包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用.pdf
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1、第 49 卷 第 4 期2023年 7 月吉林大学学报(医学版)Journal of Jilin University(Medicine Edition)Vol.49 No.4Jul.2023DOI:10.13481/j.1671587X.20230405包虫抗原 B通过肿瘤坏死因子受体 2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用宋传龙,焦红杰,海力其古丽努日丁,岳迎宾,严媚(新疆医科大学第一附属医院儿科中心,新疆 乌鲁木齐 830054)摘要 目的目的:探讨包虫抗原 B(HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法方法:将野生型(WT)和肿瘤坏死
2、因子受体 2(TNFR2)基因敲除(TNFR2/)的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2/对照组、TNFR2/ITP模型组和 TNFR2/HA-B 组,检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中 M2 巨噬细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中精氨酸酶 1(Arg1)、白细胞介素 10(IL-10)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和白细胞介素 6(IL-6)水平,采用实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中 Arg1、IL-10、iNOS 和 IL-
3、6 表达水平。分别将 WT 对照组和 TNFR2/对照组小鼠 BMDM 诱导为 M2 巨噬细胞(WT M2 组和 TNFR2/M2 组),加入 HA-B(WT M2+HA-B 组和 TNFR2/M2+HA-B 组),采用 RT-qPCR 法 检 测 各 组 细 胞 中 Arg1 和 IL-10 mRNA 表 达 水 平。结 果结 果:分 别 与 WT 对 照 组 和TNFR2/对照组比较,WT-ITP 模型组和 TNFR2/ITP 模型组小鼠体质量降低(P0.05),脾脏和胸腺指数升高(P0.05),血小板和红细胞数量减少(P0.05),血红蛋白水平降低(P0.05),白细胞数量增加(P0.0
4、5),凝血时间延长(P0.05);外周血中 M2 巨噬细胞百分率降低(P0.05),血清中 Arg1 和 IL-10 水平降低(P0.05),iNOS 和 IL-6 水平升高(P0.05);BMDM 中Arg1 和 IL-10 mRNA 表达水平降低(P0.05),iNOS 和 IL-6 mRNA 表达水平升高(P0.05)。与WT-ITP 模型组比较,WT-HA-B 组小鼠体质量增加(P0.05),脾脏和胸腺指数降低(P0.05),血小板和红细胞数量增加(P0.05),血红蛋白水平升高(P0.05),白细胞数量减少(P0.05),凝血时间缩短(P0.05);外周血中 M2巨噬细胞百分率升高(
5、P0.05),血清中 Arg1和 IL-10水平升高(P0.05),iNOS 和 IL-6 水平降低(P0.05);BMDM 中 Arg1 和 IL-10 mRNA 表达水平升高(P0.05),iNOS和 IL-6 mRNA 表达水平降低(P0.05)。与 WT-HA-B组比较,TNFR2/HA-B组小鼠体质量降低(P0.05),脾脏和胸腺指数升高(P0.05),血小板和红细胞数量减少(P0.05),血红蛋白水平降低(P0.05),白细胞数量增加(P0.05),凝血时间延长(P0.05);外周血中 M2 巨噬细胞百分率降低(P0.05),血 清 中 Arg1 和 IL-10 水 平 降 低(P
6、0.05),iNOS 和IL-6 水平升高(P0.05);BMDM 中 Arg1 和 IL-10 mRNA 表 达 水 平 降 低(P0.05),iNOS 和IL-6 mRNA 表达水平升高(P0.05)。与 WT M2组比较,WT M2+HA-B组 M2巨噬细胞中 Arg1和IL-10 mRNA 表达水平升高(P0.05);与 WT M2+HA-B 组比较,TNFR2/M2+HA-B 组 M2巨噬细胞中 Arg1和 IL-10 mRNA 表达水平降低(P0.05)。结论结论:HA-B 可通过 TNFR2促进巨噬细胞M2极化,进而发挥治疗 ITP的作用。关键词 包虫抗原 B;巨噬细胞 M2极化
7、;免疫性血小板减少症;肿瘤坏死因子受体 2中图分类号 R558.2;R593.2文献标志码 A文章编号 1671587X(2023)04085809收稿日期 20220921基金项目 国家自然科学基金项目(82160031);省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室包虫病研究专项项目(SKL-HIDCA-2020-BC1);新疆维吾尔自治区科技厅天山创新团队计划项目(2020D14027)作者简介 宋传龙(1988),男,山东省临沂市人,住院医师,在读博士研究生,主要从事小儿急危重症医学及儿童血液系统疾病基础和临床方面的研究。通信作者 严 媚,主任医师,教授,博士研究生导师(E-mail:)
8、858宋传龙,等.包虫抗原 B通过肿瘤坏死因子受体 2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症Improvement effect of hydatid antigen B on immune thrombocytopenia in mice by regulating macrophage polarization through tumor necrosis factor receptor 2SONG Chuanlong,JIAO Hongjie,HAILIQIGULI Nuriding,YUE Yingbin,YAN Mei(Pediatric Center,First Affiliat
