D3胚胎卵裂球数目与胚胎发育潜能和整倍性的相关性研究.pdf
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1、生殖医学杂志2 0 2 3 年9 月第3 2 卷第9 期:1305.DO1:10.3969/j.issn.1004-3845.2023.09.002D3 胚胎卵裂球数目与胚胎发育潜能和整倍性的相关性研究郭娜,田文曲,李悦含,谈慧平,熊婷,陈雯,吴黎,马冰馨,任新玲*(华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖中心,武汉43 0 0 3 0)【摘要】目的通过高通量测序技术(NGS)探讨D3胚胎卵裂球数目与胚胎发育潜能和整倍性之间的关系。方法回顾性分析2 0 18 年1月至2 0 2 1年12 月于本院生殖中心行胚胎植人前非整倍体遗传学检测(PGT-A)助孕的2 6 1个治疗周期共92 0 枚活检囊胚
2、的数据资料,根据D3胚胎卵裂球数目不同进行分组(4细胞组、5 细胞组、6 细胞组、7 细胞组、8 细胞组、9细胞组、10 细胞组及11细胞组),评估各组后续获得优质囊胚和整倍体囊胚的机会,并统计分析各组间临床结局的差异。结果(1)与8 细胞组相比,5 细胞、6 细胞、7 细胞及10 细胞组优质囊胚率显著降低(P=0.00),调整女方年龄因素以后,差异仍有显著性(P=0.00);卵裂球数目合并分组后,7 细胞组、910 细胞组的优质囊胚率显著低于8 细胞组,调整年龄因素以后,差异仍有显著性(P0.05);调整年龄后,各组间囊胚整倍体率仍无显著性差异(P0.05);卵裂球数目合并分组后,各组间随着
3、卵裂球发育速度增快,囊胚整倍体率增加,但差异尚无统计学意义(P0.05);调整年龄混杂因素后,各组间的囊胚整倍体率仍无显著性差异(P0.05)。(3)随着卵裂球数目增加,各组临床妊娠率、活产率呈上升趋势;卵裂球数目合并分组后,11细胞组的临床妊娠率和活产率最高,7 细胞组的临床妊娠率和活产率最低,但差异均尚无统计学意义(P0.05)。结论D3卵裂期胚胎的发育潜能随着卵裂球数目的增加而增加,11细胞的D3快速分裂胚胎具有同8 细胞胚胎相似的整倍体率和活产率,为临床单胚胎移植胚胎选择策略提供一定的参考。【关键词】卵裂球数;植入前非整倍体遗传学检测;形态学评估;整倍性【中图分类号】R711.6Rel
4、ationship between number of blastomeres in Day 3 embryos and prediction of embryonic developmentalpotential and euploidyGUONa,TIAN Wen-qu,LI Yue-han,TAN Hui-ping,XIONG Ting,CHEN Wen,WU Li,MABing-ain,RENXin-ling*Reproductive Medicine Center,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University o
5、fScience and Technology,Wuhan 430030Objective:To investigate the relationship between the blastomeres number of embryos on Day 3 andthe developmental potential and euploidy of embryos by high-throughput sequencing technology(Nextgeneration sequencing,NGS).Methods:The data of 920 biopsied blastocysts
6、 in 261 cycles of preimplantation genetic testing foraneuploidy(PGT-A)at the reproductive center of our hospital from January 2018 to December 2021 wereretrospectively analyzed.The biopsied blastocysts were grouped according to the blastomeres number ofembryos on Day 3(4 cells,5-cell,6-cell,7-cell,8
7、-cell,9-cell,10-cell,and 11 cells groups).The chances of【收稿日期】2023-01-30;【修回日期】2 0 2 3-0 4-2 9【基金项目】国家自然科学基金青年科学基金项目(8 2 0 0 40 17)【作者简介】郭娜,女,湖北孝感人,硕士,副主任技师,生殖医学专业(*通讯作者,Email:r e n x i n l i n g 12 6.c o m)【文献标识码】A【A b s t r a c t 1306obtaining high-quality blastocysts and euploid blastocysts in ea
8、ch group were evaluated,and the clinicaloutcomes of each group were analyzed.Results:(1)Compared with the 8-cell group,the high-quality blastocyst rates in 5-cell,6-cell,7-celland 10-cell groups were significantly lower(P=0.00),and the difference was still significant after the age-factor adjustment
9、(P=0.00).After the number of blastomeres was merged and grouped,the rate of high-quality blastocysts in the 7 cell and 9 to 10 cell groups was significantly lower than that in the 8-cellgroup,and the difference was still significant after adjusting the age factor.The high-quality blastocystrate in t
