DSPE-mPEG2000修饰荷叶碱脂质体制备及其体内药动学研究.pdf
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1、制 剂 修饰荷叶碱脂质体制备及其体内药动学研究李燕红,张春燕,陈 乾,(黄河科技学院,河南 郑州;黄河科技学院附属医院,河南 郑州;河南中医药大学第二附属医院,河南 郑州)收稿日期:基金项目:国家自然科学基金()作者简介:李燕红(),女,硕士,讲师,主治中医师,研究方向为中医药。:(),:通信作者:陈乾(),男,博士,主治医师,研究方向为中医药开发。:(),:摘要:目的 制备二硬脂酰磷脂酰乙醇胺聚乙二醇 ()修饰荷叶碱脂质体,并考察其体内药动学。方法 薄膜超声法制备脂质体。以磷脂酰胆碱与胆固醇比例、脂药比、用量、水化温度、超声时间为影响因素,单因素试验优化处方,测定包封率、载药量、粒径、电位、
2、体外释药。只大鼠随机分为 组,分别灌胃给予荷叶碱原料药、不含 荷叶碱脂质体、修饰荷叶碱脂质体的 混悬液(),于、采血,法测定荷叶碱血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳处方为荷叶碱用量 ,磷脂酰胆碱与胆固醇比例 ,脂药比 ,用量 ,水化温度 ,超声时间 ,平均包封率为 ,载药量为 ,粒径为 ,为 ,电位为 。修饰后,荷叶碱在人工胃液、人工肠液中 内累积释放度分别为 、。与原料药比较,脂质体、延长(),、升高(),相对生物利用度增加至 倍。结论 修饰脂质体可促进荷叶碱口服吸收。关键词:荷叶碱;脂质体;二硬脂酰磷脂酰乙醇胺聚乙二醇 ();制备;体内药动学;薄膜超声法;中图分类号:文献标志码:文章编
3、号:():(),(,;,;,):(),(),年 月第 卷 第 期中 成 药 ,(),(),):;();荷叶碱是一种类白色粉末,为荷叶主要成分之一,属于阿朴啡型生物碱类化合物,具有调节脂质代谢、抗氧化、降血糖、抗菌、抗肿瘤等多种活性,存在开发成新药的潜力。但该成分在水中的溶解度仅为 ,透膜性差,属于生物药剂学分类系统中的药物;在胃肠道中容易被破坏,体内稳定性差;半衰期短,口服吸收生物利用度仅为 ,故不利于临床应用。脂质体结构类似于生物膜囊泡,其主要材料磷脂、胆固醇均有较高的生物相容性,安全性理想,并且存在疏水的磷脂双层膜和亲水的空腔,可包载疏水或亲水性药物,从而促进后者体内吸收,提高口服生物利用
4、度及疗效。本实验制备二硬脂酰磷脂酰乙醇胺聚乙二醇 ()修饰荷叶碱脂质体,并进行体内药动学研究,以期为相关新制剂开发提供参考,也为后续注射药动学、抗糖尿病药效学等方面的研究奠定基础。材料 仪器 安捷伦 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);型三重四级杆质谱仪(美国 公司);型激光粒度仪(英国马尔文仪器有限公司);型电子分析天平(上海仪天科学仪器有限公司);型超声仪(张家港市海航超声电器有限公司);型恒温水浴锅(江苏新春兰科学仪器有限公司);型磁力搅拌器(常州市亿能实验仪器厂);型氮气吹扫仪(上海继谱电子科技有限公司);型旋转蒸发仪(德国 公司);型离心机(德国 公司)。试 剂 与 药 物 荷 叶
5、碱 原 料 药(批 号,纯度 ,四川维克奇生物科技有限公司)。荷叶碱对照品(批号,纯度 ,中国食品药品检定研究院);罂粟碱对照品(批号,纯度 ,上海士锋生物科技有限公司);大豆磷脂酰胆碱对照品(批号,纯度 ,上海源叶生物科技有限公司)。胆固醇(批号,上海谱振生物科技有限公司);(批号,上海艾 韦 特 医 药 科 技 有 限 公 司)。蔗 糖(批 号,湖南九典制药股份有限公司)。动物 大鼠,清洁级,雌雄兼具,体质量,由河南省动物实验中心提供,动物生产许可证号 (豫)。方法与结果 荷叶碱含量测定 采用 法。色谱条件 色谱柱(,);流动相甲醇 三乙胺();体积流量 ;柱温 ;检测波长 。线性关系考察