9、ed Hospital,Xinjiang Medical University,Urumqi 830054,China)ABSTRACT Objective:To discuss the improvement effect of hydatid antigen B(HA-B)on the immune thrombocytopenia(ITP)of the mice,and to clarify its related mechanism.Methods:The C57/B6 mice with wild-type(WT)and tumor necrosis factor receptor
10、2(TNFR2)gene knockout(TNFR2/)were divided into WT control group,WT-ITP model group,WT-HA-B group,TNFR2/control group,TNFR2/ITP model group,and TNFR2/HA-B group.The body weights,organ indexes,and blood routine indexes of mice in various groups were detected.The percentages of M2 macrophages in periph
11、eral blood of mice in various groups were detected by flow cytometry;enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)method was used to detect the levels of Arginase 1(Arg1),interleukin-10(IL-10),inductible nitric oxide synthase(iNOS),and interleukin-6(IL-6)in serum of the mice in various groups;real-time f
12、luorescence quantitative PCR(RT-qPCR)method was used to detect the expression levels of Arg1,IL-10,iNOS and IL-6 in bone marrow derived macrophages(BMDM)of the mice in various groups.The BMDM of the mice in WT control group and TNFR2/control group were induced into the M2 macrophages(WT M2 group and
13、 TNFR2/M2 group).After adding HA-B(WT M2+HA-B group and TNFR2/M2+HA-B group),the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the cells in various groups were detected by RT-qPCR method.Results:Compared with WT control group and TNFR2/control group,the body weights of the rats in WT-ITP model group a
14、nd TNFR2/ITP model group were decreased(P0.05),the spleen and thymus indexes were increased(P0.05),the platelet counts and red blood cell counts were decreased(P0.05),the hemoglobin levels were decreased(P0.05),the white blood cell counts were increased(P0.05),and the coagulation time were increased
15、(P0.05);the percentages of M2 macrophages in the peripheral blood were decreased(P0.05),the levels of Arg1 and IL-10 in serum were decreased(P0.05),and the levels of iNOS and IL-6 were increased(P0.05);the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the BMDM were decreased(P0.05),while the expressio
16、n levels of iNOS and IL-6 mRNA were increased(P0.05).Compared with WT-ITP model group,the body weight of the mice in WT-HA-B group was increased(P0.05),the spleen and thymus indexes were decrease(P0.05),the platelet count and red blood cell count were increased(P0.05),the hemoglobin level was increa
