包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用.pdf

第 49 卷 第 4 期2023年 7 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.4Jul.2023DOI：10.13481/j.1671587X.20230405包虫抗原 B通过肿瘤坏死因子受体 2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用宋传龙,焦红杰,海力其古丽努日丁,岳迎宾,严媚（新疆医科大学第一附属医院儿科中心，新疆 乌鲁木齐 830054）摘要 目的目的：探讨包虫抗原 B（HA-B）对小鼠免疫性血小板减少症（ITP）的改善作用，阐明其相关作用机制。方法方法：将野生型（WT）和肿瘤坏死因子受体 2（TNFR2）基因敲除（TNFR2/）的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2/对照组、TNFR2/ITP模型组和 TNFR2/HA-B 组，检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标，采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中 M2 巨噬细胞百分率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组小鼠血清中精氨酸酶 1（Arg1）、白细胞介素 10（IL-10）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和白细胞介素 6（IL-6）水平，采用实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）中 Arg1、IL-10、iNOS 和 IL-6 表达水平。分别将 WT 对照组和 TNFR2/对照组小鼠 BMDM 诱导为 M2 巨噬细胞（WT M2 组和 TNFR2/M2 组），加入 HA-B（WT M2+HA-B 组和 TNFR2/M2+HA-B 组），采用 RT-qPCR 法 检 测 各 组 细 胞 中 Arg1 和 IL-10 mRNA 表 达 水 平。结 果结 果：分 别 与 WT 对 照 组 和TNFR2/对照组比较，WT-ITP 模型组和 TNFR2/ITP 模型组小鼠体质量降低（P0.05），脾脏和胸腺指数升高（P0.05），血小板和红细胞数量减少（P0.05），血红蛋白水平降低（P0.05），白细胞数量增加（P0.05），凝血时间延长（P0.05）；外周血中 M2 巨噬细胞百分率降低（P0.05），血清中 Arg1 和 IL-10 水平降低（P0.05），iNOS 和 IL-6 水平升高（P0.05）；BMDM 中Arg1 和 IL-10 mRNA 表达水平降低（P0.05），iNOS 和 IL-6 mRNA 表达水平升高（P0.05）。与WT-ITP 模型组比较，WT-HA-B 组小鼠体质量增加（P0.05），脾脏和胸腺指数降低（P0.05），血小板和红细胞数量增加（P0.05），血红蛋白水平升高（P0.05），白细胞数量减少（P0.05），凝血时间缩短（P0.05）；外周血中 M2巨噬细胞百分率升高（P0.05），血清中 Arg1和 IL-10水平升高（P0.05），iNOS 和 IL-6 水平降低（P0.05）；BMDM 中 Arg1 和 IL-10 mRNA 表达水平升高（P0.05），iNOS和 IL-6 mRNA 表达水平降低（P0.05）。与 WT-HA-B组比较，TNFR2/HA-B组小鼠体质量降低（P0.05），脾脏和胸腺指数升高（P0.05），血小板和红细胞数量减少（P0.05），血红蛋白水平降低（P0.05），白细胞数量增加（P0.05），凝血时间延长（P0.05）；外周血中 M2 巨噬细胞百分率降低（P0.05），血 清 中 Arg1 和 IL-10 水 平 降 低（P0.05），iNOS 和IL-6 水平升高（P0.05）；BMDM 中 Arg1 和 IL-10 mRNA 表 达 水 平 降 低（P0.05），iNOS 和IL-6 mRNA 表达水平升高（P0.05）。与 WT M2组比较，WT M2+HA-B组 M2巨噬细胞中 Arg1和IL-10 mRNA 表达水平升高（P0.05）；与 WT M2+HA-B 组比较，TNFR2/M2+HA-B 组 M2巨噬细胞中 Arg1和 IL-10 mRNA 表达水平降低（P0.05）。结论结论：HA-B 可通过 TNFR2促进巨噬细胞M2极化，进而发挥治疗 ITP的作用。关键词 包虫抗原 B；巨噬细胞 M2极化；免疫性血小板减少症；肿瘤坏死因子受体 2中图分类号 R558.2；R593.2文献标志码 A文章编号 1671587X(2023)04085809收稿日期 20220921基金项目 国家自然科学基金项目（82160031）；省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室包虫病研究专项项目（SKL-HIDCA-2020-BC1）；新疆维吾尔自治区科技厅天山创新团队计划项目（2020D14027）作者简介 宋传龙（1988），男，山东省临沂市人，住院医师，在读博士研究生，主要从事小儿急危重症医学及儿童血液系统疾病基础和临床方面的研究。