川芎嗪对宫颈癌细胞增殖和侵袭转移的抑制作用及分子机制.pdf
《川芎嗪对宫颈癌细胞增殖和侵袭转移的抑制作用及分子机制.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《川芎嗪对宫颈癌细胞增殖和侵袭转移的抑制作用及分子机制.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、收稿日期:基金项目:江西省自然科学基金(B A B );江西省教育厅科学技术研究项目(G J J )作者简介:付宏伟(),男,硕士,主管技师,主要从事妇科肿瘤诊断与免疫学研究.通信作者:万福生,教授,E m a i l:w a n f s c o m.川芎嗪对宫颈癌细胞增殖和侵袭转移的抑制作用及分子机制付宏伟 a,b,万慧芳 c,刘卓琦 b,陈春香,万福生 b(南昌大学a 附属妇幼保健院检验科;b 基础医学院生物化学与分子生物学教研室;c 医学实验教学中心,南昌 ;南昌大学抚州医学院生化与分子生物学教研室,江西 抚州 )摘要:目的探究川芎嗪(TMP)对人宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制
2、.方法用含有质量浓度为、和 m gm LTMP的培养基处理人宫颈癌S i H a细胞后,用C C K 法检测细胞增殖能力;用T r a n s w e l l小室检测细胞侵袭、迁移能力;用蛋白免疫印记法检测细胞内上皮间质转化(EMT)相关蛋白、基质金属蛋白酶/(MMP/)和P I K/AK T/G S K 通路相关蛋白的表达水平.结果在 m gm L浓度范围内,TM P对S i H a细胞的增殖、侵袭和迁移表现出浓度依赖性的抑制作用(P 或P);与m gm LTMP处理组相比,、和 m gm LTMP处理组细胞内E C a d h e r i n、P I K、p AK T及p G S K 表达
3、水平显著上升,而N c a d h e r i n、V i m e n t i n、C a t e n i n和MMP/的表达水平显著下降(P 或P).结论TMP可能通过激活P I K/AK T/G S K 信号通路抑制EMT过程和MMP s表达,抑制人宫颈癌S i H a细胞增殖、侵袭和转移.关键词:川芎嗪;侵袭;转移;P I K/AK T/G S K 通路;宫颈癌;人中图分类号:R 文献标志码:A文章编号:()D O I:/j c n k i n c d m I n h i b i t o r yE f f e c t a n dM o l e c u l a rM e c h a n i
4、 s mo fL i g u s t r a z i n eo nP r o l i f e r a t i o n,I n v a s i o na n dM e t a s t a s i so fC e r v i c a lC a n c e rC e l l sF UH o n g w e i a,b,WA NH u i f a n g c,L I UZ h u o q i b,C H E NC h u n x i a n g,WA NF u s h e n g b(a C l i n i c a lL a b o r a t o r yo fA f f i l i a t e dM
5、 a t e r n a la n dC h i l dH e a l t hH o s p i t a l;b D e p a r t m e n to fB i o c h e m i s t r ya n dM o l e c u l a rB i o l o g yo fB a s i cM e d i c a lC o l l e g e;c M e d i c a lC l i n i c a lE x p e r i m e n tT e a c h i n gC e n t e r,N a n c h a n gU n i v e r s i t y,N a n c h a n
6、 g ,C h i n a;D e p a r t m e n t o fB i o c h e m i s t r ya n dM o l e c u l a rB i o l o g y,F u z h o uM e d i c a lC o l l e g eo fN a n c h a n gU n i v e r s i t y,F u z h o u ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v e T oo b s e r v et h ee f f e c t so f l i g u s t r a z i n e(TMP)o nt h
