2020-2022年眉山市猪群病毒性疫病流行病学调查.pdf

2023 年第年第 11 期（总第期（总第 316 期）期）试验研究试验研究 1 2020-2022 年眉山市猪群病毒性疫病流行病学调查 沈爱梅1，黄先奇1*，杨治聪1，刘 丽1，黄海燕1，叶 鹏1，赵文静2，张玉群2，郑 强3（1.四川省眉山市动物疫病预防控制中心，四川 眉山 620010；2.四川省仁寿县动物疫病 预防控制中心，四川 仁寿；3.四川省青神县动物疫病预防控制中心，四川 青神）摘要：为了解眉山市猪群病毒性疫病流行状况，2020-2022 年采集该市 7 个县（区）416 份病死猪口鼻肛混合拭子，采用荧光定量 RT-PCR/PCR 方法进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒 2 型（PCV2）、猪圆环病毒 3 型（PCV3）和猪细小病毒（PPV）核酸检测。结果显示，6 种病原的总体阳性率分别为 0.24%、2.16%、0%、39.42%、2.17%、2.17%；PRRSV-PCV2 双重感染率为 0.72%，PRRSV-PCV2-PPV 三重感染率为 0.24%。结果表明，眉山市猪群 PCV2 感染较为严重，CSFV、PRRSV、PCV3、PPV 感染水平较低，总体防控良好。关键词：猪群；病毒性疫病；流行病学调查 中图分类号：S858.28 文献标识码：A 文章编号：1007-1733（2023）11-0001-05 猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒（PCV）、猪细小病毒（PPV）是危害我国养猪业的重要病原，主要导致猪群免疫障碍、繁殖障碍、呼吸系统和消化系统损伤，生长抑制甚至死亡。其中，猪群发生圆环病毒感染现象备受关注。明确猪群主要病死因素，科学开展风险评估，有助于制定针对性、适用性更强的防控措施，保障生猪产业健康稳定发展。本调查于 2020年 8 月至 2022 年 4 月对眉山市 7 个县（区）416份病死猪口鼻肛拭子进行了 CSFV、PRRSV、PRV、PCV、PPV 核酸检测，以期为全市生猪疫病防控工作提供参考。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 样品种类 采集无害化处置环节病死生猪的口、鼻、肛合并拭子，放置于含 5 mL 病毒保存液的采样管中。1.1.2 样品来源 对 2020 年 8 月至 2022 年 4 月 期间 8 轮无害化环节采集病死生猪的口、鼻、肛合并拭子（每份样品以养殖户为单位进行混合）检测情况进行汇总，期间共采集眉山市 7 个县（区）口鼻肛混合拭子 416 份，详见表 1。1.1.3 主要试剂和仪器 磁珠法核酸提取试剂盒购自天隆生物科技有限公司；猪圆环病毒 2 型/伪狂犬病毒 GE 基因双重荧光 PCR 检测试剂盒、猪瘟/猪蓝耳病病毒高致病性变异株双重荧光 RTPCR 检测试剂盒、猪细小病毒荧光 PCR 检测试剂盒、猪圆环病毒 3 型荧光 PCR 检测试剂盒购自北京森康生物技术开发有限公司；猪繁殖与呼吸综合征病毒（通用型）和猪瘟病毒双重实时荧光RTPCR 检测试剂盒购自北京世纪元亨公司；全自动核酸提取仪 GeneRotex96 购自天隆生物科技有限公司；CFX96 荧光定量 PCR 购自美国伯乐公司。1.2 方法 1.2.1 核酸提取 从病毒管中取 200 L 口鼻肛混合拭子上清液，使用磁珠法核酸提取试剂盒和核酸全自动提取仪进行总核酸提取。提取程序扫 试验研究 基金项目：眉山市猪群主要病毒性疫病防控技术集成研究（2021YN01）*通讯作者 山东畜牧兽医山东畜牧兽医 2023 年第年第 44 卷卷 2 描说明书二维码导入，提取完成后进行核酸检测。1.2.2 核酸检测 使用各病原对应的荧光 RTPCR/PCR 检测试剂盒进行病原核酸检测，操作步骤按照试剂盒说明书进行。其中，2020 年 8 月至2022 年 1 月 PRRSV 的核酸检测使用猪瘟/猪蓝耳病病毒高致病性变异株双重荧光 RT-PCR 检测试剂盒，2022 年 3 月至 4 月 PRRSV 的核酸检测使用猪繁殖与呼吸综合征病毒（通用型）和猪瘟病毒双重实时荧光 RT-PCR 检测试剂盒。