通信作者 严 媚，主任医师，教授，博士研究生导师（E-mail：）858宋传龙，等.包虫抗原 B通过肿瘤坏死因子受体 2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症Improvement effect of hydatid antigen B on immune thrombocytopenia in mice by regulating macrophage polarization through tumor necrosis factor receptor 2SONG Chuanlong,JIAO Hongjie,HAILIQIGULI Nuriding,YUE Yingbin,YAN Mei（Pediatric Center，First Affiliated Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China）ABSTRACT Objective：To discuss the improvement effect of hydatid antigen B（HA-B）on the immune thrombocytopenia（ITP）of the mice，and to clarify its related mechanism.Methods：The C57/B6 mice with wild-type（WT）and tumor necrosis factor receptor 2（TNFR2）gene knockout（TNFR2/）were divided into WT control group，WT-ITP model group，WT-HA-B group，TNFR2/control group，TNFR2/ITP model group，and TNFR2/HA-B group.The body weights，organ indexes，and blood routine indexes of mice in various groups were detected.The percentages of M2 macrophages in peripheral blood of mice in various groups were detected by flow cytometry；enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）method was used to detect the levels of Arginase 1（Arg1），interleukin-10（IL-10），inductible nitric oxide synthase（iNOS），and interleukin-6（IL-6）in serum of the mice in various groups；real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR）method was used to detect the expression levels of Arg1，IL-10，iNOS and IL-6 in bone marrow derived macrophages（BMDM）of the mice in various groups.The BMDM of the mice in WT control group and TNFR2/control group were induced into the M2 macrophages（WT M2 group and TNFR2/M2 group）.After adding HA-B（WT M2+HA-B group and TNFR2/M2+HA-B group），the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the cells in various groups were detected by RT-qPCR method.Results：Compared with WT control group and TNFR2/control group，the body weights of the rats in WT-ITP model group and TNFR2/ITP model group were decreased（P0.05），the spleen and thymus indexes were increased（P0.05），the platelet counts and red blood cell counts were decreased（P0.05），the hemoglobin levels were decreased（P0.05），the white blood cell counts