![点击分享此内容可以赚币 分享](/master/images/share_but.png)
CD147阳性胃癌肿瘤微环境免疫特征分析.pdf
《CD147阳性胃癌肿瘤微环境免疫特征分析.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《CD147阳性胃癌肿瘤微环境免疫特征分析.pdf(7页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、论著 139肿瘤综合治疗电子杂志 2023 年第 9 卷第 2 期【摘要】目的通过分析肿瘤微环境中免疫细胞的表型与丰度,研究CD147阳性胃癌的临床病理特征与免疫特征。方法收集2014年7月至2019年12月于北京大学肿瘤医院消化肿瘤内科就诊的80例胃腺癌患者的肿瘤组织标本,通过多重免疫荧光原位技术检测肿瘤微环境中的16种蛋白质,采用计算机辅助图像分析技术识别丰富的细胞表型并计算各类细胞亚型的密度。在此基础上,分析CD147阳性胃癌患者免疫细胞密度与胃癌临床病理亚型的关联,比较CD147阳性与阴性胃癌肿瘤微环境中免疫细胞丰度差异。结果较高的CD147阳性细胞密度与晚期胃癌以及联合阳性评分(co
2、mbined positive score,CPS)5相关。生存分析表明,CD147阴性胃癌组较阳性胃癌组具有更长的中位生存期(37.57个月 24.63个月;P 0.006)。免疫细胞亚型分析表明,耗竭性CD8+T细胞亚型(CD8+TIM-3+T细胞和CD8+LAG-3+T细胞)、CD4+T细胞亚型(CD4+CTLA-4+T细胞、CD4+FoxP3+T细胞和CD4+FoxP3+CTLA-4+T细胞)、巨噬细胞与中性粒细胞在CD147阳性胃癌组中具有更高的密度(均P 0.05)。结论CD147阳性胃癌患者相对CD147阴性患者预后较差。CD147阳性胃癌肿瘤微环境中富含免疫抑制性细胞成分。【关
3、键词】胃癌;CD147;肿瘤微环境;预后Analysis of immune features of tumor microenvironment in CD147-positive gastric cancerJia Keren,Xie Yi,Wang Yakun,Zhang Cheng,Qi Changsong,Shen Lin,Chen Yang(Department of Gastrointestinal Oncology,Key Laboratory of Carcinogenesis and Translational Research(Ministry of Education)
4、,Peking University Cancer Hospital&Institute,Beijing 100142,China)Corresponding author:Chen Yang,E-mail:yang_chenbjcancer.org【Abstract】ObjectiveTo study the clinicopathological features of CD147-positive gastric cancer and potential mechanisms by analyzing the phenotype and abundance of cell compone
5、nts in the tumor microenvironment.MethodThe pre-treatment tumor tissue samples of 80 patients who suffered from gastric cancer and were treated in Peking University Cancer Hospital from July 2014 to December 2019 were collected.The 16 proteins in the tumor microenvironment were detected in situ by m
6、ultiplex immunofluorescence.Computer-aided image analysis techniques were used to identify complex cell phenotypes and calculate the density of various cell subtypes.Then,the relationship between the density of CD147-positive cells and the clinicopathological subtypes of gastric cancer was analyzed,
