4个品种草莓茎尖组培快繁体系的构建.pdf
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1、落 叶 果 树 ,():试 验 研 究 :个品种草莓茎尖组培快繁体系的构建王晓芳,宗晓娟,常元胜,姜莉莉,田中 一久,武冲(山东省果树研究所,山东泰安 ;徂汶景区化马湾乡政府,山东泰安 )摘要:以近年来生产上应用较广的草莓优良品种红颜、章姬、香野和粉玉为研究对象,系统开展不同品种脱毒组培快繁技术研究。以各品种的茎尖为外植体,研究了 个品种草莓茎尖的不定芽诱导、增殖及生根情况、移栽成活情况等。研究表明章姬和香野最适宜的茎尖不定芽诱导和继代增殖培养基为 ;红颜和粉玉最适宜的茎尖不定芽诱导培养基为 ,不定芽继代增殖培养基为 。个品种最佳生根培养基为 培养基。用蛭石进行移栽,成活率均超过 。关键词:草
2、莓;红颜;章姬;香野;粉玉;茎尖分化;增殖;脱毒苗中图分类号:文献标识码:文章编号:()收稿日期:基金项目:山东省农业科学院创新工程项目(,);山东省果树研究所科研创新基金()。通讯作者:武冲(),男,山东泰安人,副研究员,从事草莓育种及栽培研究。:作者简介:王晓芳(),女,山东威海人,助理研究员,从事草莓栽培技术研究及推广工作。:,(,;,):,;,:;草莓种苗质量是影响草莓产业化发展的关键因素之一 。传统自繁自育的育苗方式导致草莓种苗种性退化、繁殖系数降低、易感病、产量降低等问题,且因连作和长期营养繁殖导致植株体内积累各种病落叶果树第 卷毒,生长速度慢,抗逆、抗病虫害能力减弱,果实产量和品
3、质严重下降 。植物组培快繁技术具有不受季节限制、培养周期短、易于规模化生产等优点,尤其在解决植物脱毒方面具有显著的优势。采用组培快繁技术培育的草莓种苗具有长势强、产量高等优点 。红颜、章姬、香野和粉玉是当前生产上的主栽的草莓品种或是发展前景比较好的品种,产量高、品质好、抗逆、抗病虫害能力强。虽然有关草莓茎尖组培的研究比较多,但关于筛选这 个品种最佳快繁条件的报道相对较少,因此,本研究以前期筛选比较适宜草莓茎尖生长的培养基为基础,研究 个品种草莓在培养基上的生长表现及驯化移栽表现,确定最佳的组织培养和移栽基质,以期为草莓组培快繁生产提供技术支撑。材料与方法 材料来源供试草莓品种为红颜、章姬、香野
4、、粉玉,匍匐茎茎尖取自山东省果树研究所金牛山试验基地草莓大棚。露地栽培可于 月进行取材,月雨季之后取材接种时易被污染。设施栽培有匍匐茎时都可取材。剪取选择生长健壮无病虫害侵染的草莓匍匐茎,长度保留 左右,采后用湿报纸包裹,装入封口袋中,标记好品种,放入带冰袋的盒子中,及时带回试验室,如不能及时接种,将湿报纸包裹的匍匐茎置于 冰箱保存备用,不超过 。培养基配制前期 筛 选 的 培 养 基 配 方 为 ,值 ,每升培养基添加 蔗糖和 琼脂,灭菌 ,配方根据前人试验结果适当调整 。此培养基用做初代培养基和继代增殖培养基,初代培养使用培养皿(直径 ),每皿倒入 左右培养基;继代培养使用带盖玻璃组培瓶(
5、高 、直径 ),每皿倒入 左右培养基。在试验过程中发现红颜和粉玉在此培养基上诱导培养时易发生玻璃化,对 的 浓 度 进 行 调 整,初 代 培 养 基 为 ,继代增殖培养基为 ,值 ,每升培养基添加 蔗糖和 琼脂。生根培养基配方为 培养基,不添加植物生长调节剂,值 ,每升培养基添加 蔗糖和 琼脂,参考前人方法略有调整 。外植体消毒处理所取匍匐茎保留茎尖剪成长约 的小段(图),先用洗洁精轻轻搓洗 ,再用流动的自来水持续冲洗 ,之后在超净工作台中用 的酒精消毒 ,无菌水冲洗 次,再用 次氯酸钠浸泡灭菌 ,无菌水冲洗 次 。经试验证明这样可以将污染率控制在 以内,实际操作过程中清洗和消毒时间长短可视
6、茎段幼嫩程度适当增减,但要掌握好消毒时间,时间太短灭菌效果不理想,接种后易造成大量污染;时间太长易接种后易发生褐化,影响接种成活率。图 做外植体的草莓匍匐茎茎尖 茎尖培养将灭菌后的茎段放在灭过菌的滤纸上,置于培养皿中,吸收多余水分。将消毒的茎段放到灭菌的培养皿上,一只手用镊子固定茎段,另一只手使用消毒的解剖针先剥去外面较大的幼叶,在电子显微镜下将幼嫩的幼叶逐层剥去,直至露出半圆球形顶端分生组织,切取 大小茎尖接种于初代培养基上进行培养,每皿接种 个茎尖,个培养皿为 组,重复 次。接后密封,放置在组培架上培养。组培室保持温度(),湿度 ,接种后先暗培养 ,随后在光照强度 ,光照时长 条件下培养。
7、初代培养 后统计成活率,后统计诱芽率。增殖继代培养在培养皿上用消毒的解剖刀将茎尖诱导出的丛第 期王晓芳等:个品种草莓茎尖组培快繁体系的构建生不定芽分割成小的芽丛,转接到继代培养基上进行增殖培养,丛 瓶,计算增殖系数。瓶为 组,重复 次。放置到组培架上光照下培养,培养温度、光照强度和光照周期等其他培养条件与初代培养相同,每隔 继代 次。培养 个月左右,按需要生根或二次继代。一般继代次数不超过 次,否则幼苗生长弱化。生根培养挑选继代培养的高度 、长势较好的组培苗在超净工作台中转入生根培养基。放置到组培架上光照下培养(环境条件与 所述一样),在培养室培养 左右,观察各品种幼苗根部生长情况,计算生根率
8、。炼苗及移栽组培苗在移栽前需要进行锻炼,以适应外部环境。组培瓶空间小,遇较强的光照容易使其内部温度快速升高,会导致草莓叶片发生灼烧枯干。因此要采取恰当的炼苗措施,炼苗时逐渐打开培养瓶盖,使幼苗逐步适应外部环境。生根 后准备炼苗移栽,炼苗时先拧开瓶盖但不打开,放置 ,第 天半敞开瓶盖,放置 ,第 全部打开瓶盖炼苗 ,组培小苗茎秆由绿色变为略带红色,栽植成活率高。移栽时(室内温度)将根系发达、生长健壮的生根苗从组培瓶中取出,清洗去除根部多余的培养基,将其栽入穴盘中,提前将蛭石填入草莓专用 孔育苗穴盘,穴盘下放置托盘,提前在托盘中浇水,使蛭石湿润,利于组培苗成活。栽植后先扣带孔的塑料盖 ,然后揭开适
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