were increased（P0.05），and the coagulation time were increased（P0.05）；the percentages of M2 macrophages in the peripheral blood were decreased（P0.05），the levels of Arg1 and IL-10 in serum were decreased（P0.05），and the levels of iNOS and IL-6 were increased（P0.05）；the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the BMDM were decreased（P0.05），while the expression levels of iNOS and IL-6 mRNA were increased（P0.05）.Compared with WT-ITP model group，the body weight of the mice in WT-HA-B group was increased（P0.05），the spleen and thymus indexes were decrease（P0.05），the platelet count and red blood cell count were increased（P0.05），the hemoglobin level was increased（P0.05），the white blood cell count was decrease（P0.05），and the coagulation time was decreased（P0.05）；the percentage of M2 macrophages in the peripheral blood was increased（P0.05），the levels of Arg1 and IL-10 in the serum were increased（P0.05），and the levels of iNOS and IL-6 in serum were decreased（P0.05）；the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the BMDM were increased（P0.05），while the expression levels of iNOS and IL-6 mRNA were decreased（P0.05）.Compared with WT-HA-B group，the body weight of the mice in TNFR2/HA-B group was decreased（P0.05），the spleen and thymus indexes were increased（P0.05），the platelet count and red blood cell count were decreased（P0.05），the hemoglobin level was decreased（P0.05），the white blood cell count was increased（P0.05），and the coagulation time was increased（P0.05）；the percentage of M2 macrophages in the peripheral blood was decreased（P0.05），the levels of Arg1 and IL-10 in the serum were decreased（P0.05），and the levels of iNOS and 859第 49 卷 第 4 期 2023 年 7 月吉林大学学报（医学版）IL-6 were increased（P0.05）；the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the BMDM were decreased（P0.05），while the expression levels of iNOS and IL-6 mRNA were increased（P0.05）.Compared with WT M2 group，the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the macrophages in WT M2+HA-B group were increased（P0.05）；compared with WT M2+HA-B group，the expression levels of Arg1 and IL-10 mRNA in the M2 macrophages in TNFR2/M2+HA-B group were decreased（P0.05）.Conclusion：HA-B can promote the macrophage M2 polarization through TNFR2，thereby exerting the therapeutic effect on ITP.KEYWORDS Hydatid antigen B；Macrophages M2 polarization；Immune thrombocytopenia；Tumor necrosis factor receptor 2 免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia，ITP）是一种自身免疫性出血性疾病，由血小板破坏增加和血小板生成不足引起血小板数量减少，可导致出血事件1。