高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用法对兰索拉唑肠溶制剂的杂质谱研究.pdf
《高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用法对兰索拉唑肠溶制剂的杂质谱研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用法对兰索拉唑肠溶制剂的杂质谱研究.pdf(9页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、Journal of China Pharmaceutical University 2023,54(5):577-585学 报高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用法对兰索拉唑肠溶制剂的杂质谱研究李岩1#,贾欢欢2#,黄青1,袁耀佐1,陈民辉1,张锦琳1*(1江苏省食品药品监督检验研究院国家药品监督管理局化学药品杂质谱研究重点实验室,南京 210019;2中国药科大学药学院,南京 211198)摘 要 采用高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用检测方法,建立二维在线除盐检测方法对兰索拉唑肠溶制剂法定检验条件下检出的杂质进行结构推定,建立兼容质谱检测器的色谱方法对法检方法无法分离的杂质进行测定和结构推
2、定,检出杂质结构的鉴定方法根据有无杂质对照品而异来推定其结构,以此考察不同企业间产品杂质谱的差异性。二维在线除盐方法的一维色谱条件同 中华人民共和国药典(2020版)有关物质项下,二维质谱条件采用Waters C18 T3(2.1 mm 100 mm,1.7 m)色谱柱,0.1%甲酸水-乙腈流动相,梯度洗脱。兼容质谱的色谱条件采用Agilent Extend C18(4.6 mm 150 mm,5 m)色谱柱,流动相A相:25 mmol/L乙酸铵,B相:25 mmol/L乙酸铵-乙腈(1 4)用冰乙酸调节pH至6.5,梯度洗脱。二维在线除盐方法检出杂质9个,其中5个为已知杂质A E,4个为未知
3、杂质。兼容质谱检测器方法检出杂质14个,其中9个为未知杂质(4个与二维在线除盐方法结果一致,5个为该条件下新检出)。对未知杂质的结构进行了推测和来源归属。本文建立的两个高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用检测方法对兰索拉唑制剂的质量控制和工艺评价具有指导意义。关键词 兰索拉唑;肠溶制剂;杂质谱;在线除盐;液质联用中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1000-5048(2023)05-0577-09 doi:10.11665/j.issn.1000-5048.2023042601引用本文 李岩,贾欢欢,黄青,等.高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用法对兰索拉唑肠溶制剂的杂质谱研究 J.中
4、国药科大学学报,2023,54(5):577585.Cite this article as:LI Yan,JIA Huanhuan,HUANG Qing,et al.Impurity spectra of lansoprazole enteric-coated preparations by high performance liquid chromatography-high resolution orbital trap mass spectrometry J.J China Pharm Univ,2023,54(5):577585.Impurity spectra of lansopr
5、azole enteric-coated preparations by high performance liquid chromatography-high resolution orbital trap mass spectrometryLI Yan1#,JIA Huanhuan2#,HUANG Qing1,YUAN Yaozuo1,CHEN Minhui1,ZHANG Jinlin1*1NMPA Key Laboratory for Impurity Profile of Chemical Drugs,Jiangsu Institute for Food and Drug Contro
6、l,Nanjing 210019;2School of Pharmacy,China Pharmaceutical University,Nanjing 211198,ChinaAbstract Using high performance liquid chromatography and high resolution orbital trap mass spectrometry,a two-dimensional online desalting detection method was established to determine the structure of the impu
7、rities detected under the official testing conditions of lansoprazole enteric solution preparation,and a chromatographic method compatible with mass spectrometry was established to determine and presume the structure of the impurities that could not be separated by the the official testing method.Th
