不同饲喂方式下发酵饲料对蛋鸡生产性能、肠道形态及其菌群的影响.pdf
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1、NO.202023饲料研究FEEDRESEARCH35禽营养不同饲喂方式下发酵饲料对蛋鸡生产性能、肠道形态及其菌群的影响李悦伊1李春1刘巍廖莹1李李家明1张文辉1沈水宝*卢丽枝?(1.广西大学动物科学技术学院,广西南宁5340 0 0;2.广西壮族自治区畜牧站,广西南宁530 0 2 2)摘要:试验旨在研究不同饲喂方式下发酵饲料对2 3周龄蛋鸡生产性能、肠道形态以及菌群的影响,以探讨发酵饲料在蛋鸡生产中适宜的饲喂方式。选取广西麻鸡蛋鸡48 0 羽,随机分为4组,每组6 个重复,每个重复20只鸡。对照组(con组)鸡饲喂基础饲粮;试验组鸡为间歇性饲喂(以周为单位),G1组鸡全期饲喂发酵饲料;G2
2、组鸡5d饲喂发酵饲料,2 d饲喂基础日粮;G3组2 d饲喂发酵饲料,5d饲喂基础日粮。预试期7 d,正式试验期56 d。结果显示,1 8 W,G 1组蛋鸡合格蛋率极显著高于其他各组(P0.01),1 4w 平均蛋重均极显著高于其他各组(P0.01)。G 2 组蛋鸡空肠绒毛高度极显著高于各组(P0.01),空肠绒毛高度/隐窝深度极显著高于con组(P0.01);G 3组蛋鸡空肠隐窝深度以及G1组蛋鸡的回肠隐窝深度均极显著低于con组(P 0.0 1),G 1组蛋鸡十二指肠和回肠绒毛高度/隐窝深度均显著高于con组(P 0.0 5)。与con组相比,试验组蛋鸡菌群相对丰富度在属水平上具有显著差异(
3、P0.05),同时与生产性能存在一定的相关性。研究表明,不同饲喂方式下发酵饲料对蛋鸡肠道形态以及菌群的相对丰富度具有不同程度的影响,进而影响其生产性能,建议全期饲喂发酵饲料。关键词:蛋鸡;饲喂方式;生产性能;肠道形态;肠道菌群中图分类号:S831文献标识码:A文章编号:10 0 2-2 8 13(2 0 2 3)2 0-0 0 35-0 6Doi:10.13557/ki.issn1002-2813.2023.20.007Effect of different feeding methods of fermented feedon production performance,intestina
4、l morphology and microflora in laying hensLI Yue-yiLIChunLIUWeiLIAOYingLI Jia-mingZHANGWen-huiSHEN Shui-baoLU Li-zhiAbstract:The purpose of the experiment was to study the effect of different feeding methods on production performance,intestinal morphology and microflora of 23-week-old laying hens,an
5、d to explore the appropriate feeding methods offermented feed in laying hens.A total of 480 laying hens were randomly divided into four groups with six replicates pergroup and 20 hens per replicate.Hens in control group(con group)were fed with basal diet.The experimental group wasfed intermittently(
6、weekly),and the Gl group was fed with fermented diet for the whole period.Hens in G2 group werefed with fermented diet for 5 d and basal diet for 2 d.Hens in G3 group were fed fermented diet for 2 d and basal diet for5 d.The pre-test lasted for 7 d and the formal test lasted for 56 d.The results sho
7、wed that the qualified egg rate inGl group was extremely higher than that in other groups during the experiment 58 w(P0.01),and the average eggweight in 14 w was extremely higher than that in other groups(P0.01).The villus height of jejunum in G2 group wasextremely higher than that in all groups(P0.
