HIF-1α及Pendrin在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻甲黏膜组织中的表达及其关联性.pdf
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1、论著H I F-1 及P e n d r i n在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻甲黏膜组织中的表达及其关联性于博李世超任颖川杨屈扬作者 简 介:于 博,男,4 4岁,汉 族,硕 士,高 级 职称。主 要 研 究 成 果:获发明专 利1项,发 表 专业论 文5篇。研 究 方向:中西 医 结 合 治 疗 耳鼻咽喉常见疾病。【摘要】目的探讨慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉组织中缺氧诱导因子-1(H I F-1)、P e n d r i n的表达及其相互关联性。方法将1 6 2例慢性鼻-鼻窦炎患者按照是否伴鼻息肉分为伴鼻息肉组(8 4例)和不伴鼻息肉组(7 8例),另将鼻粘膜组织正常的健康志愿者设为对照组(6 0例),采用
2、免疫组织化学法、逆转录聚合酶链反应检测H I F-1、P e n d r i n表达情况,并采用秩相关分析法分析二者的相关性。结果三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达阳性率比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照组,差异有统计学意义(P0.0 1)。三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i nmR NA相对表达强度比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照组,差异有统计学意义(P0.0 1)。S p e a r m a n秩相关分析结果显示,1 6 2例慢性鼻-鼻窦炎鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达呈显著正相关
3、(r=0.5 9 3,P0.0 1)。结论慢性鼻-鼻窦炎患者鼻甲黏膜组织中H I F-1、P e n d r i n表达增强,与是否伴有鼻息肉不相关,可能与H I F-1、P e n d r i n表达具有一定的相关性。【关键词】慢性鼻-鼻窦炎;鼻甲黏膜组织;缺氧诱导因子-1;潘蛋白;相关性d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-1 8 7 X.2 0 2 3.0 5.0 0 5【中图分类号】R7 6 5.4 1【文献标识码】AE x p r e s s i o no fH I F-1 a n dP e n d r i ni nt u r b i n a t e
4、m u c o s ao fp a t i e n t sw i t hc h r o n i cr h i n o s i n u s i t i sa n dt h e i r c o r r e l a t i o nY uB o,L iS h i c h a o,R e nY i n g c h u a n,Y a n gQ u y a n g(F i r s t-a u t h o r sa d d r e s s:P i n g d i n g s h a n M a t e r n a la n dC h i l d H e a l t h H o s p i t a l,P i
5、 n g d i n g s h a n4 6 7 0 0 0,H e n a n,C h i n a)C o r r e s p o n d i n ga u t h o r:L iS h i c h a o(E m a i l:1 8 6 3 7 1 3 6 5 4 21 6 3.c o m)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T oe x p l o r et h ee x p r e s s i o no fh y p o x i a-i n d u c i b l ef a c t o r-1(H I F-1)a n dP e n d r i ni
6、nt u r b i n a t em u c o s ao fp a t i e n t sc h r o n i c r h i n o s i n u s i t i s(C R S)a n dt h e i rc o r r e l a t i o n.M e t h o d s At o t a lo f1 6 2C R Sp a t i e n t sw e r ea s s i g n e dt oC R S wN P(n=8 4)a n dC R S s N P(n=7 8)g r o u pa c c o r d i n gt ow h e t h e r t h e yw
7、e r ec o m p l i c a t e db yn a s a l p o l y p s(N P),6 0h e a l t h yv o l u n t e e r sw i t hn o r m a l n a s a lm u c o s a t o c o n t r o l g r o u p,H I F-1 a n dP e n d r i ne x p r e s s i o nd e t e c t e du s i n g i mm u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o da n dr e v e r s e t r a
8、 n s c r i p t i o n-p o l-y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n(R T-P C R),a n dt h e i rc o r r e l a t i o n sa n a l y z e du s i n gr a n kc o r r e l a t i o na n a l y s i s.R e s u l t s D i f f e r e n c e s i nt h ep o s i t i v er a t e so fH I F-1 a n dP e n d r i ne x p r e s s i o na m
9、 o n gt h r e eg r o u p sw e r es t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t(P0.0 5),b u tt h o s eo fb o t hC R S wN Pa n dC R S s N Pg r o u pw e r e32临床心身疾病杂志2 0 2 3年9月第2 9卷第5期JC l i nP s y c h o s o mD i s,S e p.2 0 2 3,V o l2 9,N o.5h i g h e rc o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p(P0