据报道，9.6%成人 ITP 患者可出现严重出血，导致其死亡率 明 显 升 高2。包 虫 抗 原 B（hydatid antigen B，HA-B）是一种相对分子质量约为 160 000 的寡聚脂蛋白，在细粒棘球蚴液中含量丰富3。研究4显示：HA-B 作为一种免疫调节蛋白可诱导机体对寄 生 虫 的 免 疫 反 应。RIGAN 等5研 究 发 现：HA-B可引发辅助性 T 淋巴细胞 1（T helper cell 1，Th1）和 辅 助 性 T 淋 巴 细 胞 2（T helper cell 2，Th2）活化，说明 HA-B 可能干预体内免疫反应。巨噬细胞是参与炎症过程和免疫反应的吞噬性单核细胞，以 2 种不同的激活表型发挥免疫调节作用：经典激活的 M1 巨噬细胞和交替激活的 M2 巨噬细胞6。在 ITP 患者脾脏中，巨噬细胞向 M1 异常极化，M1巨噬细胞浸润增加，M1/M2巨噬细胞比例失衡，促炎细胞因子释放增加，进一步导致免疫反应受损7。肿 瘤 坏 死 因 子 （tumor necrosis factor-，TNF-）是其中一种促炎细胞因子，肿瘤坏死因子受体 2（tumor necrosis factor receptor 2，TNFR2）可 作 为 其 受 体 与 TNF-结 合8。研 究9显 示：TNFR2 及其配体的激活可明显促进巨噬细胞向抗炎 M2 巨噬细胞的极化。但 HA-B 是否能改善 ITP患者 M1/M2 巨噬细胞免疫失衡以及 TNFR2 是否发挥调节作用目前尚不清楚。本研究采用注射抗小鼠 血 小 板 血 清（anti-mouse platelet serum，APS）的方法构建小鼠 ITP 模型，研究 HA-B 对 ITP 的治疗作用，同时 通 过 TNFR2 基 因 敲 除 小 鼠 探 讨HA-B 发挥治疗作用的可能机制，以期为 ITP 的临床防治研究提供参考。1 材料与方法 1.1实验动物实验动物、主要试剂和仪器主要试剂和仪器TNFR2 基因敲除（TNFR2/）小鼠购自南京集萃药康生物科技有限公司。所有 TNFR2/小鼠与 C57BL/6J 小鼠回交至少 6 代，并以 TNFR2/小鼠同窝出生的野生型（wild type，WT）C57BL/6J 小鼠作为对照组，动物生产许可证号：SCXK（苏）2018-0008。所有小鼠在室温 25 和自然光暗周期环境中饲养，实验期间自由进食和饮水，动物使用许可证号：SYXK（新）2018-0003。本研究经本院伦理委员会审核通过，所有动物操作均符合实验动物使用和保护条例。HA-B 的 IgG 抗体由苏州百远生物科技有限公司合成，醋酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）购自武汉普诺赛生命科技有限公司，3，5-二叔丁基-4-羟基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）、乙酸钠和硫酸铵购自广州乾旭生物科技有限公司，Tris和甘氨酸购自北京百奥莱博科技有限公司，豚鼠抗小鼠血小板 血 清 购 自 南 京 金 斯 瑞 生 物 科 技 有 限 公 司，TRIzol、逆转录试剂盒和 SYBR Green 试剂购自湖南 艾 科 瑞 生 物 科 技 有 限 公 司，精 氨 酸 酶 1（arginase1，Arg1）、白细胞介素 10（interleukin-10，IL-10）、诱导型一氧化氮合成酶（inductible nitric oxide synthase，iNOS）和 白 细 胞 介 素6（interleukin-6，IL-6）引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，Arg1、IL-10、iNOS和 IL-6酶联 免 疫 吸 附 试 验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒购自南京建成生物工程研究所，红细胞裂解液、荧光标记抗体（PE-CD206）和固定/破核膜试剂盒均购自美国 eBioscience公司，巨 噬 细 胞 集 落 刺 激 因 子（macrophage colony-stimulating factor，M-CSF）和 白 细 胞 介 素 4（interleukin-4，IL-4）购 自 美 国 PeproTech 公 司，RPMI 1640培养基和胎牛血清（fetal bovine serum，860宋传龙，等.包虫抗原 B通过肿瘤坏死因子受体 2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症FBS）购自美国 Gibco公司。