6、取 荷叶碱对照品至 量瓶中,甲醇超声溶解后定容至刻度,摇匀,得 对照品溶液,流动相依次稀释至、,在“”项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标(),峰面积为纵坐标()进行回归,得方程为 (),在 范围内线性关系良好。供试品溶液制备 取 脂质体混悬液至 量瓶中,加 甲醇超声(、)处理 ,甲醇定容至刻度,微孔滤膜过滤,取续滤液 至 量瓶中,流动相定容,即得。方法学考察取供试品溶液适量,在温度、相对湿度 条件下于、年 月第 卷 第 期中 成 药 在“”项色谱条件下进样测定,测得荷叶碱峰面积 为 ,表明该方法稳定性良好。按“”项下方法制备 份供试品溶液,在“”项色谱条件下进样测定,测得荷叶碱含量
7、 为 ,表明该方法重复性良好。取、对照品溶液适量,在“”项色谱条件下各进样测定 次,测得峰面积 分别为 、,表明仪器精密度良好。取 脂质体混悬液共 份,分为低、中、高 组,分别加入 对照品溶液、,按“”项下方法制备供试品溶液,在“”项色谱条件下进样测定,测得平均加样回收率分别为 、,分别为 、。脂质体制备参考文献 报道,取磷脂酰胆碱、胆固醇、适量,溶于 氯仿乙醇混合溶液(,超声处理 混匀)中;另取 荷叶碱,置于 无水乙醇中,加热溶解,将它们合并后置于圆底烧瓶中,、减压旋蒸,得到均匀薄膜,加入 缓冲液(),恒温水化 ,超声()处理,过 微孔滤膜,即得,加入 蔗糖,在 下预冻,冷冻干燥,得到 冻
8、干 粉,密 封。同 法 制 备 不 含 的脂质体。指标测定 取 脂质体混悬液,置于超滤管(截 留 相 对 分 子 质 量 )中,、离心 ,取续滤液,在“”项色谱条件下进样测定,计算游离药量;取 脂质体混悬液至 量瓶中,加 甲醇超声(、)处理 ,甲醇定容至刻度,微孔滤膜过滤,取续滤液 至 量瓶中,流动相定容,在“”项色谱条件下进样测定,计算荷叶碱总量,采用透析法测定包封率、载药量,公式分别为包封率 ()、载药量 (),其中 为荷叶碱、脂质、总量。另取脂质体混悬液适量,蒸馏水稀释 倍后测定粒径、电位。单因素试验 磷脂酰胆碱与胆固醇比例保持荷叶碱用量 、脂药比:(脂质总量为磷脂酰胆碱、胆固醇总量)、
9、用量 、水化温度 、超声时间 不变,考察磷脂酰胆碱与胆固醇比例对包封率的影响,结果见图。由此可知,包封率随着磷脂酰胆碱在脂质总量中比例的增加先升后降,可能是由于胆固醇用量过多时可能与药物竞争磷脂双分子层空间,导致包封率降低;当胆固醇用量不足时,脂质体稳定性差而容易泄露,也会使包封率降低,故选择磷脂酰胆碱与胆固醇比例为 。图 磷脂酰胆碱与胆固醇比例对包封率的影响()()脂药比保持荷叶碱用量 、磷脂酰胆碱与胆固醇比例 、用量、水化温度 、超声时间 不变,考察脂药比对包封率的影响,结果见图。由此可知,包封率随着脂质用量增加逐渐升高,当脂药比为 时达到最大值,而再进一步增加时无明显变化,并且也会影响制
10、剂载药量,故选择脂药比为 。图 脂药比对包封率的影响()()用量保持荷叶碱用量、磷脂酰胆碱与胆固醇比例 、脂药比 、水化温度 、超声时间 不变,考察 用量对包封率的影响,结果见图。由此可知,包封率随着 用量增加逐渐升高,为 时达到最大值,而再 年 月第 卷 第 期中 成 药 进 一 步 增 加 时 无 明 显 变 化,故 选 择 用量为 。图 用量对包封率的影响()()水化温度保持荷叶碱用量 、磷脂酰胆碱与胆固醇比例 、脂药比 、用量 、超声时间 不变,考察水化温度对包封率的影响,结果见图。由此可知,包封率随着水化温度增加先升后降,可能是由于水化温度较低时达不到磷脂酰胆碱相变温度,脂质膜吸水溶
11、胀性较差,不利于包裹药物;但磷脂酰胆碱热稳定性较差,水化温度过高时会影响脂质体稳定性,导致包封率降低,故选择水化温度为 。图 水化温度对包封率的影响()()超声时间保持荷叶碱用量 、磷脂酰胆碱与胆固醇比例 、脂药比 、用量 、水化温度 不变,考察超声时间对包封率的影响,结果见图。由此可知,超声时间越长,包封率下降程度越大,表明时间过长可能会对脂质体有一定破坏作用,使包封率降低,并且在 时较高,故选择超声时间为。验证试验根据“”项下结果,确定最图 超声时间对包封率的影响()()优工艺为荷叶碱用量 ,磷脂酰胆碱与胆固醇比例 ,脂药比 ,用量,水化温度 ,超声时间 。按上述优化工艺制备 批脂质体混悬
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