SN∕T 3566-2013 滤膜抽滤核酸提取方法(出入境检验检疫).pdf
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1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 滤膜抽滤核酸提取方法犖 狌 犮 犾 犲 犻 犮犪 犮 犻 犱犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犻 狅 狀犿 犲 狋 犺 狅 犱犫 犪 狊 犲 犱狅 狀犿 犲 犿 犫 狉 犪 狀 犲 犳 犻 犾 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准按照 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位: 中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人: 祁军、 王馨、 左锋、 刘振宇、 柴宏森、
2、 张霞、 詹曦菁、 魏永新、 李智慧、 尤其敏、 胡林、崔景柏。犛 犖犜 滤膜抽滤核酸提取方法范围本标准规定了滤膜法核酸快速提取技术的操作方法。本标准适用于检验检疫机构对病原体核酸的提取。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件, 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件。 分析实验室用水规格和试验方法 实验室生物安全通用要求 食源性病原体 检测技术规范第部分: 定性检测方法样品制备要求缩略语下列缩略语适用于本文件。 : 脱氧核糖核酸( ) : 核糖核酸( ) : 乙二胺四乙酸( ) : 三羟甲基氨基甲
3、烷盐酸盐( ) : 焦碳酸二乙酯( ) : 核糖核酸水解酶 : 核糖核酸酶抑制剂生物安全措施为了保护实验室人员的安全, 按照 中的有关规定, 应由具备相关资格的工作人员进行实验操作。所有废弃物也应按照 中的有关规定执行。方法原理滤膜法核酸快速提取技术提供了一种从各种生物样本中快速提取核酸的方法。滤膜抽滤核酸提取装置是利用滤膜可以特异性吸附核酸( ) 的特点, 在样品进行裂解后, 利用装置对生物样品进行过滤、 吸附、 清洗及洗脱, 一次性提取核酸。本标准通过溶液的离子浓度和 值来控制滤膜抽滤核酸提取装置吸附和洗脱核酸的效率。本方法适用于食品、 食品接触面( 包括人员手、 设备、 器具等食品直接接
4、触表面) 和生物样品中病原体核酸( ) 的提取。在提取 时, 滤膜抽滤核酸提取装置通用, 但在提取 时,使用的耗材和洗脱液需要经过特别处理, 以消除或减少 酶对 的降解。由于对于可疑入境人犛 犖犜 员及物品的检查只是初筛, 对其的确定性检测还是应依靠条件完善的实验室检测。因而尽管核酸提取对环境要求较高, 但只要保证检测时有独立且封闭的空间环境以及必要的试剂或仪器设施即可完成本方法的核酸提取过程。试剂和材料 除有特殊说明外, 所有实验用试剂均为分析纯。 实验用水符合 中一级水的要求。 裂解液: 见附录中 。 清洗液: 见附录中 。 清洗液: 见附录中 。 洗脱液: 见附录中 。 ( 处理痰液及脓
5、性样本时使用) 。 生理盐水( 处理分泌物拭子、 粪便时使用) 。 ( 提取 时使用) 。 ( 提取 时建议使用) 。 微量移液器: 体积范围为 , 。 一次性注射器。 滤膜抽滤核酸提取装置: 由核酸提取装置和抽吸装置组成( 见图 ) 。其中核酸提取装置内含有特异性吸附核酸的滤膜; 抽吸装置为一次性 注射器。 样本前处理装置( 过滤器) : 为样本进行核酸提取前进行杂质过滤的装置( 见图 ) , 分为进样口、 混匀区和出样口。在出样口处含有过滤膜, 可去除样本中的杂质。 离心管( 处理分泌物拭子时使用) 。 离心管( 处理粪便时使用) 。 痰瓶( 处理痰液及脓性样本时使用) 。 离心管。 离心
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