Testin基因对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响.pdf
《Testin基因对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《Testin基因对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响.pdf(5页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、肿瘤防治研究2023年第50卷第8期 CancerResPrevTreat,2023,Vol.50,No.8767doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2023.22.1341Testin基因对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响钟准1,费永光2Effect of Testin Gene on Radiosensitivity of Nasopharyngeal Cancer 5-8F CellsZHONGZhun1,FEIYongguang21.Department of Otolaryngology,Hubei NO.3 Peoples Hospital of
2、Jianghan University,Wuhan 430033,China;2.Department of Otolaryngology,Xinzhou District Peoples Hospital,Wuhan 431400,ChinaCorresponding Author:FEI Yongguang,E-mail:Abstract:Objective ToinvestigatetheeffectofTESgeneontheradiosensitivityofnasopharyngealcarcinoma5-8Fcells.Methods Specimensof5-8Fcells(u
3、nprocessedgroup)and5-8FcellswithhighTESexpression(TESgroup)wereirradiatedat0,2,4,6,and8Gyradiationdosepoints.Cellcloneformationexperimentwasconductedtodrawthesurvivalcurve.Twenty-fourBALB/cnudemicewererandomlydividedintofourgroups:nontransfectiongroup,TESgroup,irradiationgroup,andTESirradiationgroup
4、.Anudemousemodelofnasopharyngealcarcinoma5-8Fcellswasestablished.Thelengthanddiameterofthetransplantedtumorweremeasuredeverythreedays,thetumorvolumewascalculated,andthegrowthcurveofthetransplantedtumorwasdrawn.Afterthemicewerekilledonemonthlater,thetumorblockwastakenand weighed.The apoptosis of the
5、transplanted tumor cells in each group was detected by flow cytometry.Results Comparedwiththatintheunprocessedgroup,thesurvivalrateofcellsintheTESgroupwassignificantlylower(P0.01).Thetumorgrowthrateandtumormassofallfourgroupsdecreasedinturn,whiletheapoptosisrateincreasedinturn.TheTESirradiationgroup
6、hadtheslowesttumorgrowthrate,greatestdecreaseintumorweight,andhighestapoptosisrateamongthefourgroups.Multiplecomparisonrevealed statistically significant differences between the groups(P0.05).Conclusion Thetestingenecaneffectivelyimprovetheradiosensitivityofnasopharyngealcarcinoma5-8Fcellsculturedin
7、 vitro.Key words:Testingene;Nasopharyngealcarcinoma;RadiosensitivityFunding:WuhanHealthResearchFundSupportedProject(No.WX19Y02)Competing interests:Theauthorsdeclarethattheyhavenocompetinginterests.摘 要:目的 探讨Testin基因(TES)对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响。方法 将鼻咽癌5-8F细胞分为两组:未转染组(正常的5-8F细胞)和TES组(高表达TES的5-8F细胞),经过0
8、、2、4、6、8Gy放射剂量点照射后,进行细胞克隆形成实验,绘制生存曲线。为建立鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤模型,将24只BALB/cNude裸鼠随机均分为四组:未转染组(注射5-8F细胞液)、TES组(注射高表达TES的5-8F细胞液)、照射组(注射5-8F细胞液+局部照射)、TES照射组(注射高表达TES的5-8F细胞液+局部照射),每隔3天测量移植瘤长短直径,计算肿瘤体积并绘制移植瘤生长曲线,1月后处死小鼠,取肿瘤块称质量,流式细胞仪检测各组移植瘤中细胞凋亡情况。结果 与未转染组比较,TES组细胞的存活率明显降低(P0.01)。未转染组、TES组、照射组、TES照射组瘤体生长速度依次减慢
9、、瘤体质量依收稿日期:2022-11-14;修回日期:2023-05-30基金项目:武汉市卫生健康委科研基金资助项目(WX19Y02)作者单位:1.430033武汉,江汉大学附属湖北省第三人民医院耳鼻咽喉科;2.431400武汉,武汉市新洲区人民医院耳鼻咽喉科通信作者:费永光(1974-),男,本科,副主任医师,主要从事耳鼻喉科相关专业临床研究,E-mail:,ORCID:0009-0007-8769-9465作者简介:钟准(1984-),男,硕士,副主任医师,主要从事头颈部肿瘤的诊断和治疗工作,ORCID:0009-0004-2612-0382基础研究次降低、细胞凋亡率依次增加。以TES照射
