不同血清学检测方法在人布鲁氏菌病诊断中应用价值比较.pdf
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1、中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生 5 不同血清学检测方法在人布鲁氏菌病诊断中应用价值比较 羊 娜 儋州市疾病预防控制中心,海南 儋州 571700 摘要:摘要:目的 探究虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等在人布鲁氏菌病诊断中的实际应用价值。方法 选择在 2021 年至 2022 年于某院就诊的 60 例患者为例,取患者的静脉血,通过试管凝集试验测试,得出有 22 例阳性,38 例阴性。将 SAT 作为参照,分别再使用其他血清学检测方式对其进行检测,之后对比检测方式结果、一致性等。结果 客观对比三种血清学检测结果,可靠性分析 Fleiss K
2、appa 值是0.932。结论 本次研究结果显示,血清学检测中,RBP 敏感度高,ELISA 敏感度高并且特异度也较强。各种试验法各有优势和不足之处,因此可有效结合使用迅速及正确的诊断人布鲁氏菌病。关键词:关键词:血清学检测方法;人布鲁氏菌病;应用价值 中图分类号:中图分类号:R51 0 引言 所谓布鲁氏菌病,指的是由布鲁氏菌所致使产生的,对人体健康、畜牧业发展等造成较严重危害的一种人畜共患传染类疾病。世界卫生组织将此疾病列入到了二类动物疫病行列中,有调查研究结果显示,每年患有这一疾病的人数已经达到了 50 万。深究导致人间布病的传染源,主要为染疫家畜,人若是接触了染病牲畜或污染物,则很大可能
3、会感染布病。最近几年的人、畜间布病疫情出现了明显的增长趋势,但是具体的布病检出率表现出了高高低低的趋势,并且其下降趋势相对而言也不够明显。适用于布病的实验室诊断方式种类较多,例如细菌培养、PCR 检测、血清学检测。在专业的调查研究分析中可发现,前二者的耗时相对比较长,同时也对环境提出了较高的要求,因此其对于一些检测、调运检疫的检测相对而言并不适用,在此背景下,基层对布病的检测,主要是利用血清学方式实现的。布鲁氏菌若是进入到了机体,则必然会极大的刺激机体,产生抗体,基于此,必须客观诊断血液中的特异性抗体。血清学检测方法的类型大体包含如下几种:虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、酶
4、联免疫吸附试验(ELISA)、全乳环状试验(MRT)等,而 SAT 是其中确诊布病的一种方法。上述几种方式各有优劣,并且其敏感度、特异性也有着较大差异。本文客观分析了上述几种检测方法,同时对其应用价值进行了客观对比。1 一般资料和方法 1.1 一般资料 此次课题研究的主要对象 2021 年至 2022 年在某院接受治疗的 60 例患者。其实际的纳入标准表现为:发热、多汗、咳嗽等,具有一定的流行学基础史。神志比较清醒。排除标准:合并血液系统疾病、其他传染病等。依据我国的布鲁氏菌病诊断标准,将 SAT 的最低抗体滴度设置为 1:100,在实验中增加 RBT、ELISA 等试验。1.2 方法 1.2
5、.1 虎红平板凝集试验(RBT)在检查的当天清晨,让患者保持空腹状态,采集其5ML 的静脉血液,将其放置到包含分离胶的金黄色头盖真空采血管中,待至血液凝聚,3 000 r/min 离心 20 min,取血清做备用处理。实际的操作过程具体如下:使用蜡笔在载玻片上划分方格,并且取 30 L 血清,将其放置入方格中,同时添加等量布鲁氏杆菌病虎红平板凝集抗原,将其用木签搅拌均后之后,在室温下将其静置 5min,若是血清呈现出了凝集反应,则结果为阳性。1.2.2 试管凝集试验(SAT)第一步,血清稀释。取出 5 支试管备用,其中第一支加入 2.3ml 生理盐水,剂量为 2.3mL;第二支实验做对照管,保
6、持空白;第三、四、五支试管中则分别加入0.5ml 生理盐水。第一支试管加入 0.2ml 待检血清样本,保证其混匀的情况下,分别在第二、三支试管中加入第一支试管中的 0.5ml 血清稀释液;而第三支试验中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生 6 取出 0.5ml 混合液加入至第四支试管,之后再从第四支试管提出 0.5ml 混合液加入第五支试管中,再就第五支试管提取 0.5ml 液体丢弃。此番操作后,第二管至第五管血清稀释度分别是 1:12.5、1:25、1:50 与1:100。第二步,加入抗原。用生理盐水将抗原原液做适当稀释成抗原应用液,稀释之后的抗原应用液加到各稀释的血清管中,第一管不加,将其作
7、为血清对照,其余每管加 0.5ml,混匀。加入抗原应用液后第二管到第五管,每管的总量保持在 1ml,血清稀释度从第二管至第五管分别是 1:25、1:50、1:100、1:200,从第一管抽出 0.5ml 丢弃,剩余 1ml。第三步,阴性血清对照与抗原对照。根据对照结果,进行判定。1.2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)在相应的酶标板孔中,加入加 100 L 标准品、已稀释样本,利用粘性腹膜盖住酶标板,孵育一小时。在去掉覆膜以后,去掉孔中的液体,继而使用 300 L 洗涤液,清洗三次酶标板孔,每个孔中,也需加入 100 L 酶联物。之后再次覆膜盖住酶标板 30 分钟,之后反复前一动作,每个孔中
8、加入 100 LTMB 底物液,避温的情况下对其进行 20 分钟的培育。继而为有效合理中止底物反应,需加入 100 LTMB 终止液,轻荡酶标板,令其混合均匀。加入终止液一小时后,在 450nm 处进行 OD 值的客观测量1。2 结果 2.1 三种方法检测 100 例患者的血清结果 测量结果显示,虎红平板凝集试验(RBP)中,阳性患者有 28 例、试管凝集试验(SAT)中,阳性有 22例、酶联免疫吸附试验(ELISA),阳性有 24 例。2.2 三种方法诊断结果和效能分析 具体的研究结果如表 1、2 所示。2.3 三种方法可靠性与项间相关性分析 这几种方法一致使用 Fleiss Kappa,并
9、且结果值为 0.932。结果如表 3 所示。3 讨论 布鲁氏菌病是非常普遍与常见的人兽共患病之一,其主要病原为布鲁氏菌。并且作为短小的球杆状菌,布鲁氏菌已经被我国列入了乙类传染病、二类动物疫苗行列,最有效的检测方式,是为布病的预防、检测、净化等给予专业的技术支持2。3.1 血清学检测方式优缺点对比 目前我国使用比较频繁的几种布鲁氏病菌的血清学检测方式如下。3.1.1 虎红平板凝集试验(RBP)这种方式是布鲁氏菌抗体检测中,使用较为普遍的方式之一,同时也是十分关键的布病检测方式,可及时与迅速的诊断布病情况。并且虎红抗原可和血清样本中的布鲁氏菌抗体融合,逐渐产生凝集反应。将血清样本、虎红抗原混匀以
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