达雷妥尤单抗对凝聚胺技术检出IgG抗D抗体的影响.pdf
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1、临床输血与检验2023年10月第25卷第5期625论著达雷妥尤单抗对凝聚胺技术检出IgG抗D抗体的影响刘慧 卓海龙 骆群解放军总医院第五医学中心输血医学科,北京 100071DOI:10.3969/j.issn.1671-2587.2023.05.008作者简介:刘慧,主要从事临床输血研究,(E-mail)。通信作者:骆群,主要从事免疫血液学、重症疑难患者输血、治疗性单采及全血置换术等研究,(E-mail)。【摘要】目的 观察达雷妥尤单抗对凝聚胺技术检出IgG类抗D抗体的影响。方法 选取10份AB型RhD阳性、不规则抗体筛查阴性的血浆样本,将每份标本各分装2 mL于3个试管中,分为3组,抗筛阴
2、性对照组不做任何处理;加入IgG类抗D抗体的作为抗筛阳性对照组;加入达雷妥尤单抗(400 mg/20 mL)和IgG抗D试剂作为实验组。使用微柱凝胶卡法和凝聚胺法分别进行不规则抗体筛查试验,观察IgG抗D抗体的检出。结果 微柱凝胶卡法的抗体筛查试验结果显示:实验组(23.801.40)与阳性对照组(18.801.40)评分比较,差异有统计学意义(P0.05);凝聚胺法的抗体筛查试验结果显示:实验组(14.802.53)与阳性对照组(14.802.53)评分比较,无统计学意义(P0.05);且倍比稀释后实验组凝聚胺法对IgG抗D的检出下限同阳性对照组一致(164)。结论 达雷妥尤单抗对凝聚胺法检
3、出IgG类抗D抗体无影响,达雷妥尤单抗对微柱凝胶卡法检出IgG类抗D抗体有影响。【关键词】达雷妥尤单抗 同种抗体 凝聚胺技术 【中图分类号】R457 【文献标识码】A 【文章编号】1671-2587(2023)05-0625-06Daratumomab Interference in Polybrene Test Due to IgG Anti-D Antibody LIU Hui,ZHUO Hailong,LUO Qun.The Fifth Medical Center of the General Hospital of the Peoples Liberation Army,Beijin
4、g 100071【Abstract】Objective To observe the effect of Daratumomab on detection of IgG anti-D antibody by polybrene test.Methods Ten plasma samples with AB RhD positive blood type and negative irregular antibody screening were selected,and each sample was divided into 3 groups by 2 mL in 3 tubes.Any s
5、ubstance was added in the antibody screening negative control group.IgG anti-D antibody was added in the antibody screening positive control group.Daretozumab(400 mg/20 mL)and IgG anti-D reagent were added in the experimental group.The irregular antibody screening test was performed by microcolumn g
6、el card test and polybrene test to identify IgG anti-D antibody.Results There was significant difference between the experimental group(23.801.40)and the positive control group(18.801.40)by microcolumn gel card test(P0.05).There was no significant difference between the experimental group(14.802.53)
7、and the positive control group(14.802.53)by polybrene test(P0.05).The lower limit of detection of IgG anti-D in the experimental group by polybrene test after dilution was the same result as that in the positive control group(164).Conclusion Daretozumab has no effect on the detection of IgG anti D a
