HOX13与糖尿病足患者临床特征的相关性及对细胞增殖、凋亡及炎症的影响.pdf
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1、论著H O X 1 3与糖尿病足患者临床特征的相关性及对细胞增殖、凋亡及炎症的影响*刘宇彪1 周花玩2 鞠上3(1.中国中医科学院广安门医院南区外科,北京 1 0 2 6 0 0;2.天承金象中医诊所,北京 1 0 0 0 4 5;3.北京中医药大学东直门医院周围血管科,北京 1 0 0 0 6 1)【摘要】目的 探讨同源框蛋白1 3(HO X 1 3)与糖尿病足(D F)患者临床特征的相关性及对细胞增殖、凋亡及炎症的影响。方法 选取2 0 1 8年1月2 0 2 1年1月中国中医科学院广安门医院南区接诊的糖尿病足患者6 0例作为糖尿病足组,选择同期因外伤行清创手术的2型糖尿病非病足患者1 9
2、例作为糖尿病非病足组,并选择同期因外伤在我院接受清创手术的无糖尿病病史且无创面感染的患者6 0例作为对照组。对比分析3组临床特征及其HO X 1 3相关性。3组间HOX 1 3表达采用免疫组化法;HO X 1 3蛋白表达使用W e s t e r n b l o t检测。构建体外细胞模型,分为敲除组(转染敲除HOX 1 3质粒)、HOX 1 3过表达组(转染过表达HO X 1 3质粒)、空白组(未做任何处理)。检测细胞增殖能力通过C C K-8和e d u实验;细胞凋亡检测采用流式细胞仪。结果 糖尿病非病足组年龄、病程、白细胞计数、纤维蛋白原(F G)、糖化血红蛋白(H b A 1 c)、肿瘤
3、坏死因子(TN F-)、超敏C反应蛋白(h s-C R P)、白介素(1 L)-6、1 L-4显著低于糖尿病足组(P0.0 5),对照组年龄、病程、白细胞计数、F G、H b A 1 c、T N F-、h s-C R P、1 L-6、1 L-4显著低于糖尿病非病足组(P0.0 5)。踝肱指数、血红蛋白、白蛋白在糖尿病非病足组显著高于糖尿病足组(P0.0 5)。HOX 1 3的阳性表达与年龄、病程、白细胞计数、F G、H b A 1 c、TN F-、h s-C R P、1 L-6、1 L-4呈负相关(P0.0 5);踝肱指数及白蛋白与HOX 1 3呈正相关(P0.0 5)。免疫组化结果显示,相较
4、于糖尿病非病足组与对照组,糖尿病足组的HO X 1 3表达显著降低,较于空白组,HOX 1 3敲除组TN F-、h s-C R P、1 L-6、1 L-4显著偏高,过表达组显著降低(均P0.0 5)。较于空白组,敲除组C a s p a s e-3、C a s p a s e-9、B a x蛋白表达显著偏高,过表达组显著偏低(均P0.0 5),HO X 1 3敲除组B c l-2蛋白表达显著偏低,过表达组显著偏高(P0.0 5)。流式细胞仪检测细胞凋亡结果表明HO X 1 3敲除明显增加细胞凋亡(P0.0 5)。C C K-8实验结果表明,过表达组细胞增殖状态较敲除组与空白组显著增高(P0.0
5、 5)。较于空白组,敲除组E D U标记的细胞数目明显降低,过表达组明显升高(均P0.0 5)。结论 HOX 1 3在糖尿病足患者组织中表达显著降低,HO X 1 3高表达可促进糖尿病足成纤维细胞的增殖,抑制其凋亡,并抑制炎症因子的表达。HOX 1 3可能与糖尿病足疾病发生和疾病进展有关。【关键词】糖尿病足;同源框蛋白1 3;增殖;凋亡;炎症【中图分类号】R 5 8 7.1 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 4 基金项目:国家重点研发计划项目(2 0 1 9 Y F C 1 7 0 9 3
6、0 2)引用本文:刘宇彪,周花玩,鞠上.HO X 1 3与糖尿病足患者临床特征的相关性及对细胞增殖、凋亡及炎症的影响J.西部医学,2 0 2 3,3 5(1 0):1 4 2 5-1 4 3 2.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 4C o r r e l a t i o n b e t w e e n h o x 1 3 a n d c l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f p a t i e n t s w i t h d i a b e t e s
7、 f o o t a n d i t s e f f e c t o n c e l l p r o l i f e r a t i o n,a p o p t o s i s a n d i n f l a mm a t i o nL I U Y u b i a o1,Z H O U H u a w a n2,J U S h a n g3(1.D e p a r t m e n t o f S u r g e r y,S o u t h A r e a o f G u a n ga n m e n H o s p i t a l S o u t h C a m p u s,C h i n a
8、 A c a d e m y o f C h i n e s e M e d i c a l S c i e n c e s,B e i j i n g 1 0 2 6 0 0,C h i n a;2.T i a n c h e n g J i n x i a n g T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e C l i n i c,B e i j i n g 1 0 2 6 0 0,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f P e r i p h e r a l B l o o d V e s s e
9、 l s,D o n g z h i m e n H o s p i t a l,B e i j i n g U n i v e r s i t y o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,B e i j i n g 1 0 2 6 0 0,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f H o m e o b o x(HOX)p r o t e i n 1 3 o n c e l l
10、p r o l i f e r a t i o n a n d a p o p t o s i s i n p a t i e n t s w i t h d i a b e t i c f o o t.M e t h o d s 7 9 p a t i e n t s w e r e s e l e c t e d a s t h e r e s e a r c h o b j e c t,w h i c h w e r e d i v i d e d i n t o d i a b e t e s f o o t g r o u p(n=6 0),d i a b e t e s n o n
11、 d i s e a s e d f o o t g r o u p(n=1 9),a n d h e a l t h y c o n t r o l g r o u p(n=6 0).T h e c l i n i c a l c h a r a c-t e r i s t i c s a n d c o r r e l a t i o n o f HOX 1 3 a m o n g t h e t h r e e g r o u p s w e r e c o m p a r e d a n d a n a l y z e d.T h e e x p r e s s i o n o f H
12、OX 1 3 a-5241西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0m o n g t h e t h r e e g r o u p s w a s d e t e r m i n e d b y i mm u n o h i s t o c h e m i s t r y.W e s t e r n b l o t w a s u s e d f o r HOX 1 3 p r o t e i n e x p r e s s i o n.C e
13、l l p r o l i f e r a t i o n w a s d e t e c t e d b y C C K-8 a n d E DU a s s a y.C e l l a p o p t o s i s w a s d e t e c t e d b y f l o w c y t o m e t r y.I n v i t r o c e l l m o d e l s w e r e c o n s t r u c t e d a n d d i v i d e d i n t o HO X 1 3 k n o c k o u t g r o u p(t r a n s
