ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中的应用进展.pdf
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1、中国科技期刊数据库 医药 193 ELISA 法在诊断梅毒螺旋体感染中的应用进展 樊晓云 河池市宜州区疾病预防控制中心,广西 河池 546300 摘要:摘要:梅毒为性传播疾病,是由具有梅毒螺旋体(TP)感染引起的,症状复杂、病程久、危害大等特点,容易误诊、漏诊。因此早期诊断对梅毒传播具有重要作用。随着发病率增加,TP 感染已成为公共卫生问题,其防治在于早发现、早诊疗。近几年诊断 TP 感染依据为病原体、临床表现等,未建立出体外培养方式。随着免疫学、生物学发展,敏感度、特异度、准确度高的 TP 感染诊断技术不断更新;最常见的是酶联免疫吸附法(ELISA 法),但其在 TP 感染中的应用报道较少。
2、对此,本文就近几年 ELISA 法用于 TP 感染的价值进行探讨。关键词:关键词:梅毒螺旋体感染;酶联免疫吸附法;ELISA 原理;敏感度;特异度;预测值 中图分类号:中图分类号:R759 梅毒作为常见传染类病症,发病率高,会对患者身心造成危害,按照病情不同可分为期。随病情发展和分期增加,其传染性会增强,对机体的破坏也会更严重1。其中期与期对机体损伤较为轻微,传染性较低;若在期未得到治疗就会进展为期,该阶段的传染性较强,对机体损伤严重,甚至出现死亡情况。目前临床对梅毒检验以 TPPA 为主,是 TP 感染诊断金标准,但检测周期长,价格贵,不适用在大量样本筛查中2。ELISA 法为新型检测方式,
3、已被广泛用于临床指标检测中,具有取样少、操作简单、可实现自动化检验等优点,可用于大量样本筛查中,且准确性较高。本文就近几年 ELISA 法诊断 TP 感染进展实行综述。1 TP 感染 梅毒属于慢性疾病,患病初期以皮肤、生殖器官侵犯为表现,随病情迁延会累及全身皮肤与器官,影响生命质量3。据调查,近年梅毒发病呈升高趋势,许多学者又开始重新关注梅毒预防、诊疗、复发研究中。其发生机制较为复杂,TP 通过逃避免疫监控致病,复杂的免疫变化是梅毒未得到良好控制的因素,同样也困扰着医生治疗。研究指出4,梅毒清除与机体免疫存在联系,在感染早期阶段,机体免疫反应中的细胞免疫占主地位,以 T 细胞介导的变态反应为主
4、,该细胞在梅毒发展中有重要作用,也是引起组织损伤以及症状的原因。TP 感染分 3 期,1 期症状为硬下疳,多在肛门、大小阴唇等部位发病,还会发生淋巴结肿大情况;2 期会出现梅毒疹症状,这种皮疹会侵犯心血管与皮肤,血清中 TP 阳性率高达 100%;3 期以皮肤黏膜损害为表现,还有患者会出现动脉瓣闭锁不全情况,形成因素是 TP 侵犯心血管系统而造成。2 ELISA 法的原理及方法 2.1 原理 ELISA 为一种检测技术,该技术的出现是为了满足需求或解决关键、瓶颈类问题5。其作为免疫诊断技术,已成功用于传染病、寄生虫病等诊断中,依据使用结果认为 ELISA 具有简单、灵敏、特异、稳定等优点,不仅
5、适用在临床标本检查中,也能用于流行病学调查中;同时可以测定抗体与循环抗原,是早期诊断较好的方法6。该方法原理为:抗原/抗体能通过共价键和酶连接后形成结合物,这种结合物能保持酶活性与免疫学;抗原/抗体可物理性吸附在固相载体的表面,可能是蛋白与聚苯乙烯疏水性互相吸附,并保持免疫活性;酶结合物与对应抗原/抗体结合之后,能依据加入底物颜色的反应去判断免疫反应是否存在,且颜色深浅与标本中抗原/抗体成正比,所以底物显色程度能显示出结果。2.2 方法(1)间接法:用包被缓冲液稀释抗原至1-10ug/ml,每孔加 0.1ml,在 4过夜,次日洗涤三次;加入待检样本 0.1ml 在上述包被反应孔内,放置在 37