1.3 结果判定 根据各试剂盒说明书进行结果判定。阳性对照 Ct 值阳性临界值并出现典型扩增曲线，阴性对照无 Ct 值且无特定扩增曲线，试验结果成立。样品 Ct 值阳性临界值并出现典型扩增曲线，判为阳性；样品 Ct 值阳性临界值并出现典型扩增曲线，或者阳性临界值样品 Ct 值阴性临界值并出现典型扩增曲线，判为可疑，需重新提取总核酸，再次扩增后进行结果判定，结果为阳性或者仍然可疑，判为阳性；样品未出现特异性扩增曲线或者样品 Ct 值阴性临界值，判为阴性。2 结果 2.1 监测结果 所有检测的阳性对照、阴性对照均成立。416 份样品中共检出 CSFV 阳性 1 份，PRRSV 阳性 9 份，PRV 阳性 0 份，PCV2 阳性 164 份，总体阳性率分别为 0.24%、2.16%、0%、39.42%；46 份样品中共检出 PCV3 阳性 1 份，PPV 阳性 1份，总体阳性率分别为 2.17%、2.17%。全市不同区域猪群 6 种病原检测结果详见表 1，全市不同时间段 6 种病原检测结果详见表 2，全市不同区域 6 种病原混合感染情况详见表 3。表 1 眉山市不同区域猪群 6 种疫病的病原检测结果 县（区）CSFV PRRSV PRV PCV2 PCV3 PPV 阳性数/样品数（头）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）天府新区 0/41 0 0/41 0 0/41 0 28/41 68.29 0/6 0 0/6 0 东坡 0/60 0 1/60 1.67 0/60 0 20/60 33.33 0/5 0 0/5 0 彭山 0/30 0 0/30 0 0/30 0 9/30 30 0/2 0 0/2 0 仁寿 1/78 1.28 1/78 1.28 0/78 0 26/78 33.33 0/13 0 1/13 7.69 洪雅 0/68 0 0/68 0 0/68 0 23/68 33.82 0/8 0 0/8 0 丹棱 0/75 0 5/75 6.67 0/75 0 41/75 54.67 0/10 0 0/10 0 青神 0/64 0 2/64 3.13 0/64 0 17/64 26.56 1/2 50 0/2 0 合计 1/416 0.24 9/416 2.16 0/416 0 164/416 39.42 1/46 2.17 1/46 2.17 2.2 不同区域样品检出阳性病种数不同 2020 年 8 月至 2022 年 4 月，仁寿县样品检出 CSFV、PPRSV（两者阳性率均为 1.28%）、PCV2（阳 性 率 为 33.33%）、PPV（阳 性 率7.69%）4 个病种，青神县样品检出 PPRSV（阳性率为 3.13%）、PCV2（阳性率为 26.56%）、PCV3（阳性率 50.00%）3 个病种，东坡区、丹棱县样品检出 PPRSV（阳性率分别为 1.67%、6.67%）和 PCV2（阳性率分别为 33.33%、54.67%）2 个病种，眉山天府新区、彭山区和洪雅县样品检出 PCV2（阳性率分别为 68.29%、30.00%、33.82%）1 个病种，见表 1。2.3 不同病种阳性检出率存在差异 2020 年 8 月至 2022 年 4 月，全市样品PCV2 阳性检出率最高为 39.42%，阳性样本来源7 个区县，在 8 个监测时段均有检出；PRRSV 阳性检出率 2.16%，阳性样本来源 4 个区县，在 3个监测时段有检出；CSFV、PCV3、PPV 阳性检出率分别为 0.24%、2.17%、2.17%，阳性样本均来源 1 个区县，均在 1 个监测时段有检出；PRV2023 年第年第 11 期（总第期（总第 316 期）期）试验研究试验研究 3 阳性检出率为 0.00%，以上结果表明不同病种间阳性检出率差异较大，见表 1 和表 2。