右美托咪定对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制研究_冷志伟.pdf
《右美托咪定对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制研究_冷志伟.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《右美托咪定对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制研究_冷志伟.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、广西医科大学学报JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY2022 Dec;39(12)右美托咪定对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制研究*冷志伟,马文俊,张璐,黎杏梅,梁蓓薇,陈燕桦(广西医科大学第一附属医院,南宁530021)摘要目的:探讨右美托咪定对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的作用及其机制。方法:将48只SPF级雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、I/R组、I/R+右美托咪定组(D组)、I/R+右美托咪定+PPAR抑制剂GW9662组(DG组)。I/R组、D组和DG组通过线栓法(缺血0.5 h,再灌注3 h)制备心肌I/R模型,Sha
2、m组仅开胸不结扎。D组从模型制备前5 min至再灌注结束经股静脉泵注5 g/kgh-1右美托咪定,DG组在模型制备前2 h腹腔注射1 mg/kg GW9622,并泵注与D组等剂量右美托咪定。监测大鼠心率和平均动脉压。采用TTC染色检测心肌损伤面积,苏木精伊红(HE)染色观察心肌组织病理形态变化。用western blotting法检测心肌组织PPAR、磷酸化(p-)PPAR、NF-B p65、Caspase 3、Bcl-2、Bax蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测PPAR、NF-B基因表达。结果:与I/R组比较,D组缺血期和再灌注期的心率和平均动脉压稳定,心肌损伤面积缩小,心
3、肌组织病理损伤减轻,心肌组织中Bax、Caspase 3蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高,PPAR和p-PPAR基因及蛋白表达量升高,NF-B p65基因及蛋白表达量降低(均P0.05);与D组比较,DG组Bcl-2蛋白表达量降低,NF-B p65、Bax、Caspase 3蛋白表达量升高(均P0.05),心肌损伤面积增加,心肌组织病理损伤加重。结论:右美托咪定对大鼠心肌I/R损伤具有保护作用,其机制可能与激活PPAR/NF-B信号通路有关。关键词心肌缺血再灌注;右美托咪定;PPAR;NF-B中图分类号:R614.1文献标志码:A文章编号:1005-930X(2022)12-1964-
4、06DOI:10.16190/ki.45-1211/r.2022.12.015Effects and mechanism of dexmedetomidine on myocardial ischemia-reperfusion injury inratsLeng Zhiwei,Ma Wenjun,Zhang Lu,Li Xingmei,Liang Beiwei,ChenYanhua.(The First Affiliated Hospital ofGuangxi Medical University,Nanning 530021,China)AbstractObjective:To inve
5、stigate the effects and mechanism of dexmedetomidine on myocardial ischemia-re-perfusion(I/R)injury in rats.Methods:Forty-eight SPF male SD rats were randomly divided into four groups:Sham group,I/R group,I/R+dexmedetomidine group(D group),and I/R+dexmedetomidine+PPAR inhibitorGW9662 group(DG group)
6、.The Myocardial I/R model was established in I/R group,D group and DG group bythread embolism method(0.5 h ischemia,3 h reperfusion),while the Sham group only underwent thoracotomywithout ligation.D group was injected with 5 g/kg.H-1dexmedetomidine via femoral vein pump from 5 min be-fore model prep
7、aration to the end of reperfusion;DG group was intraperitoneally injected with 1 mg/kg GW96222 h before model preparation and pumped with the same dose of dexmedetomidine as D group.Heart rate andmean arterial pressure were monitored.TTC staining was used to detect the area of myocardial injury,and
8、hema-toxylin-eosin(HE)staining was used to observe the pathological changes in myocardial tissues.The protein ex-pressions of PPAR,phosphorylated(p-)PPAR,NF-B p65,Caspase 3,Bcl-2 and Bax in myocardial tissueswere detected by western blotting.The expressions of PPAR and NF-B genes were detected by Re
9、al-time fluo-rescence quantitative polymerase chain reaction(RT-qPCR).Results:Compared with I/R group,heart rate andmean arterial pressure in D group during ischemia and reperfusion were stable,the area of myocardial injury andthe pathological injury of myocardial tissues were re-duced,the protein e
10、xpressions of Bax and Caspase 3in myocardial tissues decreased,the protein expres-sion of Bcl-2 as well as the gene and protein expres-*基金项目:广西自然科学基金资助项目(No.2018GXNSFAA294007)通信作者,E-mail:收稿日期:2022-09-30 1964sions of PPAR and p-PPAR increased,and NF-B p65 gene and protein expression decreased(all P0.
