较高脂饮食喂养小鼠与标准饮食喂养小鼠病毒感染后的死亡率、临床评分及感染后不同时间点肝内炎性细胞因子的表达水平观察代谢异常对病毒感染的影响材料与方法 病毒 病毒株为本研究室保存病毒株所用 滴度为./实验动物及建模分组 周龄 级雌性/小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司饲养 周后
5、随机分为标准饮食组(只)、高脂饮食组(只)、标准饮食感染组(只)、高脂饮食感染组(只)标准饮食组及标准饮食感染组持续予以标准饮食喂养高脂饮食组及高脂饮食感染组持续予以高脂饮食喂养 标准饮食组及高脂饮食组各取 只小鼠于基线及喂养 周时在禁食 后称取体重内眦静脉采血检测血清丙氨酸转氨酶、天门冬氨酸转氨酶、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、胰岛素 标准饮食感染组及高脂饮食感染组各取 只小鼠于喂养第 周末腹腔注射(./)注射后继续按原组别予以标准饮食或高脂饮食处理 观察 组小鼠感染后 内存活率及生存状态 组各取 只小鼠于喂养第 周末分别予以 (./)或 腹腔注射注射
6、后继续予以饮食干预于感染后不同时间点取材 组小鼠肝脏每组每次取 只小鼠 小鼠生存状态观察感染后 内每天观察小鼠状态及死亡情况 对小鼠皮毛质地、呼吸及身体颤抖 项特征进行评分评分标准见表 计算每组平均得分若死亡记 分死亡后不参与计分 肝内细胞因子表达水平检测提取肝组织总逆转录为 定量逆转录聚合酶链式反应()检测小鼠肝内肿瘤坏死因子()、白介素()、表达 反应体系:.上下游引物(/)各.补足至 反应条件:热启动 进入循环变性 退火 延伸 循环 次 上游引物 下 游 引 物 上游引物 下游引物 上游引物 下游引物 上游引物 下 游 引 物 以 为内参上游引物 下游引 物 采 用法比较小鼠肝内各细胞因
7、子相对表达水平试剂与仪器 高脂饲料(南通特洛菲饲料科技有限公司)小鼠胰岛素 试剂盒(瑞典 )(美国)(日 本)()(美国)实时定量 仪(美国 )罗氏全自动生化分析仪统计学分析采用 .统计学软件 软件绘图 计量资料用()表示 组间比较采用 检验临床症状评分采用重复测量数据双因素方差分析采用 法计算生存率采用 检验比较 组间的生存曲线对同一时间点 个实验组采用 检验饮食与病毒感染的相互作用采用 事后检验比较组间差异 细胞因子表达水平进行对数转换后再进行统计 以 .为差异有统计学意义内科急危重症杂志 年 第 卷 第 期表 小鼠感染 后临床评分评分 皮毛质地 呼吸 身体颤抖光泽柔顺约 次/正常无颤抖无
8、光泽较柔顺约 次/身体略有颤抖无光泽竖毛 次/较明显颤抖拱背静止懒动竖毛粘连超过 次/较明显颤抖拱背爬行缓慢竖毛粘连潮湿超过 次/伴有胸腹部舒缩明显颤抖拱背基本不能行动表 饮食干预 周后小鼠代谢指标()项目基线标准饮食组()高脂饮食组()周标准饮食组()高脂饮食组()体重().丙氨酸转氨酶(/).天门冬氨酸转氨酶(/).甘油三酯(/).总胆固醇(/).高密度脂蛋白胆固醇(/).低密度脂蛋白胆固醇(/).空腹血糖(/).胰岛素(/).注:与同一时间点标准饮食组比较.)饮食喂养 周高脂饮食组小鼠体型肥胖皮毛油腻不喜活动其体重、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、胰
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