活血消痛酒质量标准及制备工艺研究.pdf
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1、中医康复2024年1月 第1卷 第1期Traditional Chinese Medicine Rehabilitation,Jan.2024,Vol.1,No.1活血消痛酒质量标准及制备工艺研究活血消痛酒质量标准及制备工艺研究*吴广颖1,邹异2,张睿西3,李冬梅1,陈小刚2,陈昭4(1.广州中医药大学第五临床医学院,广东 广州 510095;2.广西中医药大学附属国际壮医院,广西 南宁 530000;3.深圳市中医院,广东 深圳 518033;4.广东省中医药工程技术研究院(广东省中医药研究开发重点实验室),广东 广州 510095)摘摘要要 目的目的:建立活血消痛酒质量标准并对其制备工艺进
2、行优化。方法方法:采用薄层色谱法(TLC)对活血消痛酒的君药两面针、三七和臣药血竭鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定三七苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量。色谱柱为WatersX Bridge Shield RPC18(4.6250 mm,5 m),流动相:水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(015 min,20%23%B;1525 min,23%B;2535 min,23%40%B;3536 min,40%90%B);流速为1 mL/min;柱温30;检测波长为203 nm;进样量为10 L;采用中心组合设计(CCD)响应面法对活血消痛酒工艺优化。结果结果:两面针、三七、血竭薄层
3、色谱特征斑点清晰,分离度良好,阴性对照无干扰;三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1线性范围内良好(r20.999),阴性对照无干扰、精密度、稳定性、重复性、加样回收率结果良好,10批活血消痛酒的三种皂苷含量范围为0.42250.5982 mg/mL;采用CCD法结合实际情况得出最优工艺:含醇量为42%、物料比为16.7 mg/mL、浸泡时间为7d。结论结论:该研究建立的方法操作简便、准确可靠,可用于活血消痛酒的质量标准研究;本研究通过中心组合设计法,科学、全面准确地找到了活血消痛酒的最优工艺。关键词关键词 活血消痛酒;薄层色谱法;高效液相色谱法;中心组合设计;质量标准;工艺优化 中图分
4、类号中图分类号 R R9898 文献标识码文献标识码 B B 文章编号文章编号 20972097-31283128(20242024)0101-00360036-0707DOIDOI:1010.1978719787/j/j.issnissn.20972097-31283128.20242024.0101.008008The Study on Quality Standard and Preparation Technology of Huoxue Xiaotong LiquorThe Study on Quality Standard and Preparation Technology of
5、 Huoxue Xiaotong LiquorWU Guang-ying1,ZHOU Yi2,ZHANG Rui-xi3,LI Dong-mei1,4,CHEN Xiao-gang2,CHEN Zhao4(1.The Fifth College of Clinic Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou,Guangdong 510095;2.Guangxi InternationalZhuang Medicine Hospital Affiliated to Guangxi University of Chines
6、e Medicine,Nanning,Guangxi 530000;3.Shenzhen Traditional ChineseMedicine Hospital,Shenzhen,Guangdong 5180333;4.Guangdong Province Engineering Technology Research Institute of T.C.M.GuangdongProvincial Key Laboratory of Research and Development in Traditional Chinese Medicine,Guangzhou,Guangdong 5100
7、95)AbstractObjectiveAbstractObjective:To establish quality standard and optimize the preparation technology of Huoxue Xiaotong liquor.MethodsMethods:Thin layerchromatography(TLC)was used to identify sovereign drug including Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC and Panax notoginseng and identify ministerdrug
8、:Resina Draconis;High Performance Liquid Chromatography(HPLC)was used to determine the content of notoginsenoside R1,ginsenosideRg1and ginsenoside Rb1.Chromatographic column is Waters X Bridge Shield RPC18(4.6250 mm,5 m)colum.Mobile phase consisting of water(A)-acetonitrile(B)and gradient elution(01
9、5 min,20%23%B;1525 min,23%B;2535 min,23%40%B;3536 min,40%90%B).The flowrate was 1 mL/min,column temperature was 30,detection wavelength was 203 nm,the injection volume was 10 L;Central composite design(CCD)-response surface method was used to optimize the preparation technology of Huoxue Xiaotong li
10、quor.ResultsResults:The characteristic spots ofZanthoxylum nitidum(Roxb.)DC、Resina Draconis and Panax notoginseng were clear and well separated,and there was no interference from thenegative control.The notoginsenoside R1,ginsenoside Rg1and ginsenoside Rb1had a good linear relationship within their
11、respective concentrationranges(r20.999).There was no interference from the negative control,and the results of precision,stability,repeatability and recovery rate weregood.The total content of three saponins in 10 batches of samples ranged from 0.42250.5982 mg/mL;The CCD method was used along with a
12、ctualsituation to obtain the optimal process as follows:alcohol content was 42%,material ratio was 16.7 mg/mL,soaking time was 7 days.ConclusionConclusion:The method established in this study is simple,accurate and reliable,and can be used for the study of quality standard of Huoxue Xiaotong liquor.