表 2 眉山市不同时间段猪群 6 种疫病的病原检测结果 时间段 CSFV PRRSV PRV PCV2 PCV3 PPV 阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）阳性数/样品数（头份）阳性率（%）2020.08 0/60 0 0/60 0 0/60 0 12/60 20/2021.01 0/22 0 2/22 9.09 0/22 0 11/22 50/2021.04 0/52 0 0/52 0 0/52 0 43/52 82.69/2021.06 0/62 0 0/62 0 0/62 0 36/62 58.06/2021.08 0/140 0 0/140 0 0/140 0 38/140 27.14/2022.01 0/34 0 0/34 0 0/34 0 10/34 29.41/2022.03 0/18 0 1/18 5.56 0/18 0 4/18 22.22 1/18 5.56 0/18 0 2022.04 1/28 3.57 6/28 21.43 0/28 0 10/28 35.71 0/28 0 1/28 3.57 合计 1/416 0.24 9/416 2.16 0/416 0 164/416 39.42 1/46 2.17 1/46 2.17 注：2020 年 8 月至 2022 年 1 月检测 PRRSV 高致病性变异株，2022 年 3 月至 2022 年 4 月检测 PRRSV 通用型。2.4 病毒混合感染阳性检出较低 所有样品共检出混合感染样品 4 份，其中，3 份为 PRRSV-PCV2 双重感染，1 份为 PRRSV-PCV2-PPV 三重感染，双重感染和三重感染率分别为 0.72%、0.24%，见表 3。表 3 眉山市不同区域猪群 6 种疫病混合感染情况 县（区）PRRSV-PCV2（份）PRRSV-PCV2-PPV（份）天府新区 0 0 东坡 1 0 彭山 0 0 仁寿 0 1 洪雅 0 0 丹棱 0 0 青神 2 0 合计 3 1 3 讨论 3.1 CSFV 防控成效显著 2020 年 8 月至 2022 年 4 月，全市 CSFV 总体感染率为 0.24%，且只在 1 个场点检出；四川省 2017 年 CSFV 感染率 6.29%1，2020 年感染率0%2，眉山市 CSFV 感染情况与全省同期处于较低水平，防控效果良好，发生区域性重大疫情可能性不大。3.2 PRRSV 感染普遍存在 2020 年 8 月至 2022 年 4 月，全市 PRRSV高致病性毒株阳性检出率为 0.54%，2022 年 3 月至 2022 年 4 月，PRRSV 通用型检出率为15.22%，表明 PRRSV 高致病性变异株不是本市流行优势毒株，这与四川省动物疫病预防控制中心在眉山市未检出高致病性变异株的结论相吻合3。本市 PRRSV 通用型阳性检出率与南充市 17.11%4、乐山市 15%1、凉山 14.29%1等吻合，2016-2017 年 四 川 PRRSV 阳 性 检 出 率22.1526.92%5，2018 年四川 PRRSV 阳性检出率 18.25%6，全省及眉山市 PRRSV 感染普遍存在。下一步，本市将持续跟踪 PRRSV 感染情况，并进一步做好分型鉴定，以期提供更精准防控指导。3.3 PCV 感染较为严重 2020 年 8 月至 2022 年 4 月，全市 PCV2 总体感染率为 39.42%，与四川省达州市 38.46%、巴中 40%、乐山 40%1基本吻合。2017、2018年，全省病死 猪 PCV2 阳性检出率分别为74.48%1、49.2%7，全省感染情况较为严重。近两年，全市 13 月 PCV2 平均阳性检出率为33.78%，48 月为 45.04%，呈现春夏季阳性检出率略高于秋冬季，这与已有报道相吻合7-8。通山东畜牧兽医山东畜牧兽医 2023 年第年第 44 卷卷 4 过分析近两年生猪病死率和 PCV2 阳性检出率，可以看出两者呈现正相关，PCV2 阳性率明显升高后，生猪病死率也随之明显上升，提示可通过开展 PCV2 日常监测预判疫病流行趋势，科学预警预报。眉山市 PCV3 阳性检出率 2.17%，低于全省平均水平 11.19%1，但这也有可能与本试验PCV3 检测次数和样本数偏少有关，后续将持续开展监测，获得更多的数据。3.4 未检出 PRV 感染 2020 年 8 月至 2022 年 4 月，本市病死猪PRV 阳性检出率 0%，与 2017 年四川省 13 个市州病死猪 PRV 阳性检出率 0%1，2020 年内江市病死猪 PRV 阳性检出率 0%一致9。