10、组瘤体生长速度最慢、质量下降最大、细胞凋亡率最高,组间多重比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Testin基因能有效提高体外培养的鼻咽癌5-8F细胞的放疗敏感性。关键词:Testin基因;鼻咽癌;放疗敏感性中图分类号:R739.63开放科学(资源服务)标识码(OSID):肿瘤防治研究2023年第50卷第8期 CancerResPrevTreat,2023,Vol.50,No.87680 引言鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞放疗敏感性差是影响患者复发和生存率下降的重要因素1。大量文献报道NPC的放疗敏感性与肿瘤细胞内的基因表达有关,研究显示,MIIP、
11、SALL4、B7-H3、miRNA-381等基因可用于增加肿瘤的放疗效果2-5。Testin基因(TES)为目前研究发现的一重要抑癌基因,TES基因在鼻咽癌的发生和发展中产生何种作用、是否能调控鼻咽癌细胞的放疗敏感性等问题,一直备受关注。本课题组前期研究发现,过表达TES基因可明显抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖和迁移能力,并增加肿瘤细胞的放射敏感性6-7。因此,本次研究主要利用转染了TES的细胞,建立裸鼠移植瘤模型,从体外动物水平观察TES对鼻咽癌5-8F细胞移植瘤放疗敏感性的影响,探索TES在鼻咽癌治疗中的作用机制。1 材料与方法1.1 主要材料鼻咽癌5-8F细胞系、TES重组表达质粒均由武汉
12、大学中南医院实验室提供;胎牛血清购自美国Gibco公司;直线加速器购自德国SIEMENS股份公司;BALB/c裸小鼠,SPF级,鼠龄58周,体质量(1820)g,在武汉大学实验动物中心无特殊病原菌条件下分笼饲养。1.2 方法1.2.1 细胞培养与转染 选择生长状态良好的鼻咽癌5-8F细胞用于实验,将实验细胞分为两组:未转染组:未转染的5-8F细胞组;TES组:转染了高表达TES的5-8F细胞组。按照常规程序进行转染,构建高表达TES的5-8F细胞系(5-8F-pEG-FP-N1-TES),并应用Westernblot实验进行评估和鉴定。1.2.2 细胞进行射线照射 将未转染组和TES组进行射线
13、照射,照射设备为Varian2100C直线加速器,吸收剂量率400cGy/min,放射野为10cm10cm,距离100cm,辐射剂量分别为2、4、6、8Gy。1.2.3 细胞克隆形成实验 常规培养下,分别将未转染组和TES组细胞暴露于不同剂量下(2、4、6、8Gy)进行照射,照射完成后进行细胞培养10d,去上清液、固定、洗涤晾干,计算克隆数。采用GraphPrism6.0软件,Linear-quadratic模型计算拟合剂量生存曲线。1.2.4 裸鼠移植瘤模型建立 取对数生长期的未转染组和TES组细胞,经胰蛋白酶消化后,制备单细胞悬液,用1PBS洗涤细胞3次,计数并用PBS重悬、调整细胞密度为
14、4107/ml。用1ml注射器抽取两组瘤细胞悬液分别接种于裸鼠一侧背部皮下,每个接种部位0.1ml,含活细胞数4106个。接种一周左右开始成瘤。1.2.5 放疗条件及实验分组 取注射瘤细胞悬液的裸鼠用直线加速器进行局部照射肿瘤,每次照射剂量为6Gy,每三天照射一次,总剂量为18Gy。根据是否经历局部照射,将成瘤裸鼠分为四组:未转染组:注射5-8F细胞液;TES组:注射高表达TES的5-8F细胞液;照射组:注射5-8F细胞液的成瘤小鼠经过局部照射;TES照射组:注射高表达TES的5-8F细胞的成瘤小鼠经过局部照射。1.2.6 移植瘤生长情况 接种一周左右开始成瘤实验,每隔3天测量移植瘤裸鼠体质量
15、,游标卡尺测量肿瘤最长直径(a)及最短直径(b),按照公式V=ab2/2计算移植瘤体积并绘制生长曲线。接种一月后,处死小鼠,获取肿瘤组织,称重后计算抑瘤率=(对照组瘤质量-处理组瘤质量)/对照组瘤质量。1.2.7 移植瘤中细胞凋亡情况 胰酶消化肿瘤组织制备成单细胞悬液,高速离心机2000r/min,离心5min;PBS缓冲液洗涤两遍,高速离心机2000r/min,离心5min。去上清液;加入100 l 1BindingBuffer缓冲液,混匀,再加入5 l An-nexinV-异硫氰酸荧光素(FITC)和5 l碘化丙啶(PI),室温条件下孵育15min,最后加入400 l 1BindingBu
16、ffer缓冲液,1h内行流式细胞仪检测细胞凋亡情况。1.3 统计学方法实验结果采用SPSS22.0统计软件分析和GpraphPadPrism5进行作图、分析。本研究采用完全随机设计,所有计量数据均以xs表示。两组间数据采取t检验,多组间数据比较采取单因素方差分析。P0.05),照射后,两组间克隆形成率差异具有统计学意义(均P0.01),见表1、图2。表明TES可增加鼻咽癌5-8F细胞的放疗敏感性。肿瘤防治研究2023年第50卷第8期 CancerResPrevTreat,2023,Vol.50,No.87692.3 TES对裸鼠移植瘤放疗后瘤体生长速度的影响未转染组小鼠瘤体生长速度最快;与未转
17、染组比较,TES组、照射组、TES照射组的小鼠瘤体生长速度减慢,其中TES照射组瘤体生长速度最慢;与TES组、照射组相比较,TES照射组小鼠瘤体生长速度显著降低,且差异具有统计学意义(P0.01),见图3。2.4 TES对裸鼠移植瘤放疗后瘤体质量的影响与未转染组比较,TES组、照射组、TES照射组的瘤体质量依次降低,抑瘤率依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义(P0.01),见表2。图1 过表达TES蛋白的表达情况Figure 1 Overexpression of TES protein expression表1 未转染组和TES组照射前后细胞的克隆形成率比较Table 1 Compari
18、son of cell clone formation rates before and after irradiation between the nontransfected and TES groupsRadiotherapydose(Gy)UntransfectedgroupTESgroupFP00.9960.0040.9980.0030.6000.58420.6440.0120.5310.01324.1570.0140.3790.0040.1980.00647.4290.0160.1840.0110.0720.00478.6410.0180.0240.0010.0130.00145.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- Testin 基因 鼻咽癌 细胞 移植 放疗 敏感性 影响
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。