重组腺相关病毒基因药物临床前评价方法的回顾与展望_李佳莘.pdf
《重组腺相关病毒基因药物临床前评价方法的回顾与展望_李佳莘.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《重组腺相关病毒基因药物临床前评价方法的回顾与展望_李佳莘.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、书书书第 卷第期华 侨 大 学 学 报(自 然 科 学 版)年月 ():重组腺相关病毒基因药物临床前评价方法的回顾与展望李佳莘,黎玲,黄艺峰,刁勇(华侨大学 医学院,福建 泉州 ;华侨大学 附属海峡医院,福建 泉州 )摘要:重组腺相关病毒()基因药物在临床应用过程中长期疗效不确定,甚至存在安全性风险,是制约其广泛应用的主要障碍 对现有 基因药物临床前评价方法进行分析和梳理 结果表明:仅进行药效学评价不能揭示 转导的细胞和分子机制,而基于转导过程分析的物理转导与功能转导评价存在结果不一致,不能反映 转导的细胞异质性和靶细胞的空间分布特征等问题,难以准确预测 基因药物的临床疗效和安全性,需要从单分
2、子、单细胞水平开展 载体胞内命运评价的新方法,以切实保障新型 基因药物的临床有效性和安全性关键词:基因治疗;临床前评价;胞内命运;重组腺相关病毒中图分类号:文献标志码:文章编号:(),(,;,):(),:;基因药物是在基因水平进行疾病的预防或治疗的药物 基因药物需要采用适当的基因递送载体,将靶基因导入特定细胞内,以纠正因基因缺陷和异常引起的疾病,理论上具有“一次治疗、终身治愈”的收稿日期:通信作者:刁勇(),男,教授,博士,博士生导师,主要从事基因药物的研究 :基金项目:国家自然科学基金资助项目(,);福建省泉州市科技计划项目():优势,已经成为生物医药领域研发的热点自欧盟和美国食品药品管理局
3、()相继批准种以重组腺相关病毒()为载体的基因药物以来,基因药物在饱受挫折后,终于进入高速发展的新时代 特别是用于治疗脊髓性肌萎缩症的 ,单次应用就可将患儿的岁存活率从提高到 ,标志着 基因药物的疗效实现了革命性突破 预测,自 年起,每年将有 项基因药物被批准上市,基因药物的全球市场规模将从 年的 亿美元增长到 年的 亿美元 在如此乐观的市场预期刺激下,辉瑞、诺华、强生等世界制药巨头纷纷布局基因治疗 我国也加强了 基因药物的研发,迄今已有 项 基因药物申请临床研究,项进入三期临床然而,维持 基因药物的长期疗效,避免毒副反应,仍然是困扰该领域研究人员的最大难题 对治疗先天性黑朦病的 的长期随访发
4、现,患者视觉功能在治疗后年达到峰值,之后有所下降,一些受试者甚至回到了治疗前状态 在欧洲获得附条件上市批准的 型血友病基因药物 迟迟没有得到 批准,很大的原因在于其长期临床疗效仍存在不确定性虽然 被公认为是最安全的基因治疗载体,但近年来接连发生的由 基因药物引起的患者死亡事件,再次敲响了用药安全的警钟临床研究表明,目前应用于基因治疗的所有 载体均存在不同程度的安全性和有效性缺陷而现有的 载体临床前评价体系尚不能准确预估其临床有效性和安全性因此,迫切需要创建一种新型临床前评价体系,以精准评估 载体的临床表现因此,本文对现有 临床前评价体系的优缺点进行评价,并就未来评价体系的建立提出建议和展望 基