7、 ep r o l i f e r a t i o n,i n v a s i o na n dm i g r a t i o no fh u m a nc e r v i c a l c a n c e rc e l l sa n di t sm e c h a n i s mo fa c t i o n M e t h o d s H u m a nc e r v i c a l c a n c e rS i H ac e l l sw e r et r e a t e dw i t hd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so fTMP(,
8、a n d m gm L)T h ep r o l i f e r a t i v e c a p a c i t yo f c e l l sw a sd e t e c t e db yC C K a s s a y T h em i g r a t o r ya n d i n v a s i v e a b i l i t i e so f c e l l sw e r e a n a l y z e db yT r a n s w e l l a s s a y E p i t h e l i a l m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n
9、(EMT)r e l a t e dp r o t e i n s,m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e(MMP)/,a n dP I K/AK T/G S K p a t h w a y a s s o c i a t e dp r o t e i n sw e r ed e t e r m i n e db y W e s t e r nb l o t R e s u l t sT r e a t m e n tw i t h TMP(m gm L)i n h i b i t e dt h ep r o l i f e r a t i o
10、 n,i n v a s i o na n dm i g r a t i o no fS i H ac e l l s i nac o n c e n t r a t i o n d e p e n d e n tm a n n e r(P o rP)F u r t h e r m o r e,TMPt r e a t m e n ta td o s e so f南昌大学学报(医学版)年第 卷第期J o u r n a l o fN a n c h a n gU n i v e r s i t y(M e d i c a lS c i e n c e s),V o l N o ,a n d m
11、 gm Lu p r e g u l a t e dt h ee x p r e s s i o no fE c a d h e r i n,P I K,p AK Ta n dp G S K ,a n dd o w n r e g u l a t e dt h ee x p r e s s i o no fN c a d h e r i n,V i m e n t i n,c a t e n i na n dMMP/i nS i H ac e l l s(P o rP)C o n c l u s i o n TMPm a ys u p p r e s sEMTa n dMMPe x p r e
12、 s s i o nb ya c t i v a t i n gP I K/AK T/G S K s i g n a l i n gp a t h w a y,a n du l t i m a t e l yi n h i b i tt h ep r o l i f e r a t i o n,i n v a s i o na n dm e t a s t a s i so fh u m a nc e r v i c a l c a n c e rS i H ac e l l s K E Y WO R D S:l i g u s t r a z i n e;i n v a s i o n;m
