复合EGFL7去细胞神经支架在周围神经损伤修复过程中的动物实验研究.pdf
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1、实用手外科杂志2 0 2 3 年6 月第3 7 卷第2 期JOURNALOFPRACTICALHANDSURGERYJun2023,V o l 3 7,No.2文章编号:16 7 1-2 7 2 2(2 0 2 3)0 2-0 2 3 7-0 3复合EGFL7去细胞神经支架在周围神经损伤修复过程中的动物实验研究殷超,郝增涛,王继宏,王小龙,霍志奇(内蒙古医科大学第二附属医院手足显微外科中心,内蒙古自治区呼和浩特0 10 0 9 0)摘要:目的通过构建复合EGFL7植入物的去细胞神经支架移植修复大鼠坐骨神经损伤缺损模型,从而探究EGFL7在周围神经修复过程中促进血管化和神经恢复的作用。方法手术切
2、取日本大耳白免双侧胫神经,截成1.0 cm长的节段,制备去细胞神经支架。将制备好的外源性EGFL7的去细胞神经支架复合物植入大鼠坐骨神经损伤模型,于术后4周取标本行神经电生理检测、组织取材投射电镜形态学观察等来评价神经修复效果。结果添加外源性EGFL7模型组与不添加EGFL7的模型组相比再生的有髓神经纤维数量多、形态规则、直径粗、髓鞘厚、髓鞘不折叠或崩解、髓鞘发育良好;坐骨神经测得的诱发电位曲线波幅高、潜伏期短、神经传导速度快。结论EGFL7在周围神经修复过程中可起到促进血管化和神经功能恢复的作用。关键词:EGFL7;外周神经损伤;去细胞神经支架;血管化doi:10.3969/j.issn.1
3、671-2722.2023.02.024Animal experimental research of repairing sciatic nerve injury withcompound EGFL7 decellularized neural scaffoldYIN Chao,HAO Zengtao,WANG Jihong,et al(Department of Hand and Foot Microsurgery Center,The Second Hospital Affiliated to Inner MongoliaMedical University,Huhhot,Inner M
4、ongolia Autonomous,010090,China)Abstract:Objective To study the promotion of vascularization and neural recovery by EGFL7 inperipheral nerve repair,by constructing decellularized Neural Scaffolds witn complex EGFL7 which is usedto repair rat sciatic nerve injury.Methods The dissection of the tibial
5、nerves from the legs of Japanese whiterabbits,which was to prepare decellularized neural scaffolds by cutting into 1.0 cm long segments.Implantedthe prepared decellularized neural scaffold complex with exogenous EGFL7 into the rat sciatic nerve injurymodel,to Evaluate nerve repair effects by Nerve e
6、lectrophysiological testing and projection electronmicroscope observation with specimens in 4 weeks after surgery.Results In the Model with the addition ofexogenous EGFL7,the number of myelinated nerve fibers was large,the shape was regular,the diameter wasthick,the myelin sheath was thick,the myeli
7、n sheath was not folded or disintegrated,and the myelin sheathwas well developed,when compared with the model without the addition of exogenous EGFL7.Modelwith the addition of exogenous EGFL7 had the evoked potential curve measured by the sciatic nerve hashigh amplitude,short latency and fast nerve
8、conduction velocity.Conclusion EGFL7 acts to promotevascularization and recovery of nerve function in the during peripheral nerve repair.Key words:EGFL7;Sciatic nerve injury;Decellularized neural scaffold;Vascularization郝增涛为本文通讯作者基金项目:内蒙古自治区自然科学基金项目(项目编号:2 0 2 1LHMS08051);内蒙古医科大学青年创新基金项目(项目编号:YKD202
9、0QNCX034)收稿日期:2 0 2 2-0 8-0 2作者简介:股超(19 8 9-),男,主治医师。237实验研究周围神经损伤已成为骨科临床的一种常见病,有报道显示每年每10 万人中有13 2 3 人遭受周围神经损伤带来的神经支配区域的运动和感觉障碍,如何促进损伤神经再生和功能恢复一直是困扰临床医师的难题。自体神经移植是治疗周围神经缺损的金标准,但也伴随着供体神经支配区的功能实用手外科杂志2 0 2 3 年6 月第3 7 卷第2 期JOURNALOFPRACTICALHANDSURGERYJun2023,V o l 3 7,No.2238障碍、供体有限、增加手术额外创伤等问题2 。近年来
10、生物衍生材料、同种异体神经、组织工程人工神经取得不同的效果,有望替代自体神经移植。但移植神经的恢复效果一直不是特别理想,有研究者认为这可能与神经移植物的血管化有关,是限制异体神经发挥生物学效能的关键问题3 。在血管生成过程中,血管管腔形成是极为关键的步骤,因为血流是维持新生血管稳定的决定性因素,其中血管管腔是维持新生血管血流灌注的重要因素,一旦没有血流灌注,新生血管将闭塞退化。细胞因子、神经营养因子及生长因子是促进神经新生血管生成的重要影响因素4。近来研究发现一种在新生血管发育中发挥重要作用的因子即表皮生长因子样结构域7(Epidermal growth factor一likeprotein7
11、,EG FL 7),EG FL 7 主要作用于内皮细胞,促进新生血管腔的形成5 。EGFL7在血管新生中发挥重要调节作用,能促进内皮细胞增殖、迁移。本实验通过构建复合EGFL7植入物的去细胞神经支架移植修复大鼠坐骨神经损伤缺损模型,从而探究EGFL7在周围神经修复过程中促进血管化和神经恢复的作用。1材料与方法1.1实验材料实验动物:选用体质量(2 0 0 士10)g的4周龄健康雄性Sprague-Dawley大鼠6 0 只,体质量2.0 2.5kg的6 个月龄健康雄性日本大耳白兔10 只。主要试剂与材料:EGFL7检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法,上海泽叶生物科技有限公司),重组EGFL7蛋白(
12、上海泽叶生物科技有限公司),2 0 0 0 C肌电图仪(丹麦DanecNeuromatic公司生产)。1.2实验方法去细胞神经支架制备:手术切取日本大耳白兔双侧胫神经,截成1.0 cm长的节段,置于4蒸馏水浸泡2 4h,后恒温3 7 水浴摇床下依次3.0%TritonX-100试剂6 h,4.0%鹅脱氧胆酸钠6 h,PBS缓冲液6 h,反复3 次,后PBS缓冲液洗3 次。保存于含青霉素、链霉素的PBS液中,4冰箱备用。制备复合外源性EGFL7的去细胞神经支架复合物:将制备好的去细胞神经支架,放置在重组EGFL7蛋白溶液中,4下浸泡2 448 h备用。大鼠坐骨神经损伤模型建立:SD大鼠麻醉后,备
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