SN∕T 5364.5-2021 出口食品中致病菌检测方法 微滴式数字PCR法 第5部分:金黄色葡萄球菌.pdf
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1、I C S0 7.1 0 0.3 0C C SX0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 3 6 4.52 0 2 1 出口食品中致病菌检测方法微滴式数字P C R法第5部分:金黄色葡萄球菌D r o p l e t d i g i t a l P C R m e t h o d f o r d e t e c t i o n o f p a t h o g e n s i n e x p o r t f o o d-P a r t 5:S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s2 0 2 1-1 1-2 2发布2 0 2 2-0 6-0 1实
2、施中华人民共和国海关总署发 布前 言本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。S N/T 5 3 6 42 0 2 1 出口食品中致病菌检测方法微滴式数字P C R法 共分为8个部分:第1部分:副溶血性弧菌;第2部分:霍乱弧菌;第3部分:溶藻弧菌;第4部分:创伤弧菌;第5部分:金黄色葡萄球菌;第6部分:单核细胞增生李斯特氏菌;第7部分:产志贺毒素大肠埃希氏菌;第8部分:克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)。本文件为S N/T 5 3 6 42 0 2 1的第5部分。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任
3、。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中国海关科学技术研究中心、中华人民共和国石家庄海关、中国检验检疫科学研究院。本文件主要起草人:李丹、张琳、徐蕾蕊、马丹、魏海燕、汪琦、魏咏新、刘莉、曾静、高飞。S N/T5 3 6 4.52 0 2 1出口食品中致病菌检测方法微滴式数字P C R法第5部分:金黄色葡萄球菌1 范围本文件规定了食品中金黄色葡萄球菌的微滴式数字P C R检测方法。本文件适用于食品中金黄色葡萄球菌的快速定性检测。本文件的检出限为1 C F U/2 5 g 5 C F U/2 5 g(或1 C F U/2 5 mL5 C F U/2 5 mL)。2 规范性引用
4、文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B 4 7 8 9.1 0 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 2 7 4 0 32 0 0 8 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 缩略语下列缩略语适用于本文件。D NA(d e o x y r i b o n u l e i c a c i d):脱氧核糖核酸。d
5、d P C R(d r o p l e t d i g i t a l p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n):微滴式数字P C R。n u c(t h e r m o s t a b l e n u c l e a s e g e n e):耐热核酸酶编码基因。P C R(p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n):聚合酶链式反应。5 方法原理针对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶编码基因(n u c)保守序列设计引物、探针,将一定浓度的引物、探针与模板D NA及数字P C R反应预混液混合,配成P
6、 C R反应。将该数字P C R体系分布到1 0 0 0 02 0 0 0 0个微滴中,使大部分微滴中模板D NA分子的数量为1或0,然后进行P C R扩增。n u c基因探针5 端标记F AM荧光基团,利用数字P C R系统的检测通道,可对每个微滴的荧光信号进行采集分析。含有模板D NA的微滴出现荧光信号的增强,形成阳性微滴簇。最终根据阳性微滴的有无判定样品中是否含有金黄色葡萄球菌。1S N/T5 3 6 4.52 0 2 16 主要设备及耗材6.1 天平:感量0.1 g。6.2 均质器。6.3 恒温培养箱:3 6 1。6.4 高速台式冷冻离心机(离心力1 2 0 0 0 g)。6.5 涡旋
7、振荡仪。6.6 核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。6.7 生物安全柜。6.8 d d P C R扩增仪及相关配套设备。6.9 不同量程移液器:1 0 0 L1 0 0 0 L、2 0 L2 0 0 L、1 0 L1 0 0 L、0.5 L1 0 L。6.1 0 离心管:2 mL、1.5 mL和0.2 mL。7 材料与试剂7.1 仅使用分析纯试剂和符合G B/T 6 6 8 2规定的一级水。7.2 细菌基因组提取试剂盒。7.3 葡萄球菌裂解酶:武汉光谷百桥生物1)。7.4 去游离核酸酶:伯乐1)。7.5 d d P C R反应配套试剂。7.6 阳性对照:金黄色葡萄球菌标准菌株D NA,或含目的片段
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