8、01),and the villus/cryptic jejunum in con group was extremely higher thanthat in con group(P0.01).The crypt depth of jejunum of laying hens in G3 group and ileum crypt depth of laying hens inGl group were extremely lower than con group(P0.01),and duodenum and ileum wool/crypt of laying hens in Gl gr
9、oupwere significantly higher than those in con group(P0.05).Compared with con group,therelative flora richness of laying hens in experimentalgroups was significantly different at genus level(P0.05),and had a certain correlation with productionperformance.The study indicates that different feedingNO.
10、202023饲料研究FEEDRESEARCH36禽营养methods has different effect on intestinal morphology and relative abundance of flora of laying hens,and then affectedtheir production performance,it is recommended to feed fermented feed throughout the whole period.Key words:laying hens;feeding method;production performan
11、ce;intestinal morphology;intestinal flora由于饲料原料价格上涨,寻找促进畜禽生产以及研发使用地源性饲料刻不容缓。发酵可提高粗蛋白水平、降低粗纤维水平。发酵饲料可将饲料中的多糖、抗营养因子(ANF)等不易被畜禽机体消化吸收的物质分解和转化为可被消化吸收利用的物质,提高营养生物利用率,能降低饲料成本,改善饲料的营养价值-2 1。研究表明,发酵饲料可提高肉鸡的平均日增重以及饲料转化率3。近年来,饲喂方式对动物机体健康的研究正逐步增多,DeLa Guardia-Hidrogo等4发现,摄食频率可以使奶牛的瘤胃微生物菌群产生昼夜波动。进食速率也会影响育肥猪的采食量
12、和生长性能,从而影响嗣体品质5。饲喂频率对猪的采食量以及氮素利用也有影响。也有研究显示,不同饲喂方式对羊的采食量、体重、日增重等生长性能以及营养物质的消化率具有影响7-8 。不同饲喂方式饲喂乳酸菌对肉鸡的料重比、肠道形态及菌群也具有显著影响。因此,饲喂方式以及饲喂频率的改变可能会影响动物的养分摄入方式,进而影响机体对蛋白质、脂质等养分的消化、吸收、利用4)。发酵饲料的研究多以不同浓度梯度相同方式饲喂蛋鸡,不同饲喂方式对蛋鸡机体健康是否存在影响的研究较少。研究表明,家禽饲喂6%以上的发酵饲料可以改善肠道形态,改变肠道菌群组成,提高菌群群丰富度,进而改善肠道健康,提高生产性能10-12 。本试验添
13、加10%的发酵饲料,研究不同饲喂方式对蛋鸡的生产性能、肠道形态以及微生物菌群的影响,为发酵饲料在蛋鸡养殖中的应用提供新的饲喂思路1材料与方法1.1试验设计与饲养管理试验在广西富凤蛋鸡场进行。选取2 3周龄广西麻鸡蛋鸡48 0 羽,随机分为4组,每组6 个重复,每个重复20羽。对照组(con组)蛋鸡饲喂基础饲粮;试验组为间歇性饲喂(以周为单位),G1组全期饲喂发酵饲料;G2组5d饲喂发酵饲料,2 d饲喂基础日粮;G3组2 d饲喂发酵饲料,5d饲喂基础日粮。预试期7 d,正式试验期56 d。蛋鸡自由采食,充足饮水,按正常免疫程序进行免疫接种。三层阶梯笼养,同处理组在上、中、下三层均匀分布。乳头饮水