13、Atthe same time,the optimal technology of Huoxue Xiaotong liquor was found scientifically,comprehensively and accurately by the method of centralcomposite design.KeywordKeywordHuoxue Xiaotong liquor;Thin layer chromatography;High Performance Liquid Chromatography;Central composite design.;Qualitysta
14、ndard;technology optimizatio活血消痛酒药方来源于广东、广西地区壮医临床验方,由千斤拔、两面针、三七、骨碎补、血竭等十几味药材组成,临床上用于散瘀消肿、祛风除湿,治疗跌打损伤,风湿痹痛等症,疗效确切。三七为该方 君 药,是 五 加 科 植 物 三 七 Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎,富含皂苷类、多糖类等1等多种成分。三七具有散瘀止血、消肿定痛的功效,主要用于治疗外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛等,其中三七皂苷类成分起活血消痛作用2,与另一君药两面针,及臣药血竭共同发挥行气活血、*基金项目基金项目:广东省中医药局科研项目(20
15、232005)作者简介作者简介:吴广颖(1999-),男,在读硕士,研究方向:中药质量评价与控制。通讯作者通讯作者:陈昭(1985-),男,博士,副研究员,研究方向:中药质量评价与控制。36第1期吴广颖 等活血消痛酒质量标准及制备工艺研究消肿止痛、强筋壮骨的功效3-4。因此,有必要围绕三七进行含量测定。目前,活血消痛酒以临床科室自配自用为主,缺乏规范化的制剂工艺流程处理,尚未能严格控制其配制、剂量和使用,导致疗效存在较为明显的差异,因此需要建立准确、严格、适宜的工艺和质量控制标准,确保临床用药的安全性、有效性和稳定性5。酒剂由于制备、保存、使用较为便利,不良反应少,患者依从性较强等,其开发价值
16、及应用前景良好。现活血消痛酒由广东省第二中医院和广西中医药大学附属国际壮医院专家联合优化开发为现代化医疗机构中药制剂,根据医疗机构中药制剂注册研究资料相关规范和技术要求,须对方中主要药味建立薄层色谱鉴别方法,以表征这些药味制成制剂失去原有形态后仍存在于成方制剂之中;此外,随着院内制剂质量标准要求的日益提高,满足建立定量质量评价要求,并为工艺考察、药效评价等方面研究提供量化指标,建立主要药味指标性成分的含量测定方法也日益成为医院制剂质量标准研究的趋势。因此,有必要围绕两面针、三七、血竭三味药开展薄层鉴别研究、并采用HPLC法对该方主要药味三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量
17、展开研究,以期为质量标准提供科学依据。1 1仪器与材料仪器与材料1.1 仪器 ATS4 全自动点样仪(瑞士 CAMAG 公司)、薄层色谱数码成像系统(瑞士CAMAG公司)、电子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)、电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)、Agilent 1260 高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)1.2 材料与试剂 三七皂苷 R1对照品(质量分数:100%、批号:110745-200617,购自中国药品生物制品检定所);人参皂苷Rg1对照品(质量分数:92.4%、批号:110703-201832,购自中国药品生物制品检定所);人参皂苷Rb1(质量分数:95
18、.9%、批号:110704-201223,购自中国药品生物制品检定所);两面针对照药材(批号:C22112108,购自中国药品生物制品检定所);三七对照药材(批号:210701,购自中国药品 生 物 制 品 检 定 所);血 竭 对 照 药 材(批 号:HX20M01,购自中国药品生物制品检定所);活血消痛 酒(批 号 S1S10:230201、230202、230203、230204、230205、230206、230207、230208、230209、230210,由广东省第二中医院制备)、分别不含两面针、三七、血竭的活血消痛酒(制备方式与活血消痛酒相同);硅胶G板(中药分析研究室自制);