全自动动物血液细胞分析仪（BC-2800 VET）购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。1.2HA-B 的制备的制备包虫囊液从自然感染羊的内脏中获得，装有包虫囊液的 50 mL 离心管 1 500 g离心 15 min，将上清液 4 条件下用 0.005 mol L1醋酸盐缓冲液（pH 值 5.0）透析过夜，5 000 g 离心 30 min。将沉淀溶解在 10 mL 2 mol L1 PBS 缓冲液（pH 值 8.0）中。将制剂用 40%硫酸铵 5 mL饱和并混合 1 h，5 000 g 离心 15 min。收集含有HA-B 的上清液。HA-B 纯化按照 ORIOL 等10的方案进 行。将 上 清 液 用 乙 酸 钠（5 mmol L1，pH 值 5.0）沉 淀 后 重 新 悬 浮 在 含 有 20 mol L1 BHT 的 PBS 缓冲液中。采用针对 HA-B 的 IgG 抗体对其进行免疫亲和层析。抗体分别与溴化氰活化的琼脂糖 4B 树脂（GE Healthcare）偶联并装柱。用 100 mmol L1 tris-甘氨酸（pH 值 2.5）洗脱每根柱中结合的 HA-B，进行超滤透析，最后浓缩以备使用。将洗脱的 HA-B 进行 SDS-PAGE 电泳，考马斯亮蓝染色判断条带大小是否正确，具体方法见参考文献 11。1.3ITP 小鼠模型制备小鼠模型制备、分组和处理方法分组和处理方法将 WT和 TNFR2/小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B 组、TNFR2/对照组、TNFR2/ITP模型组和 TNFR2/HA-B 组，每组 10 只。WT 对照组和 TNFR2/对照 组 小 鼠 按 每 20 g 体 质 量100 L剂量腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠均按100 L 剂量每天注射 14 稀释的 APS 以维持血小板持续低水平，制备 ITP 模型。WT-HA-B 组和TNFR2/HA-B 组 小 鼠 于 造 模 1 周 后 开 始 给 予HA-B（每 20 g体质量 10 g）肌肉注射，其余各组小鼠给予等量生理盐水肌肉注射，持续给药 2周后处死小鼠。1.4各组小鼠体质量和脏器指数测定各组小鼠体质量和脏器指数测定测定各组小鼠体质量，解剖并观察小鼠的实质性脏器有无明显的病理改变，称量小鼠脾脏和胸腺质量并计算脏器 指 数，脏 器 指 数=脏 器 湿 质 量（mg）/体 质量（g）。1.5检测各组小鼠血常规指标检测各组小鼠血常规指标采用摘除眼球法取各组小鼠血放入含肝素钠的采血管中，按照迈瑞 BC-2800 VET 型血细胞分析仪说明书检测小鼠外周血中血小板数量、白细胞数量、红细胞数量、血红蛋白水平和凝血时间。1.6流式细胞术检测各组小鼠外周血中流式细胞术检测各组小鼠外周血中 M2 巨噬巨噬细胞百分率细胞百分率取各组小鼠新鲜抗凝血 100 L，经红细胞裂解液处理去除红细胞后，500 g 离心 5 min，收集细胞，每管加入 500 L 细胞悬液，除空白管外，加入 PE-CD206 抗体，经室温避光孵育 30 min后洗涤，弃上清，加入 PBS 缓冲液 500 L，采用流式细胞术上机检测 M2巨噬细胞百分率。1.7ELISA 法检测各组小鼠血清中法检测各组小鼠血清中 Arg1、IL-10、iNOS 和和 IL-6水平水平采集各组小鼠全血样本，4、3 000 g 离心 10 min 取上清即为血清样品。按照试剂 盒 说 明 书 检 测 小 鼠 血 清 中 Arg1、IL-10、iNOS 和 IL-6 水平。将标准品工作液和待测样品加入样品孔中，将覆膜覆在酶标板上，轻轻晃动混匀，37孵育 20 min；弃 去 酶 标 板 中 液 体，洗涤5次，拍干，除空白孔外各孔加入酶标抗体，盖上覆膜，37 孵育 30 min，弃去 液 体，洗 涤 液 洗涤，重复 5次，拍干；在样品孔中加入显色剂 A 和B，盖上覆膜，轻轻 震 荡 混 匀，37 避 光 孵 育10 min；加入终止液终止反应，立即用酶标仪测定450 nm 波长处吸光度（A）值。根据标准品浓度对应 A值绘制标准曲线，并根据样品 A值计算样品中各检测指标水平。1.8 小 鼠 骨 髓 来 源 巨 噬 细 胞小 鼠 骨 髓 来 源 巨 噬 细 胞（bone marrow-derived macrophage，BMDM）提 取提 取 WT 对 照 组和 TNFR2/对照组小鼠颈椎脱臼处死后，于无菌条件下将大腿骨髓取出。PBS缓冲液冲洗髓腔，收集吹下的骨髓细胞，经红细胞裂解液处理后，使用含 有 10%FBS 的 RPMI 1640 培 养 基 并 加 入20 g L1 M-CSF 培养 5 d后得到 BMDM12。1.9M2 巨噬细胞的诱导及与巨噬细胞的诱导及与 HA-B 共孵育共孵育将WT 对照组和 TNFR2/对照组小鼠 BMDM 分别诱导为 M2 巨噬细胞，同时加入 HA-B 共孵育，分别为WT M2组（20 g L1 IL-4）、WT M2+HA-B 组（20 g L1 IL-4+20 g L1 HA-B）、TNFR2/M2组（20 g L1 IL-4）和 TNFR2/M2+HA-B 组（20 g L1 IL-4+20 g L1 HA-B），诱导 24 h 后采 用 实 时 荧 光 定 量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）法检测各组 M2巨噬细胞中 Arg1和 IL-10 mRNA表达水平。