HPLC-ELSD法和UPLC-MS_MS法评价石斛夜光丸中人参投料掺伪情况.pdf
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1、2729中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 HPLC-ELSD 法和 UPLC-MS/MS 法评价 石斛夜光丸中人参投料掺伪情况朱韬,何颂华,李丽莉*,罗轶*(广西壮族自治区食品药品检验所国家药品监督管理局中药材质量监测与评价重点实验室,南宁530021)摘要:目的建立石斛夜光丸中人参混淆品(西洋参)掺伪的检测方法,考察样品中人参的投料情况。方法分别采用 HPLC-ELSD 和 UPLC-MS/MS 法进行分析测定。HPLC-ELSD 法:采用 CAPCELL PAK C1
2、8 MGIII(S-5)(4.6 mm250 mm,5 m)柱,以乙腈-水为流动相,流速为 1.0 mLmin 1,柱温 30,ELSD 漂移管温度为 105,气体流速为 3.0 Lmin 1;UPLC-MS/MS 法:采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)模式。结果91 批石斛夜光丸中有 35 批样品检出西洋参。结论所建立方法专属性、重复性、稳定性、耐用性良好,可为石斛夜光丸中人参的质量控制与评价提供可靠方法。关键词:石斛夜光丸;HPLC-ELSD;UPLC-MS/MS;人参;西洋参;质量控制中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1672-2981(2023)10-272
3、9-05doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2023.10.028Evaluation of Ginseng Radix et Rhizoma in Shihu Yeguang pills by HPLC-ELSD and UPLC-MS/MSZHU Tao,HE Song-hua,LI Li-li*,LUO Yi*(Guangxi Institute for Food and Drug Control,NMPA Key Laboratory for Quality Monitor and Evaluation of Traditional Chinese Medicin
4、e,Chinese Material Medica,Nanning 530021)Abstract:Objective To detect adulterated Ginseng Radix et Rhizoma in Shihu Yeguang pills.Methods The samples were determined by HPLC-ELSD and UPLC-MS/MS.The chromatographic separation was performed on a CAPCELL PAK C18 MGIII(S-5)(4.6 mm250 mm,5 m)column with
5、the mobile phase consisting of acetonitrile-water at 1.0 mLmin 1 in a gradient elution.The columm temperature was 30,the temperature of ELSD was 105,and the gas flow rate was 3.0 Lmin 1.The electrospray was operated in the negative mode,and the samples were detected by multiple reaction monitoring m
6、ode(MRM).Results Among the 91 batches of Shihu Yeguang pills,35 samples batches were adulterated with Panacis Quinquefolii Radix.Conclusion The methods shows good specificity,repeatability,stability and durability,which is reliable for the quality control and evaluation of Ginseng Radix et Rhizoma i
7、n Shihu Yeguang pills.Key words:Shihu Yeguang pill;HPLC-ELSD;UPLC-MS/MS;Ginseng Radix et Rhizoma;Panacis Quinquefolii Radix;quality control作者简介:朱韬,男,主要从事中药质量控制研究,email:*通信作者:李丽莉,女,主要从事中药质量控制研究,email:;罗轶,女,主要从事中药质量与安全研究,email:石斛夜光丸是治疗眼疾的古老传统名方,处方由石斛、人参、山药、茯苓、地黄、天冬、山羊角等 25 味中药组成,现收载于 中国药典 2020 年版,具有滋阴
8、补肾、清肝明目的功效1。现代临床研究表明,石斛夜光丸用于治疗干眼症、玻璃体混浊、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、慢性葡萄膜炎、青光眼术后、溢泪症、肝肾阴亏型足跟痛、冠心病及心肌梗死等疾病2-4。处方中人参为伞形目五加科人参属植物人参(Panax ginseng C.A.Mey)的干燥根和根茎,性温,具有大补元气、固脱生津、安神益智等功效;西洋参为伞形目五加科人参属植物西洋参(Panax quinquefolium L.)的干燥根,2730Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期性
9、凉,具有补气养阴、清热生津的功效,两者药效区别较大,不能混用。随着市场需求不断提升,商家追求高额利润,近年来不断有报道使用西洋参混入中药制剂冒充人参进行投料生产5-6。2020 年版 中国药典中对于石斛夜光丸的人参质量控制仅涉及人参皂苷Rg1和人参皂苷 Re 两个成分,但西洋参中也含有这两种成分7-8,单纯采用这两个指标成分进行定性鉴别,对于是否存在西洋参掺伪投料情况无法评判。两味药所含化学成分极为相似,均以人参皂苷为重要活性成分,但所含皂苷种类与比例存在一定差异,如西洋参特有的拟人参皂苷 F11,人参中基本没有5,9。因此本试验以拟人参皂苷 F11为特征标志物,进行掺伪检查的方法研究。由于拟