8、e identification of impurity was to presume its structure according to the presence of impurity reference product,so as to investigate the difference of impurity spectrum of products from different manufacturers.The one-dimensional chromatographic conditions for the 2D online desalting method were t
9、he same as those in China Pharmacopoeia(2020)under relevant substances.Two-dimensional chromatography was performed on a Waters C18 T3 column(2.1 mm 100 mm,1.7 m)with 0.1%formic acid in water-acetonitrile mobile phase and gradient elution.The chromatographic conditions for the com收稿日期 2023-04-26 *通信
10、作者 Tel:025-86251131 E-mail:#李岩和贾欢欢为共同第一作者577学 报 Journal of China Pharmaceutical University 2023,54(5):577-585第54 卷patible mass spectra were based on an Agilent Extend C18(4.6 mm 150 mm,5 m)column with mobile phase A:25 mmol/L ammonium acetate and B:25 mmol/L ammonium acetate-acetonitrile(1 4)pH adju
11、sted to 6.5 with glacial acetic acid,with gradient elution.Nine impurities were detected by two-dimensional online desalting method,with 5 known impurities(AE)and 4 unknown ones.14 impurities were detected by the compatible mass spectrometry method,with 9 unknown impurities(4 consistent with the res
12、ults of two-dimensional online desalting method,and 5 newly detected).The structures and sources of the unknown impurities were deduced.The two detection methods of lansoprazole preparation by high-performance liquid chromatography-high resolution orbital trap mass spectrometry have guiding signific
13、ance for quality control and process evaluation.Key words lansoprazole;enteric preparation;impurity spectrum;online desalting;liquid chromatography mass spectrometry#LI Yan and JIA Huanhuan contributed equally to this work兰索拉唑属苯并咪唑类,是继奥美拉唑之后的新一代质子泵抑制剂1,由日本武田制药株式会社研制,于1991年在法国首次以商品名Takepron上市,1995 年通
14、过美国 FDA 认证2。主要作用于 H+-K+-ATP 酶来发挥抑酸作用,临床广泛用于治疗各种消化功能紊乱性的疾病,如胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性食管炎、吻合口溃疡、消化道出血、胃泌素瘤,以及其他症状较重或经 H2受体拮抗治疗无效的难治性溃疡等3,对幽门螺杆菌也有抑制作用4。兰索拉唑遇酸、热、氧化等条件均易变质降解,因此对其有关物质的控制与研究尤为重要,因兰索拉唑酸不稳定的特点5,原研剂型为口崩片和肠溶胶囊,国内市场上的口服剂型主要为肠溶片和肠溶胶囊,国产兰索拉唑肠溶片为改剂型品种,其杂质谱与原研制剂是否存在差异也是本研究的关注点之一。天津武田药品有限公司生产的兰索拉唑肠溶胶囊属于原研地产化品
15、种,是国家局公布的仿制药参比制剂,因此本研究以其作为参比制剂进行相关研究。英国药典、美国药典和中国药典均采用高效液相色谱法检查兰索拉唑的有关物质6-8。英国药典给出了6个已知杂质,分别为杂质A、B、C、D、E和F;美国药典给出了3个已知杂质,为兰索拉唑N氧化物、杂质A和杂质B(兰索拉唑硫醚),分别对应英国药典的杂质A、B和C;两者均对已知杂质进行了限度控制。但中国药典未给出已知杂质限度要求,仅对单个杂质和各杂质峰面积的和进行控制。目前中国食品药品检定研究院已有兰索拉唑杂质、和对照品,分别对应英国药典的杂质A、B、D和E。本研究首先利用二维在线除盐技术,采用高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用检测
16、方法,对兰索拉唑肠溶制剂在中国药典有关物质项下的检出杂质进行了结构推定,由于该色谱条件采用的流动相为甲醇-水-三乙胺-磷酸,与质谱检测器不兼容,且前期实验发现该方法中有部分杂质与辅料峰共同流出,为了进一步研究相关杂质,本研究又开发了兼容质谱检测器的有关物质色谱条件,在美国药典的兰索拉唑有关物质方法的基础上,尝试以兼容质谱检测器的乙酸铵替代三乙胺,冰乙酸替代磷酸,同时将流动相 pH降低至6.5;为了延长杂质峰的保留时间,避免在切除溶剂峰时误将杂质峰一并切去,又优化了梯度洗脱程序,进而对新检出的杂质进行结构推定,解决了色谱流动相不适宜直接用于质谱分析的难题,又保证了不同来源的制剂中最大程度地检出有