10、.0 1).D i f f e r e n c e s i nt h er e l a t i v ee x p r e s s i o ni n t e n s i t i e so fH I F-1 a n dP e n d r i nmR NAa m o n gt h r e eg r o u p sw e r es t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t(P0.0 5),b u t t h o s eo fb o t hC R S w-N Pa n dC R S s N Pg r o u pw e r eh i g h e rc o m
11、 p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p(P0.0 1).S p e a r m a nr a n kc o r r e l a t i o ns h o w e dt h a t t h e r ew a sas i g n i f i c a n tp o s i t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e nH I F-1 a n dP e n d r i ne x p r e s s i o ni nt u r b i-n a t em u c o s ao f 1 6 2C R Sp a t i e n t s
12、(r=0.5 9 3,P0.0 5)。本研究经平顶山市妇幼保健院医学伦理委员会审核批准。1.2方法1.2.1标本采集及检测方法取入组被试下鼻甲粘膜病变组织,置于4%多聚甲醛中固定。采用免疫组织化学法检测H I F-1、P e n d r i n表达8,采用反转录聚合酶链反应(r e v e r s et r a n s c r i p t i o n-p o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n,R T-P C R)检测H I F-1、P e n d r i nmR-NA表达情况。1.2.2免疫组织化学法检测制作石蜡切片,进行常规脱蜡,水洗,磷酸盐缓
13、冲溶液(p h o s p h a t eb u f f e rs a l i n e,P B S)清洗3次,修复抗原,并将切片先放在柠檬酸盐缓冲液中,然后再放 入9 5 水浴锅中0.5h,加入3%的H2O2溶液孵育2 0m i n,分别滴加一抗(H I F-1 或P e n d r i n工作浓度约为11 0 0,由美国S a n t aC r u z公司生产);每片3 0L,4 孵育过夜。滴加E n v i s i o n,每片3 0L,室温0.5h。用D A B显色5m i n1 5m i n,随后用苏木精复染,用1%的盐酸乙醇分化,再进行梯度脱水,最后用中性树胶封片,在显微镜下观察。H
14、 I F-1、P e n d r i n主要表达在鼻粘膜组织细胞的细胞质,在显微镜下显现出淡黄色、棕黄色及褐色,则为阳性表达9。(1)依据H I F-1、P e n d r i n阳性染色强度计分:无色计0分,淡黄色计1分,棕黄色计2分,褐色计3分;(2)H I F-1、P e n d r i n阳性表达细胞占视野下所有细胞比例计分:7 5%为4分。42临床心身疾病杂志2 0 2 3年9月第2 9卷第5期JC l i nP s y c h o s o mD i s,S e p.2 0 2 3,V o l2 9,N o.5总分=染色强度得分阳性染色细胞占比得分,总分3分为阴性,3分为阳性。1.2
15、.3R T-P C R法将采集到的组织浸于1 m LT r i o l试剂中,用匀浆器制成匀浆,静置1 0m i n后离心,保存血清,再用7 5%的乙醇洗涤,在紫外分光光度仪检测的R NA纯度在1.82.0之间即符合检测标准。将上述制得的样本进行逆转录,按照试剂盒说明操作。选择GA P DH作为内参,使用I n v i t r o g e n公 司 合 成 的 引 物。按 以 下 反 应 体 系 进 行:E v a G r e e n q P C R M a s t e rM i x1 2.5L,上下游引物各1L(1 0p m o lL-1),模板3L,用无菌去离子水补足体系至2 5L。反应条
16、件:9 5 1 5m i n,然后9 51 5s,6 01m i n,共4 0个循环。所用到的仪器是A B I 7 3 0 0荧光定量P C R仪,完成扩增后,制得扩增曲线,得到循环阈值(C T)。将测得的目的基因量用内参进行校正。目的mR NA=C T(目的基因)-C T(GA P DH)。1.2.4统计学方法所有数据应用S P S S2 1.0统计软件处理,计量资料以均数标准差(xs)表示,采用t检验;计数资料以百分率(%)表示,采用2检验;指标的相关性采用S p e a r m a n秩相关分析法。以P0.0 5为差异有统计学意义。2结果2.1三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n
17、d r i n表达阳性率比较伴鼻息肉组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n-d r i n表达阳性率分别为6 7.8 6%、7 1.4 3%,不伴鼻息肉组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达阳性率分别为6 0.2 6%、6 1.5 4%,对 照 组 鼻 甲 黏 膜 组 织H I F-1、P e n d r i n表 达 阳 性 率 分 别 为2 1.6 7%、2 6.6 7%。三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达阳性率比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照组,差异有统计学意义(P0.0 1)。见表1、表2。表1三组鼻甲黏膜组织H I
18、 F-1 表达阳性率比较n(%)组别例数-+表达阳性伴鼻息肉组8 42 7(3 2.1 4)2 4(2 8.5 7)2 4(2 8.5 7)9(1 0.7 1)5 7(6 7.8 6)不伴鼻息肉组7 83 1(3 9.7 4)2 2(2 8.2 1)2 0(2 5.6 4)5(6.4 1)4 7(6 0.2 6)对照组6 04 7(7 8.3 3)1 3(2 1.6 7)001 3(2 1.6 7)23 2.7 1 0P0.0 0 0注:与对照组比较P0.0 5)。表2三组鼻甲黏膜组织P e n d r i n表达阳性率比较n(%)组别例数-+表达阳性伴鼻息肉组8 42 4(2 8.5 7)2
19、 3(2 7.3 8)2 6(3 0.9 5)1 1(1 3.1 0)6 0(7 1.4 3)不伴鼻息肉组7 83 0(3 8.4 6)2 0(2 5.6 4)2 2(2 8.2 1)6(7.6 9)4 8(6 1.5 4)对照组6 04 4(7 3.3 3)1 6(2 6.6 7)001 6(2 6.6 7)23 0.0 1 6P0.0 0 0注:与对照组比较P0.0 5)。2.2三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i nmR NA相对表达比较三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i nmR NA相对表达强度比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照 组
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