高效液相色谱法测定口洁含漱液中13种化学成分的含量.pdf
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1、第 53 卷第 10 期2023 年 10 月Vol.53 No.10Oct.20231233 日 用 化 学 工 业(中英文)China Surfactant Detergent&Cosmetics Received:October 20,2022;Revised:September 22,2023.*Corresponding author.Tel.:+86-13839294709,E-mail:xunjing_.DOI:10.3969/j.issn.2097-2806.2023.10.016Determination of 13 chemical components in Koujie
2、 gargle by HPLCXiaoyanWu1,*,FaxiangSong2(1.Puyang Medical College,Puyang,Henan 457000,China;2.Puyang Food and Drug Inspection and Testing Center,Puyang,Henan 457000,China)Abstract:The study aimed to develop an high performance liquid chromatography(HPLC)method for the determination of neochlorogenic
3、 acid,chlorogenic acid,caffeic acid,luteolin-7-O-glucoside,3,5-dicaffeoylquinic acid,4,5-dicaffeoylquinic acid,luteolin,apigenin,loganin,sweroside,secoxyloganin;(R,S)-goitrin and clemastanin B in Koujie gargle.Separation was carried out using Waters Symmetry C18(250 mm4.6 mm,5 m)with mobile phase of
4、 acetonitrile-0.3%phosphoric acid in gradient elution.The detection wavelength was set at 348 nm,240 nm and 224 nm.The flow rate was 1.0 mL/min,and the column temperature was 30.The results show that the linear relationship of 13 chemical components in Koujie gargle is good(r0.999 1),the average rec
5、overy ranges from 96.92%to 100.11%,and the RSD ranges from 0.53%to 1.58%.The established HPLC wavelength switching method is accurate which can be used for the quality control of Koujie gargle.Key words:Koujie gargle;high performance liquid chromatography;oral care products;content determination1234
6、第 53 卷分析与检测日 用 化 学 工 业(中英文)口洁含漱液由金银花、菊花、板蓝根、薄荷脑和桉油加工而成,主要用于口腔的清洁,能够有效缓解咽喉红肿疼痛等不适1。口洁含漱液不仅能清除口腔异味,还发挥抗菌消炎的作用,可减少口腔细菌、抑制牙菌斑、减少牙龈问题2-6。作为口腔护理新崛起的品类,含漱液在口腔护理领域的市场占比增速显著,市场前景巨大。作为生活刚需的口腔清洁护理用品,它与人们的健康息息相关。高效液相色谱法(HPLC)具有高效、高灵敏度、分析检测速度快等特点,现已广泛应用于植物中多种成分的质量控制研究中。口洁含漱液现行质量标准WS-11345(ZD-1345)-2002-2013Z仅采用G
7、C法检测了薄荷脑的含量,不能涵盖其它药方的成分,为保障其产品质量,本实验采用HPLC法对口洁含漱液中13种组分(新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素、芹菜素、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷、(R,S)-告依春和直铁线莲宁B)进行含量测定,以期为生产具有有效性、安全性和稳定性的产品提供技术支撑。1 实验部分1.1 主要材料、试剂与仪器对照品(R,S)-告依春(批号:111753-202007)、咖啡酸(批号:110885-201703)、芹菜素(批号:111901-202004)、马钱苷(批号:111640-201808)、绿原
8、酸(批号:110753-202119)、木犀草苷(批号:111720-202111)、木犀草素(批号:111520-202107),4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(批号:111894-202205),纯度均94.9%,中国食品药品检定研究院;新绿原酸(批号:PRF8050441)、断氧化马钱子苷(批号:PRF8071841)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(批号:PRF8061204),纯度均98.8%,成都普瑞法科技开发有限公司;当药苷(批号:CFS202101)、直铁线莲宁B(批号:CFS202102),纯度均98.0%,武汉天植生物技术有限公司;口洁含漱液(规格:20 mL/瓶,批号:H20