13、i g r a t i o n;P I K/AK T/G S K p a t h w a y;c e r v i c a l c a n c e r;H o m os a p i e n s宫颈癌是妇科常见的一种恶性肿瘤,在全球女性中属于最常见的四大癌症之一,高发病率和病死率是其重要特征,严重危害着女性的身心健康 .根据流行病学调查分析结果,我国宫颈癌的发病率和死亡率仍在上升.虽然手术、化疗和放疗等治疗手段逐渐成熟,但对于一些晚期宫颈癌特别是转移性宫颈癌患者的治疗效果并不尽如人意.因此,寻找有效治疗宫颈癌的新方法和策略仍是当前努力的方向,具 有 重 要 的 价 值 和 现 实 意 义 .已 有
14、 研究 指出,P I K/AK T/G S K 信号通路异常激活在宫颈癌发生发展中起着重要作用.糖原合酶激酶(G S K )作为AK T的下游靶分子,在介导多种细胞功能的同时,也是参与癌细胞生长的重要调节因子.近年来的研究 显示,川芎嗪(TMP)不仅对心血管疾病有良好的防治作用,还对多种癌症表现出较好的治疗效果,并且具有抑制癌细胞侵袭和转移的作用 .作为中药川芎的主要活性成分之一,TMP因其疗效确切、毒副作用低等特点受到广泛赞誉.然而,目前关于TMP是否可用于治疗转移性宫颈癌以及其是否通过AK T/G S K 信号通路抑制宫颈癌的上皮间质转化(EMT)和侵袭转移等重要问题尚无定论,且未有相关文
15、献报道.因此,本研究 旨 在 利 用 细 胞 分 子 生 物 学 技 术 方 法,以P I K/AK T/G S K 信号通路成员为主要观察指标,对TMP在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用进行分析探讨,为其作用分子机制的阐明提供数据支持.材料与方法细胞和主要试剂人宫颈鳞癌细胞系S i H a细胞购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库,用含 胎牛血清的R PM I 培养基培养于 ,C O的常规培养箱.川芎嗪注射液(北京市燕京药业有限公司生产);R PM I 培养基、胰蛋白酶、胎牛血清及细胞裂解液均购自北京索莱宝科技有限公司;G S K 单抗(a b ),p G S K S e r 多 抗
16、(a b ),AK T多抗()购自美国S A B公司;p AK T()多抗购自中国上海细胞信息技术有限公司;P I K单 抗(A b ),N c a d h e r i n单 抗(A b ),V i m e n t i n单抗(A b ),E c a d h e r i n单抗(A b ),基 质 金 属 蛋 白 酶(MMP)多 抗(A b ),MMP(A b ),MMP 多 抗(A b ),C a t e n i n多抗(A b )及 a c t i n多抗(A P)均购自艾博抗(上海)贸易有限公司;辣根过氧化物酶(HR P)标记的山羊抗兔I g G购自北京中杉金桥生物技术有限公司;M a
17、t r i g e l基质胶,T r a n s w e l l小室(m)购自美国C o r n i n g公司.C C K 试剂购自上海东仁化学科技有限公司.C C K 法检测细胞增殖能力用胰蛋白酶消化处于对数生长期的S i H a细胞,并用培养基稀释调整细胞浓度,以获得细胞密度约为 个m L的S i H a单细胞悬液.于 孔板中每孔接种 L单细胞悬液,每组设个复孔.经过夜贴壁后,吸出旧培养基,置换成含不同质量浓 度TMP(、和 m gm L)的培养基,培养、和 h.从第天开始,在固定时间点,每隔 h取块 孔板,将孔内替换为含 LC C K 溶液的新培养基 L,孵育h.测定其在波长 n m处
18、的吸光度值(O D),计算TMP对S i H a细胞的生长抑制率,实验重复次.T r a n s w e l l法检测侵袭迁移能力将处于对数期的S i H a细胞用无血清培养基饥饿处理 h,再用含 乙二胺四乙酸的胰酶消化,制成密度为 个m L的单细胞悬液.细胞迁移实验:在T r a n s w e l l小室的上室内加入 L单 细 胞 悬 液,孔 板 中 的 下 室 加 入 L含 不 同 浓 度TMP(、和 m gm L)的完全培养基.培养 h后收集小室,用棉签擦去上室细胞,用磷酸盐缓冲液清洗次后用多聚甲醛固定液固定细胞 m i n,晾干后用结晶紫溶液染色 m i n,再用磷酸盐缓冲液洗涤次.