11、05);compared with D group,the protein expression of Bcl-2 in DG group decreased while the protein expressions ofNF-B p65,Bax and Caspase 3 increased(all P0.05)with the area of myocardial injury increasing and the path-ological injury of myocardial tissues aggravated.Conclusion:Dexmedetomidine has a
12、protective effect on myo-cardial I/R injury in rats,and its mechanism may be related to the activation of PPAR/NF-B signaling pathway.Keywordsmyocardial ischemia-reperfusion;dexmedetomidine;PPAR;NF-B心肌梗死是许多国家心脏病发病率和病死率升高的最常见原因1,尽早实现再灌注治疗有利于预防心肌细胞死亡和收缩功能障碍2。经皮冠状动脉介入治疗和冠状动脉旁路移植术是目前临床上有效的冠心病治疗方法3。然而,研究
13、表明,再灌注本身可能加重损伤,诱发心肌细胞死亡,导致缺血后梗死范围扩大,即缺血再灌注(I/R)损伤4。目前,心肌I/R对心肌所造成的损伤还没有更好的治疗措施。因此,有必要开发新的策略来预防心肌I/R损伤,以改善冠心病患者的临床预后。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)作为细胞内重要的配体激活受体和细胞转录分化因子,在哺乳动物多种组织中均有分布,如脂肪组织、平滑肌组织、心肌组织等5。核因子 B(NF-B)作为一种重要的炎症因子,广泛参与机体对外界刺激(如病毒、高温、辐射、重金属)的反应6;且在各类炎症细胞和细胞免疫中发挥作用。研究发现,PPAR/NF-B通路在心肌I/R损伤过程中起到重要的作用
14、7。多项研究表明,右美托咪定作为围术期常用的镇静镇痛药,在I/R及其他因素所致的心脏损伤中具有一定的保护作用8-10,包括预防心律失常、稳定血压、减轻心肌I/R损伤等11。本研究旨在观察右美托咪定对大鼠心肌I/R损伤的作用及其对PPAR/NF-B信号通路的影响。1材料与方法1.1实验动物成年雄性SD大鼠,体重300350 g,购于广西医科大学实验动物中心,动物生产许可证号:SCXK桂2020-0004,动物使用许可证号:SYXK-桂2020-0004。对大鼠进行分笼饲养,水和食物充足,温度2025,12 h/12明暗交替。本研究经广西医科大学实验动物伦理委员会批准(审批号:202101014)
15、。1.2主要试剂与仪器右美托咪定(江苏恒瑞医药股份有限公司);PPAR抑制剂GW9662(碧云天科技有限公司);Bax单克隆抗体(万类生物);Caspase 3单克隆抗体(万类生物);Bcl-2 单克隆抗体(abcam);磷酸化(p-)PPAR 单克隆抗体(Abcam);PPAR 单克隆抗体(Gene Tex);NF-B p65单克隆抗体(Cell signalingTechnology);GAPDH(Proteintech);荧光二抗(Ther-mofisher Scientific);BCA试剂盒(南宁市博达实验耗材经营部);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)试剂盒(南宁市美仑实验器材经
16、营部);快速RNA提取试剂盒(南宁市基诺生物技术有限公司)。1.3实验方法1.3.1动物分组将48只SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、I/R组、I/R右美托咪定组(D组)、I/R右美托咪定GW9662组(DG组),每组12只。1.3.2I/R模型制备及给药采用改良线栓法12制备大鼠心肌I/R模型。建模前8 h禁食不禁水,腹腔注射1%戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉大鼠,行气管插管,连接小动物呼吸机。在胸骨左侧逐层钝性分离肌肉组织,剪断第34肋,暴露心脏;撕开心包膜,在左心耳与主动脉根部之间、下缘26 mm处,用眼科缝合针将6-0丝线穿过心肌层,收紧结扎线。以左心室变白、心电图ST