9、73、H2111、H2116),广州白云山医药集团股份有限公司白云山何济公制药厂;磷酸、甲醇,色谱级,其余试剂为分析纯。Waters e2695型高效液相色谱仪,美国Waters公司;BP211D型电子天平,德国Sartorius公司。1.2 实验方法1.2.1 供试品溶液的制备精密吸取口洁含漱液2.0 mL,置25 mL容量瓶中,用50%甲醇定容,摇匀,过滤,即得供试品溶液。1.2.2 混合对照品溶液的制备精密称取各对照品适量,用50%甲醇溶解并制成含新绿原酸0.478 mg/mL、绿原酸8.130 mg/mL、咖啡酸0.098 mg/mL、木犀草苷0.612 mg/mL、3,5-O-二咖啡
10、酰基奎宁酸1.590 mg/mL、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸 2.376 mg/mL、木犀草素0.208 mg/mL、芹菜素0.112 mg/mL、马钱苷3.204 mg/mL、当药苷0.870 mg/mL、断氧化马钱子苷3.918 mg/mL、(R,S)-告依春0.154 mg/mL、直铁线莲宁B 0.072 mg/mL的混合对照品贮备液,再将该贮备液用相同溶剂稀释20倍,得13个对照品质量浓度分别为23.90,406.50,4.90,30.60,79.50,118.80,10.40,5.60,160.20,43.50,195.90,7.70和3.60 g/mL 的溶液,即得混合对照品溶液
11、。1.2.3 阴性样品溶液的制备按质量标准WS-11345(ZD-1345)-2002-2013Z高效液相色谱法测定口洁含漱液中13种化学成分的含量吴晓燕 1,*,宋发祥 2(1.濮阳医学高等专科学校,河南 濮阳 457000;2.濮阳市食品药品检验检测中心,河南 濮阳 457000)摘要:建立了高效液相色谱法(HPLC)测定口洁含漱液中新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素、芹菜素、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷、(R,S)-告依春、直铁线莲宁B共13种成分的含量。以Waters Symmetry C18(250 mm4.6
12、mm,5 m)为色谱柱,流动相:乙腈-0.3%磷酸,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30,检测波长为348,240和224 nm。结果显示,口洁含漱液中13种化学成分的线性关系良好(r0.999 1),平均加样回收率为96.92%100.11%,RSD为0.53%1.58%。所建立的高效液相波长切换法结果准确,可用于口洁含漱液的质量控制。关键词:口洁含漱液;高效液相色谱法;口腔护理用品;含量测定中图分类号:TQ658 文献标识码:A 文章编号:2097-2806(2023)10-1233-081235第 10 期分析与检测吴晓燕,等:高效液相色谱法测定口洁含漱液中13种化学成分的含
13、量 分别制备缺金银花和菊花的阴性供试品、缺板蓝根的阴性供试品,再按1.2.2项下方法制备相应的阴性样品溶液。1.2.4 色谱条件以乙腈(A)-体积分数0.3%磷酸(B)为流动相7-10;采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm 4.6 mm,5 m),柱温30;进样量10L;检测波长为:038 min时348 nm7-12下检测新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素和芹菜素,3849 min时240 nm13-16下检测马钱苷、当药苷和断氧化马钱子苷,4965 min时224 nm17下检测(R,S)-告依
14、春和直铁线莲宁B;流速为1.0 mL/min进行梯度洗脱(010 min,12.0%A;1038 min,12.0%38.0%A;3849 min,38.0%52.0%A;4961 min,52.0%75.0%A;6165 min,75.0%12.0%A)。2 结果与讨论2.1 流动相的优化筛选本试验在优化流动相系统时,首先对甲醇-水和乙腈-水进行考察,结果甲醇-水作为流动时,检验用时长,(R,S)-告依春和直铁线莲宁B色谱峰峰形对称度不符合要求;乙腈-水作为流动时,绿原酸和断氧化马钱子苷色谱峰拖尾严重,干扰检测,遂加入不同体积分数的磷酸溶液(0.05%,0.1%,0.2%,0.3%和0.4%
15、)改善,最终采用乙腈-体积分数0.3%磷酸作为流动相。2.2 供试品溶液制备方法的确定本试验在制备供试品溶液时,考虑到该制剂为液体制剂,在生产时已进行了提取,主要考察不同体积分数的甲醇溶液(50%,60%,70%)作为溶剂时各组分的提取率,结果发现50%甲醇直接稀释时,口洁含漱液中的新绿原酸等13个组分的提取率最高,最终确定采用50%甲醇稀释摇匀作为供试品溶液的制备方法。2.3 方法学验证2.3.1 专属性实验取1.2.11.2.3项下的混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液,在1.2.4项色谱条件下进样,记录色谱图(图1)。图谱显示基线平稳,色谱峰峰形对称,口洁含漱液供试品溶液中13个组分