14、器自由饮水,自由采食,室温为2 2 25;光照周期16 h/d。饲养期间定期消毒并保持舍内自然通风。1.2试验日粮基础饲粮参照NRC(19 9 6)标准与生产实践需要配制的粉状配合饲料,基础饲粮组成及营养水平见表1。发酵饲料复合益生菌菌粉购自山东某生物工程公司,以玉米、豆粕、棉粕、麸皮等饲料原料作为发酵底物,将复合益生菌(枯草芽孢杆菌2 10 CFU/g、乳酸杆菌110CFU/g、酵母菌活菌数410 CFU/g)按发酵底物的0.2%添加,将混合好的原料和发酵菌液充分混匀,装入发酵罐中,37 下进行发酵,发酵7 2 h左右。发酵完成后将饲料取出进行干燥,以控制水分含量为12%14%,包装,贮存,
15、以便后续使用(由广西某农牧饲料有限公司提供)。饲料发酵前后的营养水平见表2。表1基础饲粮组成及营养水平(风干基础)原料组成含量/%营养水平玉米61.25代谢能/(MJ/kg)13.98豆25.00粗蛋白/%16.20小麦麸2.50粗纤维/%4.05石粉7.25钙/%1.42磷酸氢钙1.40磷/%0.38赖氨酸0.20蛋氨酸0.10食盐0.30预混料2.00合计100.00注:1.预混料为每千克饲粮提供:VA8000IU、VB,4mg、VB,3.6 mg、VB,40mg、VB。4m g、VB12 0.0 2 m g、VD,30 0 0 IU、VE2 0 IU、VK,2 m g、生物素0.15mg
16、、叶酸1.0 mg、D-泛酸1lmg、烟酸10mg、抗氧化剂10 0 mg、Cu 10 mg、Fe 8 0 mg、M n 8 0 mg、Zn 75 mg、1 0.40 mg、Se 0.30 mg。2.营养水平均为实测值。表2 饲料发酵前后营养水平(风干基础)单位:%项目发酵前发酵后pH值5.98 0.694.32 0.38粗蛋白质16.20 6.8716.32 5.23粗纤维4.05 0.023.98 0.02钙1.42 0.021.38 0.01磷0.38 0.010.40 0.01赖氨酸0.28 0.030.29 0.01蛋氨酸0.19 0.050.21 0.021.3测定指标及方法1.3
17、.1生产性能试验期间每天记录蛋鸡产蛋数量、总蛋重、不合格蛋数等,计算各组的产蛋率、平均蛋重、合格蛋率、料蛋比产蛋率=总产蛋数/(鸡数天数)10 0%(1)平均蛋重=总蛋重/总产蛋数(2)平均日采食量=总采食量/(鸡数天数)(3)料蛋比=总采食量/总蛋重(4)蛋合格率=合格蛋数/产蛋数10 0%(5)NO.20.2023饲料研究FEEDRESEARCH禽营养色1.3.2肠道形态试验结束前,蛋鸡空腹12 h,每个重复选取1只体况接近的蛋鸡,选取每个肠段同一位置的十二指肠、空肠、回肠各1cm左右,生理盐水冲洗,常温固定保存在4%多聚甲醛中,进行切片制作,苏木精-伊红(HE)染色,显微镜镜检,测定绒毛
18、长度以及隐窝深度,计算绒毛长度/隐窝深度(V/C)值。1.3.3盲肠菌群16 SrRNA测定试验结束前,蛋鸡空腹12 h,每个重复选取1只体况接近的蛋鸡,采用无菌的冻存管收取盲肠内容物并放入液氮中进行冻存。使用保存好的盲肠样品中内容物,根据Qiagen试剂盒提取DNA;利用ThermoNanoDrop2000紫外微量分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳进行总DNA质检;选择V3-V4区,用通用引物为F341和R806设计并合成引物并进行PCR扩增和产物的纯化,使用Qubit进行文库定量,并根据每个样品的数据量要求,进行相应比例的混合;使用IlluminaMiseq平台进行上机测序(送样至上海美吉生物
19、有限公司委托测序),通过其云平台进行生物信息学分析。1.4数据统计与分析采用SPSS24.0统计软件进行单因素方差分析,采用LSD法和SNK法进行多重比较。结果以“平均值标准差”表示,P0.05表示差异显著,P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1不同饲喂方式下发酵饲料对蛋鸡生产性能的影响(见表3)表3不同饲喂方式下发酵饲料对蛋鸡生产性能的影响项目时间/Wcon组G1组G2组G3组P值14117.67 8.45118.29 6.44117.35 10.71117.83 10.710.455平均日采食量/g/(只d)58120.07 8.45121.29 7.34121.35 8.65121