19、在倒置显微镜下观察并使用图像采集南昌大学学报(医学版)年月,第 卷第期系统选取上、中、下、左、右个视野于 倍镜下进行拍照和计数,求出各组穿膜细胞的平均数,实验重复次.细胞侵袭实验:先将无血清R PM I 基础培养基与M a t r i g e l胶按比例混合均匀后,取 L铺在事先预冷()的T r a n s w e l l工作小室中,置 孔板中 过夜.第天加入细胞,后续操作与T r a n s w e l l小室迁移实验相同.实验重复次.蛋白免疫印迹检测蛋白表达收集经TMP(、和 m gm L)处理 h的S i H a细胞,在冰上用细胞裂解液裂解,下 rm i n离心 m i n,取上清液,使
20、用P i e r c eB C AP r o t e i n A s s a y K i t试剂盒测定蛋白浓度.按 g蛋白上样量将蛋白样品与上样缓冲液()按的体积比例混合,沸水中处理m i n,冷却后上样.经 S D S P AG E凝胶电泳后,转移至聚偏二氟乙烯膜上.脱脂奶粉封闭h后,分别加入P I K、AK T、G S K 、E c a d h e r i n、V i m e n t i n和 c a t e n i n等抗体,在 冰箱内孵育过夜.第天在室温下加入二抗再孵育h.用E C L化学发光法显色,X线胶片曝光成像,扫描仪扫描蛋白条带.实验重复次.统计学方法采用S P S S 软件进
21、行数据分析.实验结果以平均值标准差(xs)表示,比较采用双尾配对t检验,以P 为差异有统计学意义.结果TMP抑制S i H a细胞增殖在 m gm L的浓度范围内,TMP对S i H a细胞增殖表现出明显的抑制作用(P 或P),且抑制作用效果随着TMP浓度增加和处理时间延长而增强.见表.表TM P抑制S i H a细胞增殖xs,nTMP浓度/(m gm L)抑制率/h h h P,P 与同处理时间的 m gm LTMP处理组比较.TMP抑制S i H a细胞侵袭和迁移在 m gm L的浓度范围内,TMP对S i H a细胞的迁移和侵袭表现出明显的抑制作用.随着TMP浓度的增大,穿膜的S i H
22、 a细胞数量明显逐渐减少(P 或P).见图.02.001.000.500.25TMP浓度/(mgmL-1)TMP浓度/(mgmL-1)2001501005001.000.500.2502.00*平均侵袭细胞数/个TMP浓度/(mgmL-1)1501005001.000.500.2502.00*平均迁移细胞数/个*P,P 与m gmLTMP处理组比较.图T MP抑制S i H a细胞侵袭和迁移付宏伟等:川芎嗪对宫颈癌细胞增殖和侵袭转移的抑制作用及分子机制TMP影响S i H a细胞EMT相关蛋白表达与m gm LTMP处理组相比,、和 m gm LTMP处理组S i H a细胞内E C a d
23、h e r i n蛋白表达量均显著上调,而N C a d h e r i n和V i m e n t i n蛋白水平均显著下降(P 或P).见图.02.001.000.500.25E-cadherinVimentinN-cadherin-actinTMP浓度/(mgmL-1)110 kD54 kD100 kD43 kDTMP浓度/(mgmL-1)1.000.500.2502.00*相对表达水平*1.00.80.60.40.20.0*E-cadherinVimentinN-cadherinP,P 与m gm LTMP处理组比较.图T MP影响S i H a细胞EMT相关蛋白表达TMP影响S i
24、H a细胞MMP s表达与m gm LTMP处理组相比,、和 m gm LTMP处 理 组MMP,MMP 和MMP 的表达水平均显著下降(P 或P).见图.02.001.000.500.25MMP2MMP7MMP9-actinTMP浓度/(mgmL-1)72 kD28 kD92 kD43 kDTMP浓度/(mgmL-1)1.000.500.2502.00*相对表达水平*1.51.00.50.0*MMP2MMP7MMP9P,P 与m gm LTMP处理组比较.图T MP影响S i H a细胞基质金属蛋白酶表达TMZ影响S i H a细胞P I K/A K T/G S K 信号通路相关蛋白表达与m
25、 gm LTMP处理组相比,、和 m gm LTMP处理组S i H a细胞中p G S K 水平均明显升高(P 或P),、和 m gm LTMP处理组P I K和p AK T水平亦明显升高(P 或P);而、和 m gm LTMP处理组AK T水平显著下降(P 或P),、和 m gm LTMP处理组G S K 和 c a t e n i n水平亦显著下降(P 或P).见图.02.001.000.500.25EPI3KAKTp-AKTGSK-3P-gsk-3-catenin-actinTMP浓度/(mgmL-1)54 kD60 kD60 kD46 kD47 kD94 kD43 kDTMP浓度/(
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 川芎 宫颈癌 细胞 增殖 侵袭 转移 抑制 作用 分子 机制
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。