16、与相邻色谱峰的分离度均不小于1.5。1.新绿原酸;2.绿原酸;3.咖啡酸;4.木犀草苷;5.3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸;6.4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸;7.木犀草素;8.芹菜素;9.马钱苷;10.当药苷;11.断氧化马钱子苷;12.(R,S)-告依春;13.直铁线莲宁B图1 混合对照品(A)、口洁含漱液(B)、缺金银花和菊花阴性样品(C)和缺板蓝根阴性样品(D)的HPLC图Fig.1 HP LC chromatograms of the mixed reference substances(A),Koujie gargle(B),sample without Lonicerae japon
17、icae flos and Chrysanthemi flos(C),sample without Isatidis radix(D)05102520154540353065605550Intensity/mAUt/minC121305020015025010030005102520154540353065605550Intensity/mAUt/minA1234567891110121305020015025010030005102520154540353065605550Intensity/mAUt/minB12345678911101213050200150250100300051025
18、20154540353065605550Intensity/mAUt/minD12345678911100502001502501003001236第 53 卷分析与检测日 用 化 学 工 业(中英文)2.3.2 线性关系、定量限和检测限考察精密吸取混合对照品贮备液0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,5.0 mL,均置20 mL容量瓶中,用50%甲醇定容并摇匀,按1.2.4项色谱条件进样,记录色谱图,以新绿原酸等13个组分的质量浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归,结果见表1。表1 口洁含漱液中13个成组分的回归方程、相关系统和线性范围Tab.1 Regression equations,
19、correlation coefficients,and linearity ranges of 13 components in Koujie gargle组分回归方程r线性范围/(g/mL)新绿原酸Y=9.841 6105X-813.90.999 62.39119.50绿原酸Y=1.351 2106X+1 543.10.999 240.652 032.50咖啡酸Y=5.982 4105X-1 813.60.999 30.4924.50木犀草苷Y=1.523 9106X+613.80.999 13.06153.003,5-O-二咖啡酰基奎宁酸Y=6.931 8105X-961.40.999
20、97.95397.504,5-O-二咖啡酰基奎宁酸Y=1.109 7106X-846.20.999 411.88594.00木犀草素Y=1.485 1106X-613.70.999 21.0452.00芹菜素Y=8.330 6105X+516.50.999 30.5628.00马钱苷Y=1.902 4106X-1 064.20.999 516.02801.00当药苷Y=1.722 5106X-436.80.999 74.35217.50断氧化马钱子苷Y=2.185 7106X+491.60.999 619.59979.50(R,S)-告依春Y=1.215 9106X+1 162.30.999
21、80.7738.50直铁线莲宁BY=3.157 4105X-899.10.999 40.3618.002.3.3 精密度试验在1.2.4色谱条件下,连续进样混合对照品溶液 6次,记录新绿原酸等13个组分色谱流出曲线,结果精密度良好(峰面积的RSD值均小于2.0%)。2.3.4 重复性试验取口洁含漱液(批号:H2073)适量,按1.2.1项下方法制备口洁含漱液供试品溶液6份,在上述色谱条件下进样,记录色谱流出曲线,用外标法计算新绿原酸等13个组分的含量,结果重复性良好(含量的RSD值均小于2.0%)。2.3.5 稳定性试验取口洁含漱液(批号:H2073),按按1.2.1项下方法制备口洁含漱液供试
22、品溶液,于制备后0,2,5,9,16和24 h依法进样,记录新绿原酸等13个成组分的色谱流出曲线,结果口洁含漱液供试品溶液24 h内是稳定的(峰面积的RSD值均小于2.0%)。2.3.6 加样回收试验精密吸取口洁含漱液(批号:H2073)1.0 mL(共9份),按已知各组分含量的80%,100%和120%三个水平分别加入混合对照品溶液(含新绿原酸 0.357 mg/mL、绿原酸5.894 mg/mL、咖啡酸0.073 mg/mL、木犀草苷0.472 mg/mL、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸1.209 mg/mL、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸1.761 mg/mL、木犀草素0.154 mg/mL
23、、芹菜素0.089 mg/mL、马钱苷2.254 mg/mL、当药苷0.692 mg/mL、断氧化马钱子苷2.787 mg/mL、(R,S)-告依春0.117 mg/mL、直铁线莲宁B 0.051 mg/mL),每个水平测定3份,再按1.2.1项方法制得加样供试品溶液,在上述色谱条件下检测,计算得13个组分的平均加样回收率及RSD结果见表2。由表2可以看出,口洁含漱液中13种化学成分的平均加样回收率为96.92%100.11%,RSD为 0.53%1.58%。表2 加样回收试验结果(n=9)Tab.2 Sample recovery test results(n=9)成分样品中含量/mg加入量
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