19、乙腈为色谱纯;水为超纯水;其余化学试剂为分析纯。2 2方法与结果方法与结果2.1 活血消痛酒TLC鉴别2.1.1 方中两面针的 TLC 鉴别 量取活血消痛酒25mL,滤过,滤液浓缩至10mL,用乙酸乙酯萃取两次,每次25mL,合并乙酸乙酯层,蒸干,残渣加2mL乙醇复溶,得到供试品溶液;取不含两面针的活血消痛酒,同法处理成阴性溶液;取两面针对照药材1g,加入乙醇 40mL,超声提取 1h(700W),滤过,滤液蒸干,残渣加入1mL乙醇复溶,即为对照药材溶液。分别吸取供试品溶液、阴性溶液各10L,对照药材溶液 2L,点于同一块硅胶 G 板上,以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(30:1:0.2)为展开剂,
20、展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105加热至显色清晰。在365nm紫外灯光下检视。两面针的供试品色谱中,在与两面针对照药材色谱相应位置上显相同黄色荧光斑点,且两面针阴性无干扰,结果见图1。耐用性考察结果显示,当固定相、温湿度等条件在一定范围内变动时,对照药材色谱上仍可观察到清晰斑点对应,表明上述条件变动对鉴别无明显影响。综合上述结果,可将两面针的TLC鉴别方法纳入标准正文。图1 两面针TLC1:阴性;2-4:供试品;5:对照药材2.1.2 方 中 三 七 的 TLC 鉴 别 量 取 活 血 消 痛 酒30mL,滤过,滤液加热浓缩至 15mL,加入 10mL 水饱和正丁醇溶液,混匀后密塞
21、,振摇10min,静置3h,加入30mL正丁醇饱和水溶液,摇匀后使其分层,取正丁醇层,蒸干,残渣加入1mL甲醇溶解,即得到供试品溶液;取不含三七的活血消痛酒,按照上述方法处理成阴性溶液;称取0.5g三七对照药材,加入 37中医康复2024年第1卷5mL 水饱和正丁醇溶液,密塞并振摇 10min,静置2h,离心,取上清,加入三倍量水饱和正丁醇溶液,摇匀,静置分层,取正丁醇层,蒸干,残渣加入1mL甲醇使溶解,即得到对照药材溶液。分别吸取上述三种溶液各8L,点于同一块硅胶G板上,以10以下的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,
22、105下加热至斑点清晰,分别在白光和紫外灯(365nm)下检视。三七供试品色谱中,在与三七对照药材色谱相应位置上显相同紫色斑点,且三七阴性无干扰,结果见图2。耐用性考察结果显示,当固定相、温湿度等条件在一定范围内变动时,对照药材色谱上仍可观察到清晰斑点对应,表明上述条件变动对鉴别无明显影响。综合上述结果,可将三七的TLC鉴别方法纳入标准正文。图2 三七-自制硅胶G板(左:日光;右:365 nm)1:阴性;2-4:供试品;5:对照药材2.1.3 方 中 血 竭 的 TLC 鉴 别 量 取 活 血 消 痛 酒25mL,滤过,滤液加入乙醚萃取两次,每次20mL,合并乙醚层,蒸干,残渣加2mL甲醇复溶
23、,得到供试品溶液;取不含血竭的活血消痛酒25mL,同法制成阴性溶液;称取0.1g血竭对照药材,加入10mL乙醚,密塞后振摇10min,滤过,取滤液为对照药材溶液。分别吸取上述三种溶液各10L,点于同一块硅胶G板上,以三氯甲烷-甲醇(19:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置于日光下检视。血竭供试品色谱中,在与血竭对照药材色谱相应位置上显相同橙红色斑点,且血竭阴性无干扰,结果见图3。耐用性考察结果显示,当固定相、温湿度等条件在一定范围内变动时,对照药材色谱上仍可观察到清晰斑点对应,表明上述条件变动对鉴别无明显影响。综合上述结果,可将两面针的TLC鉴别方法纳入标准正文。图3 血竭TLC1:阴性;2-
24、4:供试品;5:对照药材综上所述,我们成功建立了活血消痛酒方中的两面针、三七、血竭三味药的TLC鉴别方法,方法耐用性良好,能够代表包括君药在内的主要药味的质量信息。2.2 活血消痛酒的HPLC含量测定2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Waters X Bridge ShieldRPC18(4.6250 mm,5 m);流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(015 min,20%23%B;1525 min,23%B;2535 min,23%40%B;3536 min,40%90%B);流速为 1mL/min;柱温 30;检测波长为203nm;进样量为10 L。2.2.2 溶液的制备 精密称定适量
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