滑鼠蛇肠道组织结构及杯状细胞和嗜银细胞分布特点.pdf
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1、中国兽医杂志():滑鼠蛇肠道组织结构及杯状细胞和嗜银细胞分布特点吴舒敏 陈俊良 楚 萌 司 雨 余 航 刘洋铨 赵海全 张 晖 叶亚琼(佛山科学技术学院生命科学与工程学院 广东 佛山)摘要:为揭示滑鼠蛇()肠道黏膜组织结构以及杯状细胞和嗜银细胞的分布特点和规律本试验制作肠道石蜡切片通过苏木精伊红()染色、过碘酸阿利斯新蓝()染色和 嗜银染色方法阐明滑鼠蛇肠壁显微结构和特殊细胞型的分布特点 染色结果显示滑鼠蛇肠壁结构分为 层从内到外依次是黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层黏膜上皮主要由柱状细胞和杯状细胞组成肠皱襞发达肠绒毛数量和长度在前肠、中肠、后肠呈递减趋势且各组间差异显著()前肠肌层最厚显著高于
2、中肠和后肠()染色结果显示杯状细胞镶嵌在柱状细胞之间其数量在前肠、中肠和后肠中逐渐增加且各组间差异显著()银染结果显示嗜银细胞形状多样分布在黏膜上皮基部和上皮细胞之间在各段肠壁内均有分布其数量在前肠、中肠和后肠中呈递增趋势且各组间差异显著()本试验结果可为滑鼠蛇消化生理学研究和野生资源保护提供参考关键词:滑鼠蛇 肠道 组织结构 杯状细胞 嗜银细胞中图分类号:文献标志码:文章编号:()():(.).(.)().().(.)(.).(.).(.).:收稿日期:基金项目:国家自然科学基金()作者简介:吴舒敏()女硕士生研究方向为动物疫病防控:通信作者:叶亚琼:滑鼠蛇()属于无毒蛇主要分布于我国南方地
3、区 肠道是机体重要的消化器官肠黏膜上皮细胞具有重要的免疫作用能利用自身免疫功能监视和消灭病原微生物 黏膜上皮的杯状细胞能够分泌黏蛋白和生物活性因子 黏膜上研 究 论 文 卷皮和肠内容物之间覆盖着由黏液和抗菌肽、无机盐以及水等一起构成的黏液层可以保护肠道不被各种生物性或物理化学性致病因素所侵害并且杯状细胞所分泌的黏液有润滑作用可帮助排泄食物残渣 近年来有关动物肠道杯状细胞或者肠黏膜组织结构特点的研究有很多但关于滑鼠蛇肠道黏膜和杯状细胞分布规律的研究还很缺乏嗜银细胞是消化道内分泌细胞可分泌胺和多肽类激素物质广泛分布于低等无脊椎动物到高等脊椎动物的肠道黏膜内主要通过刺激肠道黏液的分泌、平滑肌的收缩以
4、及血管的扩张来调节食物的消化吸收过程 嗜银细胞根据形态可分为内分泌和外分泌 种功能具有内分泌功能的细胞多呈圆形或椭圆形细胞胞突指向固有膜具有外分泌功能的细胞呈梭形或锥体形其胞突指向消化道腔内 目前有关滑鼠蛇肠道嗜银细胞的分布规律和形态的研究较为少见综上所述本试验对滑鼠蛇肠道组织结构及杯状细胞和嗜银细胞的分布范围、密度、形态特点和分泌方式等进行研究以期深入了解滑鼠蛇的消化吸收特点为滑鼠蛇野生资源保护和消化生理学研究提供参考 材料与方法 主要仪器设备和工具 型光学显微镜购自南京江南永新光学有限公司 型漂片仪购自常州市郝思琳医用仪器有限公司 型包埋机购自浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 型电热恒温水
5、浴锅购自上海博迅实业有限公司医疗设备厂.型电热恒温干燥箱购自上海跃进医疗器械有限公司/型轮转切片仪购自湖北安立信医疗实业有限公司 主要试剂 氏固定液、氏固定液、福尔马林、冰醋酸、银染液、还原液、苏木精、伊红染液、过碘酸液、阿利斯新蓝染液、染液和甲苯胺蓝染液等均购自佛山启创生物科技有限公司 常规试剂:无水乙醇、二甲苯和中性树胶等均购自湖北泰康医疗设备有限公司 试验动物及取材健康成年滑鼠蛇 条第 条体重为 体长为 第 条体重为 体长为 均购自佛山花园肉菜市场将滑鼠蛇断头致死然后放于冰块表面立刻剥皮剖腹取出肠道的前肠、中肠、后肠各取 段每段约 将 段立刻分别放入 多聚甲醛磷酸盐缓冲液、氏固定液、氏固