17、sed(P0.05),the white blood cell count was decrease(P0.05),and the coagulation time was decreased(P0.05);the percentage of M2 macrophages in the peripheral blood was increased(P0.05),the levels of Arg1 and IL-10 in the serum were increased(P0.05),and the levels of iNOS and IL-6 in serum were decrease
18、d(P0.05);the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the BMDM were increased(P0.05),while the expression levels of iNOS and IL-6 mRNA were decreased(P0.05).Compared with WT-HA-B group,the body weight of the mice in TNFR2/HA-B group was decreased(P0.05),the spleen and thymus indexes were increase
19、d(P0.05),the platelet count and red blood cell count were decreased(P0.05),the hemoglobin level was decreased(P0.05),the white blood cell count was increased(P0.05),and the coagulation time was increased(P0.05);the percentage of M2 macrophages in the peripheral blood was decreased(P0.05),the levels
20、of Arg1 and IL-10 in the serum were decreased(P0.05),and the levels of iNOS and 859第 49 卷 第 4 期 2023 年 7 月吉林大学学报(医学版)IL-6 were increased(P0.05);the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the BMDM were decreased(P0.05),while the expression levels of iNOS and IL-6 mRNA were increased(P0.05).Compa
21、red with WT M2 group,the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the macrophages in WT M2+HA-B group were increased(P0.05);compared with WT M2+HA-B group,the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the M2 macrophages in TNFR2/M2+HA-B group were decreased(P0.05).Conclusion:HA-B can promote th
22、e macrophage M2 polarization through TNFR2,thereby exerting the therapeutic effect on ITP.KEYWORDS Hydatid antigen B;Macrophages M2 polarization;Immune thrombocytopenia;Tumor necrosis factor receptor 2 免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)是一种自身免疫性出血性疾病,由血小板破坏增加和血小板生成不足引起血小板数量减少,可导致出血事件1。据报道,9.6%成人
23、ITP 患者可出现严重出血,导致其死亡率 明 显 升 高2。包 虫 抗 原 B(hydatid antigen B,HA-B)是一种相对分子质量约为 160 000 的寡聚脂蛋白,在细粒棘球蚴液中含量丰富3。研究4显示:HA-B 作为一种免疫调节蛋白可诱导机体对寄 生 虫 的 免 疫 反 应。RIGAN 等5研 究 发 现:HA-B可引发辅助性 T 淋巴细胞 1(T helper cell 1,Th1)和 辅 助 性 T 淋 巴 细 胞 2(T helper cell 2,Th2)活化,说明 HA-B 可能干预体内免疫反应。巨噬细胞是参与炎症过程和免疫反应的吞噬性单核细胞,以 2 种不同的激活
24、表型发挥免疫调节作用:经典激活的 M1 巨噬细胞和交替激活的 M2 巨噬细胞6。在 ITP 患者脾脏中,巨噬细胞向 M1 异常极化,M1巨噬细胞浸润增加,M1/M2巨噬细胞比例失衡,促炎细胞因子释放增加,进一步导致免疫反应受损7。肿 瘤 坏 死 因 子 (tumor necrosis factor-,TNF-)是其中一种促炎细胞因子,肿瘤坏死因子受体 2(tumor necrosis factor receptor 2,TNFR2)可 作 为 其 受 体 与 TNF-结 合8。研 究9显 示:TNFR2 及其配体的激活可明显促进巨噬细胞向抗炎 M2 巨噬细胞的极化。但 HA-B 是否能改善 I
25、TP患者 M1/M2 巨噬细胞免疫失衡以及 TNFR2 是否发挥调节作用目前尚不清楚。本研究采用注射抗小鼠 血 小 板 血 清(anti-mouse platelet serum,APS)的方法构建小鼠 ITP 模型,研究 HA-B 对 ITP 的治疗作用,同时 通 过 TNFR2 基 因 敲 除 小 鼠 探 讨HA-B 发挥治疗作用的可能机制,以期为 ITP 的临床防治研究提供参考。1 材料与方法 1.1实验动物实验动物、主要试剂和仪器主要试剂和仪器TNFR2 基因敲除(TNFR2/)小鼠购自南京集萃药康生物科技有限公司。所有 TNFR2/小鼠与 C57BL/6J 小鼠回交至少 6 代,并以
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