17、段抬高为结扎成功标志。缺血0.5 h后松开结扎线,再灌注3 h。Sham组仅开胸不结扎。各组大鼠均行股静脉穿刺,放置穿刺针,连接泵注管。D组从建模前5 min至再灌注结束,通过微量泵经股静脉泵注5 g/kgh-1右美托咪定;DG组建模前2 h腹腔注射1 mg/kg的GW9662,并经股静脉泵注与D组等剂量的右美托咪定。Sham组和I/R组泵注等量生理盐水。1.3.3大鼠血流动力学监测分别在缺血期、再灌注期,每5 min测量1次心率和血压。取5次测量的平均值。1.3.4TTC法检测心肌损伤面积再灌注结束后行颈静脉穿刺,放置静脉穿刺留置导管。将20 mL冷志伟,等.右美托咪定对大鼠心肌缺血再灌注损
18、伤的作用及其机制研究 1965广西医科大学学报2022 Dec;39(12)10%TTC溶液注入颈静脉。10 min后取出心脏,用生理盐水洗净,沿心尖至心底以横切面切成均匀厚度的环形切片,置于甲醛溶液中固定24 h。拍照,用Image J软件分析计算心肌损伤面积。1.3.5苏木精伊红(HE)染色取部分左心室组织,固定于4%多聚甲醛,常规石蜡包埋,4 m厚连续切片,行HE染色,显微镜下观察心肌组织病理形态学改变。1.3.6Western blotting检测相关蛋白指标取部分左心室组织,提取组织总蛋白,BCA法测定蛋白浓度,SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白,将蛋白转移至PVDF膜,BSA封闭1
19、h;加入一抗稀释液(PPAR、p-PPAR、NF-B p65均为1 1 000,Caspase 3、Bcl-2、Bax均为1 1 500)4 孵育过夜,TBST洗膜,加入荧光二抗(1 2 000)室温孵育1 h,TBST洗膜,ECL显影。用Odessey红外荧光扫膜仪扫膜,Image J软件分析蛋白条带灰度值。以目的蛋白条带灰度值与内参GAPDH条带灰度值的比值表示目的蛋白表达量。1.3.7RT-qPCR法检测心肌组织PPAR、NF-B基因表达取左心室,提取心肌组织总RNA,逆转录为cDNA,行PCR扩增。PCR反应条件:95 预变性30 s;95 变性5 s,60 退火、延伸30 s,共40
20、个循环。引物由上海生工生物工程有限公司设计并合成。引物序列如下:PPAR上游:5-TCTGTGG-ACCTCTCTGTGATGGATG-3,下游:5-GTCAG-CTCTTGTGAACGGGATGTC-3;NF-B 上游:5-TCAGAGGCCAGAAGAGGGTGTTG-3,下游:5-TCGTCGTCTGCCATGTTGAAGATG-3;GAPDH上游:5-GCATCTTCTTGTGCAGTGCC-3,下游:5-GAGAAGGCAGCCCTGGTAAC-3。采用2-CT法计算目的基因相对表达量。1.4统计学方法采用SPSS 23.0 软件对数据进行统计分析,正态分布的计量资料以均数标准差(x
21、 s)表示,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1各组大鼠血流动力学指标比较各组大鼠建模前心率和平均动脉压比较,差异均无统计学意义(均P0.05);建模后,与Sham组比较,I/R组缺血期心率和平均动脉压升高,再灌注期心率和平均动脉压降低(均P0.05);与I/R组比较,D组缺血期的心率和平均动脉血压均降低,再灌注期的心率和平均动脉压均升高(均P0.05);与D组比较,DG组缺血期和再灌注期的心率下降,而缺血期的平均动脉压升高,再灌注期的平均动脉压降低(均P0.05),见表1。组别Sham组I/R组D组DG组n12121212心率/
22、(次/min)缺血期375.504.08430.503.40404.255.23*380.753.84*再灌注期376.086.99313.1710.87355.508.00*323.838.15*平均动脉压/kPa缺血期11.890.5114.010.5810.590.61*11.180.70*再灌注期11.620.878.641.149.170.31*8.490.37表1各组大鼠缺血期和再灌注期心率、平均动脉压的比较x s与Sham组比较,P0.05;与I/R组比较,*P0.05;与D组比较,P0.05。2.2各组大鼠心肌损伤面积比较经TTC染色后,正常心肌组织染成鲜红色,损伤区域心肌组织
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 右美托咪定 大鼠 心肌 缺血 灌注 损伤 作用 及其 机制 研究 冷志伟
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。