6、定液中保存备用 石蜡组织切片的制作和 染色按常规石蜡制片方法进行脱水透明、石蜡包埋、切片切片厚度 为 苏 木 精伊 红()染色后在显微镜下进行观察并拍照记录 组织学观察 在 光学显微镜下观察滑鼠蛇肠道黏膜的基本组织结构从每个肠段切片上选取 个典型视野测量滑鼠蛇前肠、中肠、后肠的肠绒毛长度和肌层厚度并记录各肠段肠绒毛数量 杯状细胞组织化学观察 采用过碘酸阿利斯新蓝()染色法 染色步骤:常规石蜡切片蒸馏水洗 阿利斯新蓝液染 (滴染)蒸馏水洗 次过碘酸液染 自来水洗 染液染 自来水冲洗 蒸馏水洗 次酸性分化液分化 自来水洗反蓝常规脱水透明封片电子显微镜下观察并拍照记录用 图像分析系统进行杯状细胞计数
7、 分别取滑鼠蛇前肠、中肠、后肠肠段各 张 染色的石蜡切片每张切片选取 根最长且整齐排列的肠绒毛统计每 个柱状细胞中杯状细胞的数量 染色后细胞中性黏多糖染为红色酸性黏多糖染为蓝色复合物染为紫红色或蓝紫色细胞核染为灰蓝色 根据 染色显色情况可以把杯状细胞分为 种类型:型杯状细胞为纯红色 阳性 阴性含中性黏蛋白型杯状细胞为纯蓝色 阳性 阴性含酸性黏蛋白型杯状细胞为紫红色 阳性为主 阳性较弱主要含中性黏蛋白和少量的酸性黏蛋白型杯状细胞为蓝紫色 阳性为主 阴性较弱主要含酸性黏蛋白和少量的中性黏蛋白 嗜银细胞组织化学观察 采用 嗜银染色法 试剂配制:银染液:硝酸银 乙酸盐缓冲溶液 乙酸盐缓冲溶液:甲液 (
8、无水乙酸钠 纯化水 )乙液 (乙酸 纯化水 )还原液:无水亚硫酸钠 对苯二酚 纯化水 染色步骤:首先将银染液置于 下预热 还原液置于 下预热 常规石蜡切片二甲苯脱蜡复水银染液染色 蒸馏水缓慢冲洗数次切片于 还原液中 蒸馏水缓慢冲洗数次常规脱水透明(步骤:酒精 酒精 酒精 期吴舒敏等:滑鼠蛇肠道组织结构及杯状细胞和嗜银细胞分布特点酒精 酒精 二甲苯 二甲苯 )中性树胶封片电子显微下观察并拍照记录用 图像分析系统进行嗜银细胞计数 分别取滑鼠蛇前肠、中肠、后肠肠段各 张 嗜银染色法染色的石蜡切片每张切片随机选取 个视野统计嗜银细胞的数目 统计学分析所得数据用 软件进行处理各组间用单因素方差分析比较均
9、值的多重比较用 法进行数据以“平均值 标准差”表示 表示差异不显著 结果 滑鼠蛇肠道黏膜基本组织结构特点肠道组织 染色结果如图 所示肠道黏膜上皮细胞排列紧密主要由高柱状的柱状细胞和空泡状的杯状细胞构成其中柱状细胞数量最多柱状细胞和杯状细胞的胞质分别染成红色和淡红色柱状细胞核染成紫蓝色形状基本为圆形或者椭圆形而杯状细胞核难以着色(图 )肠腔内可见大量由黏膜上皮和固有层共同构成的肠绒毛呈手指状向肠腔突起肠绒毛根部未见有下陷的肠隐窝从绒毛分布密度分析前肠的肠绒毛排列非常紧密中肠的肠绒毛较稀疏后肠的肠绒毛间则相距较远整个肠黏膜的形态结构比较完整具有消化管壁的一般结构特点肠绒毛清晰不重叠上皮细胞轮廓清晰
10、可见排列整齐染色鲜明(图 )滑鼠蛇肠道组织结构具备消化管壁的一般结构即从外到内依次由浆膜层、肌层、黏膜下层和黏膜层 层组成 其中浆膜层主要由疏松结缔组织和单层扁平上皮构成肌层由内环肌和外纵肌 层构成(图 )滑鼠蛇肠绒毛长度和数量的变化如表 所示前肠、中肠、后肠的肠绒毛数量呈递减趋势其中前肠的肠绒毛数量最多显著多余中肠和后肠()中肠的肠绒毛数量也显著多于后肠()前肠、中肠和后肠的肠绒毛长度逐渐变短前肠的肠绒毛长度显著高于中肠和后肠()图 滑鼠蛇前肠、中肠和后肠的组织结构(染色)():前肠、中肠和后肠组织结构高倍镜图()(黑色箭头:杯状细胞 蓝色箭头:柱状细胞):前肠、中肠和后肠肠绒毛和肌层低倍镜
11、图():滑鼠蛇肠道组织结构低倍镜图()(:黏膜层:黏膜下层:肌层:浆膜层:内环肌:外纵肌):()(:):():()(:)研 究 论 文 卷表 滑鼠蛇的肠绒毛数量、长度和肌层厚度测定()()前肠中肠后肠肠绒毛数量(条)肠绒毛长度()肌层厚度()注:同行数据肩注小写字母不同者表示差异显著():()滑鼠蛇肠道肌层厚度的变化 如图 所示滑鼠蛇肠道肌层由位于外层的外纵肌和内层的内环肌组成内环肌的厚度大于外纵肌 如表 所示前肠肌层最厚显著高于中肠和后肠()滑鼠蛇肠黏膜杯状细胞分布特征如图 和表 所示杯状细胞的数量在前肠、中肠、后肠中逐渐增加主要分布于黏膜上皮的柱状细胞之间其中后肠杯状细胞数量最多显著多于前
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