8、ntibody by polybrene test,but has effect by the microcolumn gel card test.【Key words】Daratumomab Alloantibody Polybrene technique多发性骨髓瘤(MM)是由克隆浆细胞异常增殖引起的恶性血液病,目前尚无法治愈1,此类患者经常因贫血需要输血。自1975年单克隆抗体(以下简称单抗)技术诞生以来,抗体工程技术飞速发展,抗体药物以其特异性高、半衰期长、不良反应少等特点,在治疗多发性骨髓瘤等疾病上取得了令人瞩目的临床疗效,但由于某些抗体(如CD38单抗和CD47单抗)的作用靶点不仅
9、在肿瘤细胞上表达,也在红细胞上表达,故可能会对相关输血相容性检测产生干扰,掩盖其他的同种异体抗体,进而导致临床输血困难或延迟2。因此应用CD38单抗治疗的患者紧急输血时,输血的安全性及有效性尤为重要,如何快速及准确地为患者发放血液,是目前面临的最大问题。目前国内常用的克服CD38单抗干扰输血相容性检测的方法是凝聚胺技术,及使用巯基还原剂二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)或2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-Me)处理红细胞2。国际上最常用的消除CD38单抗干扰的方法是DTT处理红细胞3。然而我国巯基试剂并不是输血检测的常用试剂,且巯基试剂处理红细胞,耗时长,步
10、骤繁琐,对于需要紧急输血的患者,不能及时供应血液。巯基试剂除了使CD38抗原失活外,还可通过裂解血型抗原 J Clin Transfus Lab Med,October.2023,Vol 25,No.5626的二硫键来减弱或破坏某些抗原,如Kell血型系统、Knops血型系统的大部分抗体、抗-LWa、抗-Yt、抗-Do、抗Gya、抗Hy、抗Joa等对巯基试剂敏感的红细胞抗原,且巯基试剂具有一定的毒性,长时间接触皮肤可致癌,高浓度巯基有催眠麻痹神经的作用,故使用巯基试剂破坏抗体时一定要做好防护措施4-5。因此,使用巯基试剂处理红细胞仍存在许多缺点,为了克服达雷妥尤单抗对输血相容性检测的干扰,我们
11、需要一种更加方便快速且对人体危害小的方法。凝聚胺技术是一种不完全抗体检验方法,具有成本低,操作简便快速、灵敏度高等特点。凝聚胺法对CD38单抗药物致敏的红细胞所产生的特异性反应不敏感,原理为CD38分子为型跨膜糖蛋白,是羧基位于细胞膜外的膜蛋白,在低离子环境下极易与凝聚胺分子结合,从而减少了CD38分子与CD38单抗特异性结合的机会。因此,凝聚胺技术在临床输血检验中具有较大应用优势6-7。在临床患者需要紧急输血时,为了消除达雷妥尤单抗的干扰,凝聚胺技术就显得尤为重要,但达雷妥尤单抗对凝聚胺技术检出IgG抗D抗体是否存在干扰还有待进一步研究。本文将加入商品化的IgG抗D抗体的样本作为阳性对照组;
12、加入IgG抗D抗体和达雷妥尤单抗的样本作为实验组;不加入IgG抗D抗体和达雷妥尤单抗的样本作为阴性对照组,将三组样本分别用微柱凝胶卡法和凝聚胺法进行抗体筛查试验,观察达雷妥尤单抗对凝聚胺法检出IgG类抗D抗体的影响。材料与方法1 标本来源由解放军总医院第五医学中心输血医学科提供的AB型Rh(D)阳性、不规则抗体筛查试验阴性的血浆标本10份,患者均为男性健康献血者。均已征得患者知情同意。2 试剂与仪器凝聚胺介质试剂(珠海贝索生物技术有限公司);抗D(IgG)血型定型试剂(上海血液生物医药有限责任公司);达雷妥尤单抗注射液(兆珂,注册证号S20190030,生产厂家 Cilag AG,规格 400
13、 mg/20 mL);红细胞血型技术筛选细胞(微柱凝胶法)(盖立复诊断股份公司);血型分析用稀释液(盖立复诊断股份公司);AB型阳性血浆(解放军总医学第五医学中心输血医学科);抗人球蛋白检测卡(微柱凝胶法)(盖立复诊断股份公司);离心机DG-SPIN(GRIFOLS);孵育机DG-THERM(GRIFOLS);离心机KA-2200(北京东讯天地医疗仪器有限公司)。3 方法3.1 实验分组选取10人份AB型RhD阳性、不规则抗体筛查试验阴性的血浆标本,将每份标本各分装2 mL于3个试管中,分为3组,即阴性对照组、阳性对照组和实验组。不加入IgG抗D和达雷妥尤单抗的为阴性对照组;加入20 L商品化
14、的IgG抗D抗体作为阳性对照组;加入20 LIgG抗D抗体和20 L达雷妥尤单抗作为实验组。3.2 达雷妥尤单抗浓度的推算成人在使用达雷妥尤单抗治疗时,用药剂量为16 mg/kg,模拟人体用药,在2 mL血浆样本中加入20 L达雷妥尤单抗注射液,推算实验组样本中达雷妥尤单抗的浓度。3.3 不规则抗体筛查试验分别用微柱凝胶卡法和凝聚胺法进行不规则抗体筛查试验。微柱凝胶卡法:在抗人球蛋白检测卡相应的微孔管中加入50 L抗体筛查的红细胞反应液,加入25 L血浆样本,37 孵育15 min,使用DG专用离心机离心并读取结果;凝聚胺法:取试管3支,各加被检血浆样本2滴,分别加入3%5%抗体筛检红细胞1滴
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