6、孵育 1h 后洗涤;在反应孔中加入稀释的0.1ml 第二抗体,37孵育 60min 左右后洗涤,最后用DDW 洗涤;将配制的 0.1ml 底物溶液加入反应孔中,37孵育 30min;反应孔内加入 0.05ml 硫酸;在中国科技期刊数据库 医药 194 白色背景上用肉眼观察结果,反应孔内颜色深代表阳性强,无色或较浅为阴性,以+、号表示。(2)双抗体夹心法:用 0.05MPH9 缓冲液将抗体稀释为1-10ug/ml 蛋白质含量,在每个反应孔内加 0.1ml,4过夜,次日去除孔内溶液,洗涤 3 次,每次 3min;在上述包被反应孔内加入 0.1ml 待检样本,37孵育1h 后洗涤;在反应孔内加入 0
7、.1ml 新鲜的酶标抗体,37孵育1h左右并洗涤;其余步骤与上述一致。(3)竞争法:将抗体吸附在固相载体表面,加入酶标抗原、待测抗原,加底物,对照孔和样品孔底物降解量差=抗原量。(4)直接法:抗原吸附在载体表面,加入酶标抗体形成复合物,加底物,底物降解量=抗原量。3 ELISA 法在 TP 感染中的应用 3.1 诊断准确度 诊断准确度指的是试验个体中,诊断试验可以精准划分患者与非患者百分比,反映出诊断试验能正确诊断患者和非患者的能力。准确度=(真阳+真阴)/(真阳+假阴+真阴+假阳)100%。张建燕7学者,选 74 例 TP 感染患者分对照组(TRUST 检验)与观察组(ELISA 检验),各
8、 37 例;结果显示,观察组诊断准确率高。这说明,ELISA 检验为酶免疫测定方式,可通过标记固相表面的抗原/抗体,吸除游离成分,观察底物颜色,从而判断免疫反应,具有范围广、操作简单等优势,其诊断 TP 感染的效果较理想,可提高诊断准确度。方春生8学者,取 20 例 TP 感染患者,用 ELISA法诊断,对比其与 TRUST 法的准确性;结果显示,ELISA法灵敏度、特异度、准确度、阳性与阴性预测值均优。这说明 ELISA 法采用的诊断技术与基因技术更先进,能明显提高 TP 感染诊断准确性,值得推广。宋胜伟9等学者,取 86 例疑似 TP 感染患者,均采取 ELISA 法与 TRUST 法检验
9、;结果显示,ELISA 法阳性检出率、准确度等均高。这说明,ELISA 法在 TP 感染监测中应用价值显著,准确度、检出率等均高,利于评估预后,为临床治疗提供依据。3.2 敏感度 敏感度是指在患者中,用该方法得到的阳性结果百分比,可反映出诊断试验正确识别能力;也是诊断重要指标,值越高表示诊断准确性越高,但不能只依据敏感度进行诊断,还需结合其他因素综合判定。敏感度=真阳/(真阳+假阴)100%。邬冬冬10学者,取 168 例疑似 TP 感染患者,均进行 TPPA、ELISA、TRUST 检查,将 TPPA 作为金标准,统计 ELISA、TRUST 检查结果,对比其诊断效能;结果显示,168 例疑
10、似患者,ELISA 检出 133 例阳性,TRUST检出 135 例阳性;ELISA 敏感度、特异度、准确度等均高。通过结果说明,ELISA 法能提高诊断效能,减少误诊、漏诊情况,为临床诊断提供信息支持,利于临床治疗指导,可作为准确、快速的检测方式在临床推广。其是通过底物颜色变化判断免疫反应,是一种抗原特异性与酶敏感性结合产生的高特异、敏感的检测方法,不需要使用特殊设备,诊断价值高。迟延芳11学者,取 70 例疑似梅毒患者,均采取ELISA、TPPA 检测;结果显示,ELISA+TPPA 检测的灵敏度、特异度等均高于单项检测。这就得出,ELISA、TPPA 是常用血清检测方法,其中 TPPA
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