2010、2011年，眉山市 PRV-gE 抗体阳性率分别为 1.7%10、3.5%11，说明猪 PRV-gE 基因缺失苗免疫效果确实，为本市猪伪狂犬病净化工作奠定良好基础。下一步眉山市将同步开展养殖场生猪感染抗体和核酸检测，准确掌握疫病动态。3.5 PPV 感染整体平稳 眉山市 PPV 阳性检出率为 2.17%，远低于四川省 2012 年 17.22%12以及 2021 年 40%13，这可能与监测频次和样本数偏少，以及本试验采集样品为病死猪口鼻肛拭子，未采集死胎、病弱胎组织以及脐带血液、胎衣、母猪分泌物等有关，导致试验结果与临床实际感染率有所偏差。3.6 混合感染情况 眉山市检出两种和两种以上病毒混合感染率为 0.96%，远低于全省混合感染率 32.52%1，内江 20.4%9，南充 13.82%4。这可能与本市 2020年 8 月至 2022 年 1 月采用高致病性变异株检测PRRSV 有关，未完全覆盖 PRRSV 所有毒株，导致检测结果与实际感染情况有偏差。本市混合感染均为 PRRSV、PPV 与 PCV2 混合感染，结果表明，上述混合感染会明显促进 PCV2 复制，从而强化 PCV2 的致病作用14-15。PRRSV 和 PCV2有免疫抑制作用，故本市规模养殖场在做好常规疫苗免疫的同时，更应从生物安全角度加强疫病防护。4 结论眉山市猪瘟、猪伪狂犬、猪细小病毒病流行情况平稳，猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病感染情况较为严重，建议市、县（区）疫病控制机构和养殖场（户）积极应对，做好疫病基础免疫的同时，着重提高养殖场生物安全水平，科学制定疫病净化方案，实现疫病防控效益最大化。参考文献 1 张毅,陈斌,邵靓,等.2017 年四川省猪群 5 种病毒性传染病流行病学调查J.畜牧与兽医,2018,50（9）:82-86.2 谢嘉宾,李淳,陈斌,等.2020 年四川省猪瘟流行情况调查J.畜禽业,2021,32（11）:11-12.3 邵靓,李春,梁璐琪,等.四川规模种猪场 5 种主要疫病的病原学检测J.四川畜牧兽医,2022,49（1）:27-29.4 王怀禹,陈俊,何子双,等.南充地区规模化猪场 4 种病毒性传染病的流行病学调查与分析J.黑龙江畜牧兽医,2020（1）:62-66.5 覃思楠,阮文强,陈新诺,等.2016 年-2017 年四川省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学调查J.动物医学进展,2017,38（12）:29-33.6 刘瀚扬,张毅,肖冉,等.2018 年四川地区猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 基因的分子流行病学调查研究J.中国畜牧兽医,2020,47（4）:1172-1182.7 李海全,万青山,王雪,等.四川省部分地区猪圆环病毒 2 型流行病学调查J.养猪,2018（2）:121-123.8 张治涛,李玉峰,姜平,等.猪圆环病毒 2 型感染的检测与流行病学调查J.中国兽医学报,2008,28（3）:227-231.9 雷明霞,徐凯,彭娟,等.2020 年秋冬季四川省内江市无害化处理病死猪 5 种病毒核酸检测J.中国动物检疫,2021,38（6）:26-30.10 程龙娇,朱玲,徐凯.四川省部分地区猪伪狂犬病病毒野毒感染的血清学调查J.黑龙江畜牧兽医,2010（8）:113-114.11 李淞,朱玲,赵玲.四川省部分地区猪场猪伪狂犬病野毒感染的血清流行病学调查J.养猪,2011（5）:92-93.12 徐君,郭万柱,陈杨,等.四川省 PPV 与 PCV2 的病原流行病学调查J.中国兽药杂志,2012,46（4）:44-47.13 徐富权,蒋运刚,黄朝冲.四川地区养猪场猪细小病毒病的（下转 7 页）2023 年第年第 11 期（总第期（总第 316 期）期）试验研究试验研究 7 外，对仔猪是否添加铁和硒，以及以何种方式添加，对仔猪料重比影响不大。