14、f e c t e d w i t h HOX 1 3 p l a s m i d),HO X 1 3 o v e r e x-p r e s s i o n g r o u p(t r a n s f e c t e d w i t h HO X 1 3 p l a s m i d),a n d b l a n k g r o u p(w i t h o u t a n y t r e a t m e n t).R e s u l t s A g e,d i s e a s e c o u r s e,w h i t e b l o o d c e l l c o u n t,F G,H b
15、 A 1 c,T N F-,h s-C R P,1 L-6,1 L-4 i n n o n-d i s e a s e d f o o t g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h o s e i n d i a b e t i c f o o t g r o u p(P0.0 5).A g e,d i s e a s e c o u r s e,w h i t e b l o o d c e l l c o u n t,F G,H b A 1 c,T N F-,h s-C R P,1 L-6,1 L-4
16、 i n h e a l t h y c o n t r o l g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h o s e i n n o n-d i s e a s e d f o o t g r o u p(P0.0 5).T h e a n k l e-b r a c h i a l i n d e x,h e m o g l o b i n a n d a l b u m i n i n n o n-d i s e a s e d f o o t g r o u p w e r e s i g n i
17、 f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e i n d i a-b e t i c f o o t g r o u p(P0.0 5).T h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n o f HO X 1 3 w a s n e g a t i v e l y c o r r e l a t e d w i t h a g e,d i s e a s e c o u r s e,w h i t e b l o o d c e l l c o u n t,F G,H b A 1 c,TN F-,h s-C R
18、P,1 L-6,1 L-4(P0.0 5).A n k l e-b r a c h i a l i n d e x a n d a l b u m i n w e r e p o s i-t i v e l y c o r r e l a t e d w i t h HOX 1 3(P0.0 5).I mm u n o h i s t o c h e m i c a l r e s u l t s s h o w e d t h a t HO X 1 3 e x p r e s s i o n w a s s i g n i f i c a n t-l y d e c r e a s e d
19、i n d i a b e t i c f o o t g r o u p c o m p a r e d w i t h n o n-d i s e a s e d f o o t g r o u p a n d h e a l t h y c o n t r o l g r o u p.C o m p a r e d w i t h b l a n k g r o u p,TN F-,h s-C R P,1 L-6 a n d 1 L-4 w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r i n HO X 1 3 k n o c k o u t g
20、 r o u p(P0.0 5),w h i l e s i g n i f i c a n t l y l o w e r i n o v e r e x p r e s s i o n g r o u p(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h b l a n k g r o u p,t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n s o f C a s p a s e-3,C a s p a s e-9 a n d B a x w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r i n HOX
21、 1 3 k n o c k o u t g r o u p,a n d s i g n i f i c a n t l y l o w e r i n o v e r e x p r e s s i o n g r o u p(P0.0 5),t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n o f B c l-2 i n HO X 1 3 k n o c k o u t g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r(P0.0 5),a n d s i g n i f i c a n t l y h i
22、g h e r i n o v e r e x p r e s s i o n g r o u p(P0.0 5).F l o w c y t o m e t r y s h o w e d t h a t HO X 1 3 k n o c k o u t s i g n i f i c a n t l y i n-c r e a s e d c e l l a p o p t o s i s(P0.0 5).T h e r e s u l t s o f C C K-8 e x p e r i m e n t s h o w e d t h a t t h e p r o l i f e r
23、 a t i o n s t a t e o f HOX 1 3 o v e r-e x p r e s s i o n g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d c o m p a r e d w i t h t h a t o f o v e r k n o c k o u t g r o u p a n d b l a n k g r o u p(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h b l a n k g r o u p,t h e n u m b e r o f E DU l a
24、b e l e d c e l l s i n k n o c k o u t g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5),w h i l e t h a t i n o v e r e x p r e s s i o n g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n T h e e x p r e s s i o n o f HOX 1 3 i s s i g-n i f
25、i c a n t l y d e c r e a s e d i n t h e t i s s u e s o f d i a b e t i c f o o t p a t i e n t s.H i g h e x p r e s s i o n o f HO X 1 3 c a n p r o m o t e t h e p r o l i f e r a t i o n o f d i a b e t i c f o o t f i b r o b l a s t s,i n h i b i t t h e i r a p o p t o s i s,a n d i n h i b
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