5、因药物的结构及转导过程 基因药物的结构(图)非常简单,其外部为由 个腺相关病毒()衣壳蛋白形成的病毒衣壳,内部则是可表达目的基因的 基因组 在 基因组中,两端长度为 碱基的反向末端()载体结构()载体基因组结构图 基因药物的结构 重复序列()是唯一来自野生基因组的序列,其余部分都是与转基因表达相关的序列,如启动子和 ()尾,有时还含有基因表达调控序列等 基因药物的结构元件,无论是衣壳还是基因组,都会影响其药效和毒性在临床研究之前,一般是利用特定的细胞和动物模型,对候选载体进行临床前评价,即药效学评价 基因药物临床前评价体系,如图所示临床研究表明,在用药剂量相当的情况下,目前所有图 基因药物临床
6、前评价体系 华 侨 大 学 学 报(自 然 科 学 版)年 :载体在人体内的转基因表达水平都远远低于临床前研究结果 然而,为增加疗效而提高用药剂量又会引起严重的免疫毒性反应 现有临床前评价体系尚不能准确评估 载体的临床行为 基因药物的药效依赖于载体的高效转导 载体的转导是一个多步骤共同参与的过程,除入胞外,还包括胞质转运、入核、双链转化、转录、翻译等 等 首先以“物理转导”的概念描述 载体的入胞、胞质转运及入核等步骤,采用其携带的基因组 进行表征,而以“功能转导”描述其转录、翻译等过程,并采用其表达的 和蛋白进行表征通过解析转导过程进行 载体的临床前评价 载体转导的第一步是与靶细胞膜上特定受体
7、结合后入胞 学界一直将 载体的入胞作为限制其转导效率及细胞靶向的决定性因素,大量的研究集中在 衣壳结构的改造,以提高其转导效率或改变其转导的组织(细胞)专属性早在 年,等 就发现 载体的入胞效率并不低,关键在于入胞后载体基因组的双链转化及双链 ()的胞内稳定性 与野生型 一样,常规 载体包装的基因组也是单链 (),必须在细胞核内经历双链转化才具备转录活性 在细胞核内脱去 衣壳的游离 非常不稳定,必须迅速形成 线性的 稳定性仍然较差,只可以作为转基因瞬时表达的模板 如果要持久表达转基因,还需要形成可抵御核酸酶降解的环状 结构 等 研究发现,载体以很低的剂量静注给药后,就可以进入几乎所有小鼠肝脏细
8、胞,传统的细胞和动物评价方法远远低估了 载体的入胞效率 基于物理转导的评价方法基于物理转导的评价方法的指导思想如下:高效的物理转导是 载体实现转基因表达的前提,在多种载体共同参与的竞争条件下,对特定细胞物理转导效率最高的为最佳靶向载体 是一种位点特异性的 重组酶,能特异识别基因组中的 位点,介导 位点间的序列重组或删除基于 重组的靶向进化()平台就是基于 重组技术的 载体评价体系(图),采用 转基因小鼠直接进行体内评价 仅在该模型动物的特定类型细胞中表达,可精准体内定位靶细胞 当基因组中含有 位点的 载体物理转导 阳性的细胞后,其相应基因组序列发生反转重组,通过聚合酶链式反应(),就可以检出靶
9、向转导特定细胞的 载体 等 采用 平台对常用的 ,和 载体的体内转导行为进行评价,证实 和 载体的肝靶向转导能力优于 ,与基于细胞和动物模型的评价体系结果一致同时发现,随着给药剂量增加,和 载体的脱靶转导现象越来越明显,说明 平台的细胞分辨率显著提高,更适合细胞水平的筛选和评价 采用 平台对基于 改造的候选载体进行评价,发现 载体转导中枢神经细胞的效率比原 提高了 倍,且主要局限于星状胶质细胞和神经元 在 基础上继续进行改造和筛选,又发现了靶向转导皮层神经元和纹状体神经元的 载体,以及靶向转导外周背根神经节神经元的 载体,为今后中枢神经系统的精准基因治疗提供了优化载体 基于功能转导的评价方法物
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 重组 相关 病毒 基因 药物 临床 评价 方法 回顾 展望 李佳莘
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。