20、.32 11.340.2271474.69 5.2676.15 5.1574.85 6.2873.29 4.180.337产蛋率/%5873.19 4.7574.93 4.3473.94 3.2473.55 4.130.5661447.21 0.62B47.83 0.68446.97 0.82B46.91 1.05B0.001平均蛋重/(g/枚)5848.05 0.6849.51 0.7148.58 2.1947.90 3.530.0841497.49 1.56B98.04 1.58496.72 1.60B96.60 1.6480.009合格蛋率/%5896.45 2.91B98.20 1.3
21、6496.95 0.87B95.95 2.67B0.004142.76 0.282.71 0.312.81 0.332.87 0.310.390料蛋比583.36 0.443.23 0.213.35 0.223.43 0.320.549注:同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P0.05),不同大写字母表示差异极显著(P0.05);表4与此同。由表3可知,5 8 W,G 1组合格蛋率极显著高于其他各组(P0.01),1 4w 平均蛋重均极显著高于其他各组(P0.05)。与con组相比,5 8 w,G 1组、G2组平均蛋重分别提高了3.0 4%、1.10%(P0.05)。2.2不同饲喂方式下发酵
22、饲料对蛋鸡肠道形态的影响(见表4)(见表4)由表4可知,G2组蛋鸡空肠绒毛高度极显著高于其他组(P0.01),空肠绒毛高度/隐窝深度极显著高于con组(P0.01);G 3组蛋鸡空肠隐窝深度以及G1组蛋鸡的回肠隐窝深度均极显著低于con组(P0.01),G 1组蛋鸡十二指肠和回肠绒毛高度/隐窝深度均显著高于con组(P0.05)。表4不同饲喂方式下发酵饲料对蛋鸡肠道形态的影响项目con组G1组G2组G3组P值十二指肠绒毛高度/um1285.32 78.651352.68 68.541 342.25 112.051 293.17 109.850.058隐窝深度/m260.26 13.25230.
23、12 12.85220.56 15.85236.58 18.980.170绒毛高度/隐窝深度5.98 0.51b7.62 0.6.3a5.68 0.93b6.71 0.58a0.013空肠绒毛高度/m1 071.87 68.71B1 112.61 80.50B1614.57 72.47A1 094.57 299.99B0.001隐窝深度/m182.64 9.17A183.17 11.084169.74 12.21AB153.18 21.24B0.001绒毛高度/隐窝深度5.88 0.47B6.10 0.754B9.52 0.51A7.13 1.64AB0.001回肠绒毛高度/m951.87 4
24、6.15923.3674.35873.80 54.78932.83 148.560.058隐窝深度/m160.07 14.71A125.98 9.32B154.30 17.01A138.87 17.44B0.05)表5不同饲喂方式下发酵饲料对蛋鸡肠道菌群多样性的影响项目覆盖率/%Sobs指数Shannon指数Simpson指数Ace指数Chao指数con组99.99 0.0515.00 1.411.01 0.170.46 0.0516.69 1.4715.25 0.95G1组100.00 0.0315.75 0.500.97 0.120.47 0.0316.21 0.2515.83 0.33G
25、2组100.00 0.0314.75 0.950.89 0.070.52 0.0115.24 0.7314.87 0.85G3组100.00 0.0415.00 0.000.92 0.020.46 0.0515.46 0.6515.12 0.25P值0.7980.4490.5180.1660.1380.2772.3.2OTU比较结果(见图1)由图1可知,con组、G1组、G2组、G3组的OTUs个数分别是8 0 2、9 0 5、8 6 0、8 7 9 个。从相交程度来看,4组共有6 7 6 个相同的OTUs,c o n 组、G1组、G2组、G3组特有的OTUs为8、34、13、19 个。G1组
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