7、and the densities of immune cell subsets in the tumor microenvironment of CD147-positive and negative gastric cancer were compared.ResultThe higher density of CD147-positive cells was also associated with advanced gastric cancer and combined positive score(CPS)5.Survival analysis showed that CD147-n
8、egative gastric cancer group had a longer median survival than that in CD147-positive gastric cancer group(37.57 months vs.24.63 months;P 0.006).Immune cell subtype analysis revealed that the densities of exhausted CD8+T cell subtypes(CD8+TIM-3+T cells and CD8+LAG-3+T cells),CD4+T cell subtypes(CD4+
9、CTLA-4+T cells,CD4+FoxP3+T cells,and CD4+FoxP3+CTLA-4+T cells),macrophages and neutrophils were higher in CD147-positive gastric cancer group than those in CD147-negative gastric cancer group(all P 0.05).ConclusionCD147-positive gastric cancer patients have inferior survival compared with CD147-nega
10、tive gastric cancer patients.CD147-positive gastric cancer harbors an immunosuppressive tumor microenvironment.【Keywords】Gastric cancer;CD147;Tumor microenvironment;PrognosisCD147阳性胃癌肿瘤微环境免疫特征分析郏科人,谢意,王雅坤,章程,齐长松,沈琳,陈杨(北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所消化肿瘤内科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142)基金项目:国家自然科学基金青年科学基金项目(8220
11、3881);国家自然科学基金重大研究计划(91959205);北京市自然科学基金面上项目(7222021)通信作者:陈杨E-mail:yang_chenbjcancer.org胃癌的发病率和死亡率均位居我国恶性肿瘤第3位1。胃癌的进展和耐药受到肿瘤微环境中各种成分的影响,包括肿瘤组织中的非癌成分及其通过分泌、代谢等途径产生的各类物质2。在肿瘤发生的早期阶段,肿瘤微环境中的多种成分可以发挥抑癌作用。但是,随着肿瘤的发展,多种因素的作用DOI:10.12151/JMCM.2023.02-12肿瘤综合治疗电子杂志 2023 年第 9 卷第 2 期140 论著导致肿瘤免疫耐受性增加,肿瘤微环境逐渐从抑
12、癌作用转化为促进肿瘤生长,并参与肿瘤的免疫逃逸3。越来越多的证据表明肿瘤微环境的免疫特征是胃癌异质性的重要成因,并在预测免疫治疗反应性和长期预后方面发挥作用3-5。细胞外基质金属蛋白酶诱导剂(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)也被称作CD147,是一种在胃癌中上调表达的跨膜糖蛋白,可以通过激活肿瘤细胞表面的金属蛋白酶促进胃癌细胞的增殖、侵袭和转移6-7。尽管既往研究报道了CD147表达水平与胃癌临床病理特征的相关性,但CD147与胃癌肿瘤微环境免疫特征的关联仍不清楚。因此,本研究基于80例胃癌患者的组织标本,采用多重免
