lncRNA SNHG4_miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响.pdf
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1、中西医结合肝病杂志 年第 卷第 期:./.基金项目:广西自然科学基金项目(.)通讯作者:./对 细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响贺 娟 熊明月 谢喜科 易廷庄.右江民族医学院研究生院(广西 百色).百色人民医院血液科.右江民族医学院附属医院肿瘤科摘 要 目的:探究长链非编码()调控 对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响 方法:检测肝癌细胞(、)及永生化正常肝细胞 中 和 表达水平 将 细胞分为 组(转染)、组(转染)、组(转染)、组(转染)、组(共转染 与)、组(共转染 与)检测 和 表达水平 法检测细胞增殖流式细胞术检测细胞凋亡 法检测、蛋白表达 法检测、表达水平双荧光素酶报告实验验证 和 靶
2、向关系 结果:与永生化正常肝细胞 比较肝癌细胞、内 表达水平增加(.)表达水平降低(.)沉默 或过表达 可降低 细胞活性降低 细胞中 蛋白、蛋白、表达水平(.)增加细胞凋亡率上调 蛋白表达(.)靶向负调控 的表达抑制 可逆转沉默 对 细胞增殖、凋亡和免疫因子表达的影响 结论:可靶向负调控 抑制 细胞增殖和免疫因子表达促进细胞凋亡关键词 肝癌细胞增殖凋亡免疫因子中图分类号 文献标志码 /.().:.:().()()()()()().:(.)(.)(.).(.).中西医结合肝病杂志 年第 卷第 期 .:.:肝癌是比较常见的恶性肿瘤其死亡率、发病率居高不下外科手术切除是肝癌治疗的主要途径但是术后癌细
3、胞复发、转移依然较高这也是导致肝癌预后不良的原因 肝癌细胞异常增殖分化、转移及凋亡阻碍是肝癌发生的原因免疫逃避也是影响其恶性进展的原因这些免疫系统可以识别癌细胞通过调动免疫反应进而杀死肿瘤细胞以达到抗肿瘤的目的 长链非编码()一种具有多功能特征的非编码 在不同组织及细胞内差异表达不仅与肿瘤细胞增殖、凋亡等过程有关还与肿瘤免疫逃避有关 研究报道显示 可参与肿瘤恶性进展在结直肠癌中表达上调 可通过调控 表达抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和免疫逃避及诱导细胞凋亡 有报道发现 在肝癌组织内高表达与组织学分级、肿瘤分期、生存率相关可作为肝癌预后独立因子但其对肝癌细胞的具体作用 机 制 不 清 楚 在
4、线 数 据 库 预 测 显 示 是 靶基因有报道显示 可作为肝癌抑癌基因 可通过靶向负调控 抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡且与免疫相关分子呈正相关 关于 能否调控 对肝癌细胞的研究未经报道鉴于此本研究主要探究 可能通过调控 对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响 材料与方法.细胞和主要试剂 人肝癌细胞(、)、人永生化正常肝细胞()购于美国 公司 试剂盒、试剂盒、逆转录试剂盒购于 公司胎牛血清、培养基购于美国 公司、引物购于上海吉玛公司 试剂盒购于大连宝丰生物公司 试剂盒、凋亡试剂盒购于上海碧云天公司 裂解液、双荧光素酶报告基因试剂盒、试剂盒、化学发光试剂购于北京索莱宝公司 抗体、抗体、抗体、偶联二抗
5、 购于美国 公司 试剂盒、试剂盒购于北京达科为生物有限公司.细 胞 培 养、分 组 人 肝 癌 细 胞(、)、均培养在含有胎牛血清的 培养基内置于 、培养箱内培养 取对数生长期 细胞接种于 孔板中细胞融合为 时参照 试剂盒说明书将、与、与 转染细胞内 更换细胞培养液分别记为 组、组、组、组、组、组.法检测、表达水平法分离肝癌细胞(、)、以及各组 细胞(培养 )内总 然后合成 模板用 试剂盒在 仪器上进行扩增反应 方法计算、表达水平以 和 作为内参 正向引物:反 向 引 物:正向引物:反 向 引 物:正向 引 物:反 向 引 物:正向引物:反 向 引 物:.法检测细胞活性将各组 细胞以 个接种于
6、 孔板中培养 后加 试剂(/孔)继续培养 用酶标仪检测 处吸光度值()细胞活性()实验组/对照组.流式细胞术检测细胞凋亡各组 细胞培养 后用 清洗加胰酶消化后使用结合缓冲液 制成单细胞悬液并加入 的 和 试剂避光反应 最后加 结合缓冲液上流式细胞仪检测细胞凋亡率.法检测、蛋白表达使用 裂解液从各组 细胞内提取细胞总蛋白并进行定量分析按照 法进行用 凝胶分离样品()分离结束转移 膜上 封闭在脱脂奶粉中.与一抗(稀释)、(稀释)、(稀释)、(稀释)下过夜次日 下与 偶联二抗(稀释)孵育.加化学发光试剂使其显色曝光 用 分析蛋白条带灰度值.法检测、表达水平各组 细胞培养 离心后按照 试剂盒、试剂盒操
7、作步骤检测上清液中、表达水平.双荧光素酶报告实验验证 和 靶向关系 在线数据库预测显示 与 存在互补的结合位点并构建 野生型、突变型质粒将其克隆至 载体上即为 、然后分别与 中西医结合肝病杂志 年第 卷第 期、共转染至 细胞内在 孔板中进行孵育 收集细胞使用双荧光素酶报告基因试剂盒检测各组荧光素酶活性 将、转染 细胞内培养 按照 方法检测、表达水平.统计学方法 采用统计学软件 .处理数据计量资料以 表示多组间比较采用单因素方差分析两组间比较采用 检验 .为差异有统计学意义 结果.肝癌细胞 和 中的表达与 细胞比较肝癌细胞、和 内 表达水平显著增加(.)表达水平显著降低(.)其中 细胞 和 表达
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