10、he 11 cell group was not significantly different from that in the 8-cell group(P=0.51),and thedifference was not significant after adjusting the age factor(P=0.45).(2)Compared with the 8-cell group,there was no significant difference in the euploid rate of blastocysts among the other groups(P0.05),a
11、ndthe difference was still not significant after adjusting the age factor(P0.05).After the number ofblastomeres was merged and grouped,the euploid rate of blastocysts increased with the increase ofblastomere development speed among each group,but the difference was not statistically significant(P0.0
12、5).(3)As the number of blastomeres increased,the clinical pregnancy rate and live birth rate among the groupsshowed an upward trend.After the number of blastomeres was merged and grouped,the clinical pregnancy rate andlive birth rate were the highest in ll cell group,and the clinical pregnancy rate
13、and live birth rate was lowest in0.05).Conclusions:The developmental potential of Day 3 cleavage-staged embryos increases with theincrease of the number of blastomeres,and Day 3 rapidly cleavage embryos with 1l cells exhibit similareuploid rate and live birth rate to 8-cell embryos.This study provid
14、es a certain reference for the selectionstrategy of clinical single embryo transfer embryos.Key words:Blastomere number;Preimplantation genetic testing for aneuploidies;Morphologicalassessment;Euploidy(J Reprod Med 2023,32(09):1305-1311)在辅助生殖技术(ART)中,胚胎选择对于优化临床单胚胎移植策略的推广提供参考。活产率和缩短受孕时间具有重要意义。近年来,选资料
15、与方法择性单囊胚移植逐渐成为一种广泛应用的临床策略,可以获得较高的临床妊娠率和较低的多胎妊娠率。但在临床工作中,对于高龄、卵巢储备功能低下、获得胚胎数目有限以及反复囊胚培养失败等患者,则更适合进行卵裂期胚胎移植 1。囊胚培养技术不仅费时费力,延长体外培养时间也可能会增加胚胎表观遗传学改变 2 。因此,如何从众多卵裂期胚胎中选择最有可能进入囊胚阶段的胚胎进行移植并获得健康活产儿是当前关注的焦点。众所周知,大部分早期妊娠丢失和反复着床失败是由胚胎非整倍体造成的,而胚胎植入前非整倍体遗传学检测(preimplantation genetic testing for aneuploidy,PGT-A)
16、技术可以通过筛选整倍体胚胎进行移植,从而改善妊娠结局和预防出生缺陷 3 。本研究应用高通量测序技术,基于PGT-A相关数据,评估卵裂期胚胎卵裂球数目与胚胎整倍性的相关性,从而为生殖医学杂志2 0 2 3 年9 月第3 2 卷第9 期一、研究对象及分组回顾性分析2 0 18 年1月至2 0 2 1年12 月在本院生殖中心行ART助孕且进行PGT-A的患者临床资料。纳人标准:人组夫妇均符合PGT-A指征:(1)女方高龄(3 8 岁);(2)复发性流产;(3)反复植人失败;(4)不良孕产史等。排除标准:(1)夫妻双方中有一方或双方均存在染色体异常;(2)单基因病行胚胎植人前单基因遗传学检测患者;(3
17、)因细胞量不足或扩增失败的周期;(4)对同一囊胚进行二次活检的周期;(5)患者因个人原因中途放弃行PGT-A治疗周期。根据纳人/排除标准,本研究共纳入2 6 1个治疗周期,包括9 2 0 枚活检囊胚。本研究通过本院医学伦理委员会批准,批准编号为2 0 2 1伦审字(S221)号,夫妻双方均知晓并同意。生殖医学杂志2 0 2 3 年9 月第3 2 卷第9 期二、研究方法1.分组:本研究对9 2 0 枚活检囊胚资料进行回顾性分析,根据其D3胚胎卵裂球细胞数不同进行分组,分为4细胞组、5 细胞组、6 细胞组、7 细胞组、8 细胞组、9 细胞组、10 细胞组及11 细胞组;再将 D3 卵裂球细胞数进行
18、合并分组,分为:7 细胞组、8 细胞组、9 10细胞组和11细胞组。评估各组后续获得优质囊胚、整倍体囊胚的机会,并同时分析各组间临床结局。2.控制性促排卵:根据患者年龄、卵巢激素水平及储备情况采用相应的促排卵方案,当阴道B超监测下至少有一个主导卵泡直径18 mm时给予肌肉注射人绒毛膜促性腺激素(HCG,珠海丽珠)800010 0 0 0 U 或重组人绒毛膜促性腺激素(艾泽,默克雪兰诺,瑞士)0.2 5 mg扳机,于扳机后3 6 38h经阴道超声指导下取卵。3.受精、胚胎培养及评估:所有行PGT-A周期均行卵胞浆内单精子注射(ICSI)受精,ICSI 后将受精卵置于Time-lapse培养箱中培
19、养,所采用培养液来自瑞典Vitrolife公司的G系列序贯培养液,16 18 h观察受精情况,于受精后第2 天(D2)、第3 天(D3)记录胚胎卵裂球细胞数、碎片化程度、细胞均一性。拟行PGT-A的胚胎均需培养至囊胚阶段。采用Gardner评分体系,选择囊胚评级在3 BC及以上的可用囊胚进行活检。4.囊胚活检、冷冻及PGT-A检测:使用HAMILTON激光操作系统对囊胚进行滋养外胚层细胞活检。用激光在内细胞团对侧的透明带打孔,打孔大小以刚好插人活检针为宜,迅速插人活检针吸取3 5个滋养层细胞送检测。活检后的囊胚即刻进行玻璃化冷冻,并单管单胚冷冻储存于液氮中。囊胚冷冻液采用日本KITAZATO生
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