13、疫荧光原位技术检测肿瘤微环境中的蛋白分子,并应用计算机辅助图像处理技术定量分析免疫细胞的丰度,旨在探索CD147阳性胃癌的免疫特征,为进一步的研究提供临床前结果。1 资料与方法1.1 入组标准和患者队列 本研究纳入2014年7月至2019年12月于北京大学肿瘤医院消化肿瘤内科就诊的80例胃腺癌患者,其中60例患者接受程序性死亡蛋白-1(programmed death protein-1,PD-1)PD-1/程序性死亡蛋白配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)抑制剂治疗,另外20例患者接受化疗。排除有梅毒、自身免疫性疾病或人类免疫缺陷病毒感染的患者。患者或其
14、法定监护人通过签署知情同意书同意参与本研究。组织样本和临床信息的采集与使用由北京大学肿瘤医院伦理委员会审核和批准(批件号:2020KT08)。用于多重免疫荧光分析的肿瘤组织从北京大学肿瘤医院病理科获取,由病理科医生检查并确保所有标本的病理类型为腺癌。参考既往研究,超过50%的肿瘤细胞为CD147阳性细胞的患者定义为CD147阳性8。总生存时间定义为从诊断到死亡或最后1次随访的时间。1.2 多重免疫荧光 使用多重免疫荧光原位技术检测CD8、PD-1、TIM-3、LAG-3、CD4、FoxP3、CTLA-4、PD-L1、CD68、STING、CD20、CD66b、CD147、PANCK、DAPI在
15、肿瘤组织中的原位表达及其空间分布(图1)。在切除后30 min内,将肿瘤组织浸入福尔马林固定24 48 h,随后进行脱水和石蜡包埋,并将每个含有肿瘤组织的石蜡块按照4 m厚度切片。将福尔马林固定、石蜡包埋的组织载玻片在60下熔化并脱水12 h,然后分别使用二甲苯和酒精对样品进行脱蜡和再水化。将石蜡载玻片置于pH 9.0的EDTA缓冲液或pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液中,并对整个系统进行热诱导抗原修复。使用X0909将切片封闭10 min,之后将载玻片与一抗和辣根过氧化物酶偶联的二抗连续孵育并进行酪胺信号放大,然后通过加热载玻片进行抗体剥离和抗原修复。2名病理科医生独立评估染色质量,以确保切片符合
16、后续分析的要求。1.3 图像扫描、区域分割、细胞识别与丰度定量 通过Mantra定量病理成像系统扫描染色后的组织切片,以获得载玻片的全视野明场和荧光图像;使用Phenochart软件从整个视野中选取肿瘤核心区域。随后,在肿瘤核心区域使用固定尺寸的选区(930 m700 m;20倍物镜)尽可能多地选择感兴趣区域。病理科医生检查每个感兴趣区域的成像质量,以确保所有感兴趣区域均可显示出适当的信号强度且相互无重叠。完成感兴趣区域的分割后,使用inForm图像分析软件对多光谱图像中的细胞进行分割和注释。首先,记录来自未染色切片的组织自发荧光光谱并作为对照。其次,使用PANCK荧光信号将肿瘤核心区域分割为
17、肿瘤和间质部分。在单染载玻片上用特异性抗体标记的目标蛋白显示为荧光团,以此为基础构建光谱库,包括荧光团信号图1 多重免疫荧光检测示意图论著 141肿瘤综合治疗电子杂志 2023 年第 9 卷第 2 期和细胞核特征。inForm软件使用监督方法基于构建的光谱库对混合荧光图像中的每个DAPI染色细胞进行注释。在完成细胞注释与计数后,计算免疫细胞亚型的密度以及CD147阳性肿瘤细胞占比。免疫细胞亚型密度定义为在分析区域中所属类型的细胞数量与区域面积的比值;CD147阳性肿瘤细胞占比定义为在分析区域中CD147阳性肿瘤细胞数量与所有肿瘤细胞数量的比值。1.4 统计学方法 使用GraphPad Pris
18、m 9对数据进行预处理及统计分析。两组之间总生存时间的差异通过K-M方法和Log-rank检验进行评估。采用t检验比较两组之间密度平均值的差异;采用方差分析比较三组或更多组之间密度平均值的差异。分类资料使用例(%)表示,比较采用2检验。假设检验结果具有统计学意义的标准为P 0.05。2 结果2.1 胃癌患者的临床、病理及分子特征 80例胃癌患者的中位年龄为60岁,其中45例患者被分配至CD147阳性胃癌组,35例患者被分配至CD147阴性胃癌组(表1)。CD147阳性胃癌组患者中位年龄为61岁,CD147阴性胃癌组患者中位年龄为59岁。两组患者在性别、肿瘤位置、Lauren分型、分化、人表皮生
19、长因子受体2(human epidermal growth factorreceptor-2,HER-2)状态、错配修复(mismatch repair,MMR)状态和EB病毒感染状态方面比较差异均无统计学意义(均P 0.05,表1)。在肿瘤分期方面,CD147阳性胃癌组中期患者占66.7%,而CD147阴性胃癌组中期患者仅占25.7%(P 0.0003)。此外,还发现CD147阳性胃癌组中CPS评分 5分的患者显著多于CD147阴性胃癌组(68.9%42.9%;P 0.019)。2.2 CD147阳性细胞密度在胃癌临床病理亚组间的比较 中晚期胃癌(期和期)相较于早期胃癌(期和期)具有更高密度