10、人参皂苷 F11没有紫外吸收,本试验采用了高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法,同时通过 UPLC-MS/MS 技术建立专属性强的检查方法,并对收集到的 91 批样品进行测试,以期对不同生产企业的产品进行评价,为石斛夜光丸中人参掺伪投料检测和质量标准完善提供参考。1仪器与材料Agilent 1260 高效液相色谱仪、Agilent 6460 超高效液相色谱-质谱联用仪(Agilent公司),ELSD 6000 蒸发光检测器(Alltech公司);XP205 电子天平(Mettler Toledo 公司,精度 0.01 mg);Milli-Q纯水仪(Millipore公司)。人
11、参(批号:120917-201712)、西洋参(批号:120997-201810)、拟人参皂苷 F11(批号:110841-201607)(中国食品药品检定研究院),25 批不同产地的西洋参和 13 批西洋参须均购自市场(经广西壮族自治区食品药品检验所黄清泉主管中药师鉴定为五加科植物西洋参 Panax quinquefolium L.的干燥根和干燥根须),91 批不同厂家、不同批次石斛夜光丸均为 2020 年国家药品评价性抽验样品。乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1HPLC-ELSD 法2.1.1 色 谱 条 件 色 谱 柱:Capcell PAK C18 MGI
12、II(S-5)(4.6 mm250 mm,5 m),流 动相:以乙腈为流动相 A,水为流动相 B,梯度洗脱(0 20 min:10%30%A;20 45 min:30%A);流速 1.0 mLmin 1;柱温 30;检测器 ELSD,漂移管温度 105,载气为氮气,气体流速 3.0 Lmin 1,增益 1。2.1.2溶液的制备 对照品溶液:取拟人参皂苷 F11(经标定,含量为 99.9%)适量,精密称定,加甲醇制成每 1 mL含 100 g的溶液,即得。供试品溶液:取本品,研碎,取 6 g,精密称定;置具塞锥形瓶中,精密加入 70%甲醇溶液100 mL,密塞,称定重量,加热回流 1 h,放冷,
13、再称定重量,用 70%甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取滤液 50 mL,置蒸发皿中,蒸干,残渣加水 25 mL 使溶解,加水饱和正丁醇振摇提取 4 次,每次 25 mL,合并正丁醇提取液,用氨试液洗涤 2 次,每次 50 mL,再用正丁醇饱和水 50 mL 洗涤,分取正丁醇液,减压浓缩,回收溶剂至干,残渣加甲醇适量使溶解,转移至 2 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。阴性样品溶液的制备:按规定的处方量及工艺自制缺人参的石斛夜光丸阴性样品,按项下方法制成阴性样品溶液。阳性样品溶液的制备:取阴性样品 6 g 和西洋参 3.4 mg(相当于 6 g 制剂中 10%人
14、参的处方量),作为阳性样品,按项下方法制成阳性样品溶液。人参供试品溶液的制备:取人参 34 mg(相当于 6 g 制剂中人参的处方量),按项下方法制成西洋参(须)供试品溶液。西洋参(须)供试品溶液的制备:分别取西洋参和西洋参须各 3.4 mg,按项下方法制成西洋参(须)供试品溶液。掺伪 5%西洋参(须)样品溶液的制备:取阴性样品 6 g 和西洋参(须)1.7 mg(相当于 6 g 制剂中 5%人参的处方量),作为阳性样品,按项下方法制成掺伪样品溶液。2.1.3含量测定分别精密吸取对照品溶液 5 L、20 L及供试品溶液 10 L,进样测定,用外标两点法对数方程计算拟人参皂苷 F11的含量。2.
15、1.4专属性试验分别吸取对照品溶液、阴性样品溶液和对照药材溶液各 10 L,进样测定。结果西洋参和西洋参须在拟人参皂苷 F11峰相应位置显示有对应色谱峰,阴性样品和人参在拟人参皂苷 F11相应位置无色谱峰,表明本方法专属性较好,色谱图见图 1。2.1.5线性关系考察称取拟人参皂苷 F11对照品适量,加甲醇制成质量浓度分别为 0.0528、0.1055、0.3165、0.5275、1.0550 mgmL 1的对照品溶液,进样测定。以对照品进样量为横坐标(X),峰面积对数值为纵坐标(Y)绘制标准曲线,计算回归方程为:Y 1.650X 2.315,r 0.9999。结果表明,拟人参皂苷 F11在进样
16、量为 0.528 10.550 g内与峰面积对数值线性关系良好。2.1.6 耐 用 性 试 验 考 察 3 种 不 同 品 牌 色 谱柱 CAPCELL PAK C18 MGIII(S-5)(5 m,4.6 2731中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 mm250 mm)、Agilent 5TC-C18(2)(5 m,4.6 mm250 mm)、菲 罗 门 SuperLu C18(5 m,4.6 mm250 mm),结果 3 种色谱柱测定人参皂苷 F11的峰面积 RSD为 0
17、.79%,表明方法耐用性良好。2.1.7精密度试验精密吸取拟人参皂苷 F11对照品溶液,连续测定 6 次,结果峰面积的 RSD 为 1.1%,表明本法的仪器精密度较好。2.1.8重复性试验取同一批石斛夜光丸供试品(阳性样品),平行称取 6 份,按“2.1.2”项下方法制成相应溶液并测定,结果拟人参皂苷 F11平均含量为 149 gg 1,RSD 为 0.81%,表明本方法重复性较好。2.1.9稳定性试验取同一批石斛夜光丸供试品(阳性样品),按“2.1.2”项下方法的色谱条件,每隔 4 h测定一次,共测定 6 次,结果拟人参皂苷F11峰面积的 RSD 为 1.4%,结果表明供试品溶液在 24 h
18、内稳定。2.1.10加样回收试验取阳性供试品 6 g,精密称定,精密加入拟人参皂苷 F11对照品溶液(2.4 mgL 1)100 mL,按“2.1.2”项下方法制成相应溶液并测定,结果加样回收率为 98.7%104.4%,RSD为 2.2%。2.1.11定量限和检测限精密吸取拟拟人参皂苷F11对照品溶液(1.1 mgmL 1),逐级稀释,进样测定,S/N为 31 时确定检测限,S/N为 101 时确定定量限,结果拟人参皂苷 F11的定量限、检测限分别为 13 gg 1、5.8 gg 1。2.1.12限度拟订按照 2020 版 中国药典四部 0212 药材和饮片检定通则规定杂质通常不得过3%10
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