17、关物质,并考察了不同企业间产品杂质谱的差异性。1 材 料 1.1试 剂兰索拉唑肠溶片(抽样样品,企业a z),兰索拉唑肠溶胶囊(参比制剂,天津武田药品有限公司);兰索拉唑(批号100709-201705,含量99.6%);杂 质(批 号 510046-201401);杂 质(批 号510047-201401);杂质(批号510048-201401);杂质(批号 510049-201401)均来自中国食品药品检 定 研 究 院;杂 质 C(批 号:S17041902,纯 度99.94%)和杂质F(批号:S17110601,纯度99.3%)均由江苏奥赛康药业股份有限公司提供。乙腈、甲醇、甲酸、三乙
18、胺为色谱纯,其他试剂均为市售578第 54 卷第 5 期李岩,等:高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用法对兰索拉唑肠溶制剂的杂质谱研究分析纯,水为Milli-Q超纯水。1.2仪 器LC-20AB 高效液相色谱仪(日本岛津公司);Ultimate 3000-Q Exactive Orbitrap 液质联用仪(美国赛默飞世尔公司)。2 方 法 2.1二维在线脱盐液质联用方法2.1.1一维色谱条件采用 中华人民共和国药典 有关物质的色谱条件8。色谱柱:Agilent Zorbax SB C18(4.6 mm 250 mm,5 m);流动相:甲醇-水-三乙胺-磷酸(600 400 5 1.5)用磷酸溶液
19、(110)调节 pH 至 7.3,等度洗脱;流速:0.6 mL/min;柱温:30;进样体积:10 L;检测波长:284 nm。2.1.2二维色谱条件色谱柱:Waters C18 T3(2.1 mm 100 mm,1.7 m);流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱:0 5 min,5%B;5 50 min,5%B95%B;50 min 50.1 min,95%B5%B;50.1 60 min,5%B。流速:0.3 mL/min;柱温:30;进样体积:10 L;检测波长:284 nm。2.1.3质谱条件离子源:ESI源,正离子模式;扫描范围:一级质谱m/z 10
20、0 1 000,二级质谱m/z 50 1 000;鞘气流约 4.58 L/min(40 arb),辅助气流约7.97 L/min(10 arb),喷雾电压:350 kV,毛细管温度:325,S-lens RF level:55.0,辅助器加热温度:350。2.2兼容质谱检测器的液质联用方法2.2.1 色 谱 条 件 色 谱 柱:Agilent Extend C18(4.6 mm 150 mm,5 m);流动相A为25 mmol/L乙酸铵溶液,流动相B为乙腈-25 mmol/L乙酸铵溶液(4 1)用冰乙酸调节pH至6.5;梯度洗脱:0 2 min,10%B;2 40 min,10%B80%B;4
21、0 min 50 min,80%B;50 51 min,80%B10%B;51 min 60 min,10%B。流速:0.8 mL/min;柱温:25;进样体积:20 L;检测波长:285 nm;2.2.2质谱条件采用“2.1.3”项的质谱条件。校准方法:自动调谐优化电压,外标法校准质量数,子离子扫描模式为Fullms-dd/ms2。2.3溶液的制备系统适用性溶液的制备:取兰索拉唑、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F对照品各适量,用甲醇-0.1 mol/L NaOH(1 3)溶液溶解并稀释制成每毫升含兰索拉唑2 mg、杂质A、B、C、D、E、F各10 g/mL的混合溶液。供试品溶液
22、的制备:取兰索拉唑肠溶片除去肠溶衣或肠溶胶囊内容物,研细,精密称取适量,加甲醇-0.1 mol/L NaOH(1 3)溶液制成每毫升含兰索拉唑2 mg的溶液,滤过,取续滤液作为供试品溶液。对照溶液:精密量取供试品溶液 1 mL,至100 mL量瓶中,用甲醇-0.1 mol/L NaOH(1 3)稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。3 结 果 3.1二维在线除盐液质联用法检出杂质的结构推定前期实验中,本研究对抽样获得的19家企业生产的兰索拉唑肠溶片和8家企业生产的兰索拉唑肠溶胶囊按照中国药典方法进行了有关物质检查,选出了 5批杂质较多的样品,均为肠溶片,与1批参比制剂一起采用“2.1”项方法,利用二
23、维在线除盐技术对检出杂质进行结构推定。按照中国药典规定相对保留时间0.25之前的色谱峰忽略不计,通过对照品定位和质谱信息发现,杂质D和杂质E在紫外图谱中无法分离,但质谱提取离子流图可以实现有效分离,分别标记为杂质1和杂质2,其余杂质按出峰顺序依次编号,图1为检出杂质最多的2批样品,覆盖了全部9个杂质。通过与已知杂质的保留时间和质谱数据比较,归属了5个色谱峰为已有对照品的已知杂质,分别为杂质D、E、A、B、C,在图中色谱峰编号依次为1、2、6、7、9,其余4个杂质为未知杂质。为了更好地对杂质结构进行分析,首先对兰索拉唑本身结构,其一级、二级质谱行为,主要二级碎片结构进行全面解析,结果见图2;其中
24、分子离子峰为m/z 370.083 2,m/z 252.029 7,m/z 119.060 5为其典型特征碎片,m/z 119.060 5可能为苯并咪唑碎片离子,m/z 252.029 7可能为兰索拉唑脱去苯并咪唑的碎片离子。通过252、119、136等特征差异碎片的比对,可从质谱角度推测出未知杂质结构变化位点。以杂质 4 为例,提取杂质 4 色谱峰顶点的质谱图,见图3,其中主要离子为370.083 5,实际测定质荷比与推测分子式理论质荷比一致(diff=579学 报 Journal of China Pharmaceutical University 2023,54(5):577-585第5
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 高效 色谱 高分 轨道 阱质谱 联用 兰索拉唑肠溶 制剂 杂质 研究
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。