SC∕T 7219.5-2015 三代虫病诊断规程 第5部分:细锚三代虫病(水产).pdf
《SC∕T 7219.5-2015 三代虫病诊断规程 第5部分:细锚三代虫病(水产).pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《SC∕T 7219.5-2015 三代虫病诊断规程 第5部分:细锚三代虫病(水产).pdf(9页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、ICS 65.020.30 B 50 :才叫中华人民共和国水产行业标准SC/T 7219.5-2015 三代虫病诊断规程第5部分:细锚三代虫病Protocols for diagnosis of Gyrodactylosis-Part 5: Infection with Gyro彻ctylussprostonae 2015-02-09发布2015-05-01实施中华人民共和国农业部发布SCjT 7219.5-2015 目。ESC/T 7219 (三代虫病诊断规程为系列标准:一第1部分:大西洋娃三代虫;一一第2部分:皖三代虫病;一一第3部分:链兰代虫病;一第4部分:中型三代虫病;一一第5部分:细
2、锚三代虫病;一一第6部分:小林三代虫病;本部分为SC/T7219的第5部分。本部分按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业渔政管理局提出o本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。本部分起草单位:中国科学院水生生物研究所、全国水产技术推广总站。本部分主要起草人:李文祥、王桂堂、邹红、吴山功、陈爱平。I 1 范围三代虫病诊断规程第5部分:细锚三代虫病SC/T 7219.5一2015本部分规定了细锚兰代虫病的感染对象与临床症状,细锚三二.代虫(也叫史若兰兰代虫,Gyrodacty
3、lus srostonae)的采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方法以及细锚兰代虫病的综合判定。本部分适用于鲤、蝉的细锚三代虫病的流行病学调查、诊断、监测和检疫。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注目期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法SCjT 7103 水生动物产地检疫采样技术规范3 试剂和材料3.1 水=符合GBjT6682中一级水的规格。3.2 乙醇:分析纯。3. 3 Taq酶:一200C保存,避免反复冻融。3. 4 dNTPs:含dATP、
4、dTTP、dGTP和dCTP各10mmol/Lo 3.5 上游引物:5-TTTCCGTAGGTGAACCT -3。3.6 下游引物:5-TCCTCCGCTTAGTGATA -3。3.7 矿物油:不含DNA酶和RNA酶。3. 8 DNA marker 2 000: 2 000 bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp。3.9 其他试剂见附录Ao4 仪器和设备4. 1 解剖盘、剪刀、慑子、解剖针、于术刀。4. 2 体视显微镜和带测微标尺的光学显微镜。4. 3 盖玻片、载玻片、培养皿。4.4 电子天平。4. 5 普通台式离心机和高速冷冻离心机。4.6 普通冰箱和超低温冰箱。
5、4. 7 微量移液器。4.8 PCR扩增仪。4. 9 离心管和PCR管。4. 10 紫外透射仪。4.11 水平电泳系统。1 SC/T 7219.5-2015 5 感染对象与临床症状5. 1 感染对象细锚三代虫能感染挪CCara川usauratusuratus)、东北鲤CCynnuscar户iohematopterus)、翘嘴红鲍(Erythrolterilishaeformis)和馀(Silurusspp. )等。5. 2 临床症状细锚三代虫主要寄生于体表,病鱼常出现蹭擦池壁、跃出水面的行为;有些病鱼反应迟饨,常在水流缓慢的地方出现,体表因素占液增多变成淡灰色,背鳝、尾鳝和胸鳝的边缘出现廉烂。
6、6 三代虫采集与固定6. 1 病鱼采集仔细观察待检鱼类的临床症状和行为,捞取具有典型症状的鱼类。采样方法、样品数量、样品封存和运输应符合SC/T7103的规定。6. 2 三代虫样品的收集6.2. 1 现场采集剪取鳝条、鲤、丝或刮取部分体表教液,置于载玻片上。滴加数滴清水,置于体视显微镜下观察。用解剖针将三代虫从鳝条或螺丝或体表教液中分离,用吸管吸出,放在盛有清水的培养皿中,每尾病鱼至少采集成虫10条。6.2.2 固定病鱼中的采集剪取病鱼鳝条或鲍丝放在载玻片上,逐滴加入自来水浸泡10min,置于体视显微镜下观察。发现兰代虫后,用解剖针将虫体分离,放在盛有清水的培养皿中;同时,镜检固定病鱼所用容器
7、底部的沉淀物。如发现有从鱼体脱藩的三代虫,用吸管吸出,放在盛有清水的培养皿中。6. 3 三代虫样晶的固定与保存加一滴清水到载玻片上,用吸管吸取一个虫体置于水滴中,轻轻地盖上盖玻片。用一张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水,直到水基本吸干为止。加上-滴APG恪液(见附录A.1)到盖玻片边缘,直到浸满盖玻片与载玻片之间的空隙o用于形态学鉴定的虫体样本可用70%酒精保存,用于PCR鉴定的虫体样品可用95%酒精保存。7 细锚三代虫的鉴定7. 1 细锚三代虫的形态学鉴定细锚兰代虫运动如尺攫;虫体呈长叶形,体长O.2 mmO. 5 mm,体前有2个头器,无黑色眼点;虫体后端具几T质的伞状后吸器,其上有1对锚钩、16
8、个边缘小钩和1根腹联结片;锚钩基部较长,与钩尖几乎等长,腹联结片上窄下宽,突起间长小于腹联结片长,可依次进行鉴定。细锚士气代虫后吸器的锚钩、边缘小钩和腹联结片的形态特征、测量部位及其大小见附录B。如果虫体后吸器的形态特征和测量大小与附录B相符,则可判定为细锚兰代虫。7.2 细锚三代虫的分子检测7.2. 1 虫体DNA的提取将80%乙醇同定的三代虫(1个虫体作为1个样品)充分干燥去除乙醇,置入1.5 mL的离心管中,加入500LDNA抽提缓冲液1(见附录A.的于550C消化3h,冷却至室温后加入500LDNA抽提缓冲液I1C见附录A.日,摇匀,11000 g离心10min,收集上清液。然后,加入
9、2倍上清液体积的一200C预冷无水乙醇,40C下5000g离心10min弃上清液,70%乙醇洗涤沉淀2次,弃上清液,空气干燥后溶于40LTE缓冲液(见附录A.2), -20oC保存备用。SC/T 7219.5-2015 7.2.2 rDNA -ITS的PCR扩增PCR反应体系(25L)中,加入20mol/L的上游引物和下游引物各1L,dNTPs2L,MgC12 2.5 L,Taq酶缓冲液2.5L,O.5 U Taq酶以及模板基因组DNA1L,最后用无菌去离子水定容到25L,无热盖加的PCR仪应加矿物油25LPCR扩增时,应设置阴性对照和阳性对照。在PCR扩增仪中,940C预变性4min,再94
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- SCT 7219.5-2015 三代虫病诊断规程 第5部分:细锚三代虫病水产 SC 7219.5 2015 三代虫病 诊断 规程 部分 细锚三代虫病 水产
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【曲****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【曲****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。