表 5 仔猪生长性能指标测定结果 组别 平均断奶 体重（kg）平均 料重比 平均断奶 存活率（%）平均断奶 合格率（%）I 6.447 1.480 86.824 76.516 II 6.211 1.478 85.726 71.355 III 6.824 1.481 95.655 95.655 5.876 1.474 68.994 53.456 3 讨论与结论 铁是动物机体不可或缺的微量元素，也是体内合成血红蛋白和多种酶（如细胞色素氧化酶）的重要来源。生产中初生仔猪经常发生缺铁，如不及时补充，极易导致缺铁性贫血，还会导致食欲减退、生长停滞，好发仔猪白痢等疾病。石磊等3指出，复合有机铁组母猪的产程要比硫酸亚铁组母猪缩短 23.57%，平均每胎所产健康仔猪数增加 14.0%，初生窝重则增加 14.1%。单春乔等4通过试验发现，母猪在妊娠后期补饲小肽螯合铁，所产仔猪的成活率能提高 33.3%。与此同时，硒也是猪体内不可缺少的微量元素。但是，仔猪很难从母乳中获得足够的硒，因此很容易导致硒的缺乏。缺硒的仔猪很容易发生消化紊乱、白肌病、肝病等多种疾病。贾建英等5指出，与饲喂亚硒酸钠相比较，给母猪饲喂酵母硒，所产仔猪初生窝重能提高 10.8%。徐高骁等6研究表明，按 0.5 mg/kg 的剂量标准，给母猪补饲酵母硒，所产仔猪初生体重分别比补饲氧化硒（0.3 mg/kg）、氧化硒（0.5 mg/kg）、亚硒酸钠（0.5 mg/kg）提高 13.8%、10.6%、12.1%。本试验结果表明，母猪产前补饲甘氨酸螯合铁、硒代蛋氨酸，其所产仔猪初生体重比补饲硫酸亚铁、亚硒酸钠提高了 14.7%，这与上述研究结果基本一致。仔猪很难从母乳中得到铁，而仔猪出生时体内铁的贮存量仅有 50 mg 左右，只能满足其机体3 d 的需求。而哺乳仔猪生长过程中每日铁的需要量约为 716 mg，缺铁极容易导致仔猪缺铁性贫血和免疫功能低下。本次试验表明，给仔猪添加铁和硒对促进其生长非常关键。与基础日粮中补充硫酸亚铁、亚硒酸钠相比，有机状态的铁硒能显著提高仔猪的生长性能。参考文献 1 王松明,刘志强,张光磊,等.母猪铁代谢与仔猪铁代谢之间的关系与影响J.猪业科学,2020,37（8）:112-115.2 武志锋,王磊.仔猪铁的状况及植酸酶过量对铁生理的影响J.中国饲料,2019（20）:8-11.3 石磊,邓仕伟,吴兵,等.复合有机铁对母猪繁殖性能及其抗氧化能力的影响J.中国饲料,2019（13）:58-61.4 单春乔,刘斯斯,赵荣,等.小肽整合铁对仔猪补铁效果的研究J.粮食与饲料工业,2018（7）:54-56.5 贾建英,吕慧源.高水平酵母硒对母猪乳硒含量,哺乳仔猪生长性能及血液生化指标影响J.饲料研究,2020,43（11）:40-43.6 徐高骁,卢丽枝,段赛星,等.不同水平硒源对妊娠母猪生长性能,繁殖性能及血液生理指标的影响研究J.饲料工业,2017,38（12）:16-20.（收稿日期：2022-11-21）（上接 4 页）病原检测及遗传进化分析J.中国猪业,2022,17（1）:77-80.14 Kennedy S,Moffett D,McNeily F,et al.Reproduction of lesions of postweaning multisystemic wasting syndrome by infection of conventional pigs with porcine circovirus type 2 alone or in combination with porcine parvovirusJ.J Comp Pathol,2000,122:9-24.15 Krakowka S,Allan G M,Ellis J,et al.Experimental infection of colostrum deprived piglets with porcine circovirus 2（PCV2）and porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）potentiates PCV2 replicationJ.Vet Pathol,2000,37:254-263.（收稿日期：2022-11-15）