1.10RT-qPCR 法检测各组法检测各组 BMDM 和和 M2 巨噬细巨噬细胞 中胞 中 Arg1、IL-10、iNOS 和和 IL-6 mRNA 表 达 水 平表 达 水 平 TRIzol 试 剂 提 取 各 组 细 胞 RNA。逆 转 录 和RT-qPCR 法检测均按照试剂盒说明进行操作。反861第 49 卷 第 4 期 2023 年 7 月吉林大学学报（医学版）应体系：上下游引物各 0.2 L，cDNA 样本 1 ng，2SYBR Green Pro Taq HS Premix 5.6 L，无核酸酶水补充体系至 10 L。反应条件：95 预变性30 s；95 变性 7 s，60 退火 30 s，共 40 个循环。采用 2Ct法计算目的基因 mRNA 表达水平。引物序列：Arg1，F 5-AGCACTGAGGAAAGCTGG-TC-3，R 5-TACGTCTCGCAAGCCAATGT-3；IL-10,F 5-GAGCTAAGGGAAGGGCGG-3，R 5-ATAAACAGCAGCCCCAGGAC-3；iNOS，F 5-CAACAGGGAGAAAGCGCAAA-3，R 5-T-GATGGACCCCAAGCAAGAC-3；IL-6，F 5-G-CCTTCTTGGGACTGATGCT-3，R 5-TGTGA-CTCCAGCTTATCTCTTGG-3；GAPDH，F 5-A-ATGGGCAGCCGTTAGGAAA-3，R 5-GCGC-CCAATACGACCAAATC-3。1.11统计学分析统计学分析采用 GraphPad Prism 8.0 和SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。各组小鼠体质量、脏器指数、血常规指标和外周血中 M2巨噬细胞百分率，血清中 iNOS、IL-6、Arg1 和 IL-10水 平，BMDM 中 Arg1、IL-10、iNOS 和 IL-6 mRNA 表 达 水 平，M2 巨 噬 细 胞 中 Arg1 和 IL-10 mRNA 表达水平均符合正态分布，以 xs 表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间样本均数两两比较采用 LSD-t检验。以 P0.05为差异有统计学意义。2 结 果 2.1各组小鼠体质量和脏器指数各组小鼠体质量和脏器指数与 WT 对照组比 较，WT-ITP 模 型 组 小 鼠 体 质 量 降 低（P0.05），脾 脏 和 胸 腺 指 数 升 高（P0.05）；与TNFR2/对照组比较，TNFR2/ITP 模型组小鼠体质量降低（P0.05），脾脏和胸腺指数升高（P0.05）。与 WT-ITP 模型组比较，WT-HA-B组小鼠体质量增加（P0.05），脾脏和胸腺指数降 低（P0.05）。与 WT-HA-B 组比较，TNFR2/HA-B 组小鼠体质量降低（P0.05），脾脏和胸腺指数升高（P0.05）。见表 1。2.2各组小鼠血常规指标各组小鼠血常规指标与 WT 对照组比较，WT-ITP模型组小鼠血小板数量、红细胞数量和血红蛋白水平降低（P0.05），白细胞数量增加（P0.05），凝血时间延长（P0.05）；与 TNFR2/对照组比较，TNFR2/ITP模型组小鼠血小板数量、红细胞数量和血红蛋白水平降低（P0.05），白细胞数量增加（P0.05），凝血时间延长（P0.05）。与 WT-ITP 模型组比较，WT-HA-B 组小鼠血小板数量、红细胞数量和血红蛋白水平升高（P0.05），白细胞数量减少（P0.05），凝血时间 缩 短（P0.05）。与 WT-HA-B 组比较，TNFR2/HA-B 组小鼠血小板数量、红细胞数量和血红蛋白水 平 降 低（P0.05），白 细 胞 数 量 增 加（P0.05），凝血时间延长（P0.05）。见表 2。2.3各组小鼠外周血中各组小鼠外周血中 M2 巨噬细胞百分率巨噬细胞百分率与WT 对 照 组（66.85%4.23%）比 较，WT-ITP模 型 组 小 鼠 外 周 血 中 M2 巨 噬 细 胞 百 分 率（23.35%2.64%）降低（P0.05）；与TNFR2/对 照 组（61.24%3.34%）比 较，TNFR2/ITP 模型组小鼠外周血中 M2 巨噬细胞百分率（24.12%2.75%）降低（P0.05）。与WT-ITP 模 型 组 比 较，WT-HA-B 组（52.12%3.45%）小鼠外周血中 M2 巨噬细胞百分率升高（P0.05）。与 WT-HA-B 组比较，TNFR2/HA-B 组小 鼠 外 周 血 中 M2 巨 噬 细 胞 百 分 率 降 低（P0.05）。见图 1。