20、的CD147阳性细胞(P 0.001)。此外,更高密度的CD147阳性细胞还与胃癌的远端转移和高CPS评分(5分)相关。按照性别、肿瘤位置、分化程度、Lauren分型、HER-2状态、MMR状态和EB病毒感染状态分组,发现不同亚组间CD147阳性细胞密度比较差异均无统计学意义(均P 0.05)。在80例患者中进行生存分析,结果表明CD147阴性胃癌组较CD147阳性胃癌组具有更长的中位生存期(37.57个月 24.63个月;P 0.006)(图2)。同时,在早期胃癌(期和期)和中晚期胃癌(期和期)的亚组分析中也发现CD147阴性胃癌组中位生存期具有延长趋势(38.50个月 19.93个月;P
21、0.0016;28.03个月 25.20个月;P 0.09)(图2)。2.3 CD147阳性胃癌肿瘤微环境中免疫细胞亚型的密度特征 CD147阳性胃癌组与CD147阴性胃癌组CD8+T整体细胞密度比较差异无统计学意义(P 0.830)(表2)。然而,免疫细胞亚型分析表明CD8+TIM-3+T细胞和CD8+LAG-3+T细胞在CD147表1 胃癌患者的临床、病理及分子特征组别男/女(例)肿瘤位置例(%)Lauren分型例(%)胃食管结合部非胃食管结合部肠型弥漫型混合型CD147阳性胃癌组(n 45)33/1214(31.1)31(68.9)22(48.9)10(22.2)13(28.9)CD14
22、7阴性胃癌组(n 35)28/710(28.6)25(71.4)16(45.7)8(22.9)11(31.4)20.4830.0600.088P0.4870.8060.957组别肿瘤分期例(%)分化例(%)期期期期中分化中低分化低分化CD147阳性胃癌组(n 45)0(0)1(2.2)14(31.1)30(66.7)13(28.9)12(26.7)20(44.4)CD147阴性胃癌组(n 35)3(8.6)8(22.9)15(42.9)9(25.7)10(28.6)10(28.6)15(42.9)218.8310.038P 0.0010.981组别HER-2状态例(%)PD-L1 CPS评分例
23、(%)MMR状态例(%)EB病毒感染状态例(%)阳性阴性 5分 5分pMMRdMMR阳性阴性CD147阳性胃癌组(n 45)11(24.4)34(75.6)31(68.9)14(31.1)41(91.1)4(8.9)5(11.1)40(88.9)CD147阴性胃癌组(n 35)11(31.4)24(68.6)15(42.9)20(57.1)28(80.0)7(20.0)5(14.3)30(85.7)20.4825.4592.0490.181P0.4880.0190.1520.670注:HER-2为人表皮生长因子受体2;PD-L1为程序性死亡蛋白配体-1;CPS为联合阳性评分;MMR为错配修复。
24、肿瘤综合治疗电子杂志 2023 年第 9 卷第 2 期142 论著图2 CD147在胃癌临床病理亚组中的表达情况分析注:A J分别为在不同肿瘤分期、远端转移情况、PD-L1 CPS评分、HER-2状态、性别、EB病毒感染状态、肿瘤位置、分化程度、MMR状态和Lauren分型中比较CD147阳性细胞密度。K为比较CD147阳性与阴性胃癌的总生存时间差异。L为在期和期患者中比较CD147阳性与阴性胃癌的总生存时间差异。M为在期和期患者中比较CD147阳性与阴性胃癌的总生存时间差异。*P 0.0001;*P 0.001;*P 0.01;ns为P 0.05。PD-L1为程序性死亡蛋白配体-1;CPS为
25、联合阳性评分;HER-2为人表皮生长因子受体2;MMR为错配修复;dMMR为错配修复缺陷;pMMR为错配修复正常。分期性别MMR状态Lauren分型生存曲线生存曲线生存曲线EB病毒感染肿瘤位置分化程度远端转移情况CPS评分HER-2状态AEIJKLMFGHBCD0.61.01.01.01.001.001.000.750.750.750.500.500.500.250.250.250000.81.01.00.80.81.01.01.00.40.60.60.60.60.60.60.80.80.80.40.40.40.40.40.40.60.60.60.80.80.80.20.20.20.20.20
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- CD147 阳性 胃癌 肿瘤 环境 免疫 特征 分析
![提示](https://www.zixin.com.cn/images/bang_tan.gif)
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。