LncRNA MRPL39通过海绵吸附miR-130靶向PTEN调控人肺癌细胞的迁移和侵袭.pdf
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1、第 卷第 期 年 月健 康 研 究.收稿日期:基金项目:年度金华市重点科学技术研究计划项目()作者简介:范庆浩()男浙江金华人本科主任医师健康理论与机制研究:./.范庆浩鲍献荣赵涵.通过海绵吸附 靶向 调控人肺癌细胞的迁移和侵袭.健康研究():.通过海绵吸附 靶向 调控人肺癌细胞的迁移和侵袭范庆浩鲍献荣赵 涵(金华市人民医院 心胸外科浙江 金华)摘要:目的 探究 对人非小细胞肺癌()迁移和侵袭的影响及机制 方法 采用 法检测肺癌及癌旁组织中 和 的表达构建低表达 的肺腺癌 细胞株 法、小室实验检测细胞增殖、迁移和侵袭双荧光素酶报告基因验证 与 靶向关系并评价低表达 对裸鼠成瘤的影响 结果与癌旁
2、组织比较肺癌组织中 升高 降低与 组比较 组细胞中、细胞存活率、钙黏素和波形蛋白表达、移植瘤体积及重量明显降低迁移细胞数和侵袭细胞数减少 钙黏素表达升高差异均有统计学意义(.)双荧光素酶报告基因检测显示 与 存在靶向关系干扰 表达可部分逆转沉默 对细胞增殖、迁移和侵袭的影响及上皮间质转化转移和第 号染色体丢失的磷酸酶基因()表达的抑制作用 结论敲低 可抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力可能与海绵吸附 调控 表达有关关键词:非小细胞肺癌长链非编码 侵袭中图分类号:.文献标志码:文章编号:()():().().().().:非 小 细 胞 肺 癌()是肺癌的主要类型目前尚缺乏持续有效的治疗方案从分
3、子生物学层面挖掘新型治疗靶标将有重要的临床意义 长链非编码()对肿瘤的发生发展有重要的调控作用 研究表明 可靶向 抑制胃癌细胞的增殖 前期通过检索 数据库中 肺癌组织与正常肺组织的 测序芯片数据(:)发现 在 中表达下降 等研究也显示低表达 与 患者不良预后密切相关 但 在 中的上游调控机制尚未阐明 故本研究检测 和 在 组织标本中的表达水平并在细胞水平和动物水平验证 对 及 的影响拟探究 在 中是否可能靶向 促进疾病的发生发展 资料与方法 临床资料纳入 年 月 年 月于我院心胸外科首次确诊、需手术切除的 患者 例术中留取癌组织和癌旁组织患者术前未接受过其他抗肿瘤治疗 其中男 例女 例年龄 岁
4、平均()岁病理类型:鳞癌 例腺癌 例其他 例 分级:级 例级 例级 例级 例 受试患者均知情同意本研究经医院伦理委员会审批 细胞与动物来源人肺腺癌细胞系 购自美国 细胞中心 只/裸鼠购自南京大学模式动物研究所 周龄体质量 动物许可证号:(苏)于特定无病原体条件下饲养 细胞培养与转染以 培养基(含 胎牛血清)、条件培养细胞隔天更换培养基待细胞生长至 时进行传代培养取对数生长期细胞分为空白组、组、组、组和 组根据脂质体(美国 公司)说明书进行转染空白组不做转染处理 组、组、组和 组分别将杂序、无意义小分子阴性对照片段和 抑制剂(由上海吉凯公司合成)转入细胞转染 后收集细胞用于后续实验 法检测组织及
5、细胞中 和 表达 采用 法提取组织及细胞中总测定/值取合格样本进行 合成和 扩增逆转录试剂盒和 购自日本 公司 扩增条件:共 个循环 以 为内参法半定量计算 和 表达 法检测细胞增殖收集转染细胞调整密度为 个/接种 孔板正常培养 后加入 试剂(上海碧云天公司)/孔避光培养 于 处检测各孔吸光度值()计算细胞存活率(样本孔/空白孔)小室实验检测细胞迁移和侵袭收集转染细胞调整密度为 个/接种小室上室其中侵袭实验中小室上室用基质胶包被迁移实验不作此操作下室添加含有 胎牛血清培养基建立迁移/侵袭模型培养 拭去上室内残留细胞和或基质胶固定后用 结晶紫染色光镜下计数迁移细胞数和侵袭细胞数(个随机视野)双荧
6、光素酶报告基因验证 与 靶向关系通过在线生物学软件 预测 与 的潜在结合位点信息委托上海吉 凯 公 司 合 成 野 生 型 载 体()和突变型 载体()健 康 研 究 年分别将上述载体、转染细胞最后收集细胞检测荧光素酶活性 蛋白印迹法检测细胞和组织中上皮间质转化()标志物和第 号染色体丢失的磷酸酶基因()表达 添加细胞裂解液提取组织和细胞中总蛋白水浴变性后各组取 蛋白进行电泳设置 、跑浓缩胶、跑分离胶转膜后加入 脱脂牛奶室温下封闭 再分别加入 钙黏素()、钙黏素()、波形蛋白()、和 抗体(美国 公 司)稀 释 比 为 孵育过夜再加入 稀释的辣根过氧化物酶标记蛋白二抗(上海碧云天公司)下孵育
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