表表 1各组小鼠体质量和脏器指数各组小鼠体质量和脏器指数TabTab.1 1Body weights and organ indexes of mice in various Body weights and organ indexes of mice in various groups groups(n=10，xs）GroupWT-controlWT-ITP modelWT-HA-BTNFR2/controlTNFR2/ITP modelTNFR2/HA-BFPBody weight（m/g）23.451.2820.031.12*22.491.31#23.521.3419.891.3820.231.4268.5730.001Spleen indexwB/（mg g1）4.360.548.910.82*6.150.63#4.550.589.230.968.840.7374.3750.001Thymus indexwB/（mg g1）3.030.294.120.43*3.280.34#3.130.314.080.473.960.4253.6530.002*P0.05 compared with WT-control group；P0.05 compared with TNFR2/control group；#P0.05 compared with WT-ITP model group；P0.05 compared with WT-HA-B group.862宋传龙，等.包虫抗原 B通过肿瘤坏死因子受体 2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症2.4各组小鼠血清中各组小鼠血清中 Arg1、IL-10、iNOS 和和 IL-6 水水平平与 WT 对照组比较，WT-ITP模型组小鼠血清中 Arg1 和 IL-10 水 平 降 低（P0.05），iNOS 和IL-6水平升高（P0.05）；与 TNFR2/对照组比较，TNFR2/ITP 模 型 组 小 鼠 血 清 中 Arg1 和IL-10 水平降低（P0.05），iNOS 和 IL-6 水平升高（P0.05）。与 WT-ITF 模 型 组 比 较，WT-HA-B 组小鼠血清中 Arg1 和 IL-10 水平升高（P0.05），iNOS 和 IL-6 水 平 降 低（P0.05）。与 WT-HA-B 组 比 较，TNFR2/HA-B 组小鼠血清中 Arg1 和 IL-10 水平降 低（P0.05），iNOS 和 IL-6 水 平 升 高（P0.05）。见图 2。2.5 各 组各 组 小 鼠小 鼠 BMDM 中中 Arg1、IL-10、iNOS 和和IL-6 mRNA 表 达 水 平表 达 水 平 与 WT 对 照 组 比 较，WT-ITP 模型组小鼠BMDM中Arg1和IL-10 mRNA表表 2各组小鼠血常规指标各组小鼠血常规指标TabTab.2 2Blood routine indexes of mice in various groupsBlood routine indexes of mice in various groups(n=10，xs）GroupWT-controlWT-ITP modelWT-HA-BTNFR2/controlTNFR2/ITP modelTNFR2/HA-BFPPlateletcount（109 L1）853.6497.43395.3674.24*764.5384.54#864.3692.57404.7381.57454.7595.7696.683 0.001White blood cell count（109 L1）8.751.3213.681.64*10.021.59#8.321.1213.581.4712.951.3672.485 0.001Red blood cell count（109 L1）12.571.577.861.25*11.131.46#12.861.717.731.148.361.4960.256 0.002HemoglobinB/（g L1）137.4821.4785.6815.68*114.6316.58#134.8519.6782.2516.8689.5714.6464.683 0.001Coagulation time（t/s）73.3412.46127.6716.65*89.4514.47#75.2511.78131.6715.67123.8614.6868.463 0.001*P0.05 compared with WT-control group；P0.05 compared with TNFR2/control group；#P0.05 compared with WT-ITP model group；P0.05 compared with WT-HA-B group.A：WT-control group；B：WT-ITP model group；C：WT-HA-B group；D：TNFR2/control group；E：TNFR2/ITP model group；F：TNFR2/HA-B group.图图 1流式细胞术检测各组小鼠外周血中流式细胞术检测各组小鼠外周血中 M2巨噬细胞百分率巨噬细胞百分率Fig.1Percentages of M2 macrophages in peripheral blood of mice in various groups 863第 49 卷 第 4 期 2023 年 7 月吉