1起由产气荚膜梭菌引起的聚集性腹泻事件的病原学分析.pdf
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1、疾病防治469JiangsuJPrevMed,Vol.34,No.4江苏预防医学2 0 2 3年7 月第34卷第4期1起由产气荚膜梭菌引起的聚集性腹泻事件的病原学分析刘海波,王云霞,刘颖,史文凤,张冬然,赵霞北京市房山区疾病预防控制中心,北京10 2 40 0摘要:目的分析1起由产气荚膜梭菌引起的聚集性腹泻事件的病原学特征。方法采集腹泻事件患者的粪便标本,利用FilmArray快速检测和荧光定量PCR方法进行致病细菌初筛,根据初筛提示进行细菌分离培养,对分离株进行质谱鉴定分析、PFGE分析和全基因组测序分析。结果本起疫情共搜索到病例9 例,采集2 5份样品,混合样多病原快速分析测试条(G I)
2、初筛结果为阴性;食源性致病菌核酸多重实时荧光PCR检测,9份样品为阳性,阳性率36.0 0%。共分离到9株产气荚膜梭菌,其中7 株A型产气荚膜梭菌,1株型产气荚膜梭菌,1株F型产气荚膜梭菌。9株菌全基因测序结果显示泛基因的核心基因高度同源,且都携带耐药基因:其中1株仅携带mprF耐药基因,1株同时携带mprF和tetB(P)2种耐药基因,6 株同时携带mprF、t e t B(P)和tetA(P)3种耐药基因,1株同时携带mprF、t e t B(P)、t e t A(P)和ermQ4种耐药基因。结论此次聚集性腹泻事件是由食用被产气荚膜梭菌污染食品所致。9株菌高度同源,且存在多重耐药现象。未来
3、应持续关注产气荚膜梭菌的耐药情况,并加强公众食品安全知识宣传普及。关键词:产气荚膜梭菌;耐药性;毒力基因中图分类号:R117文献标识码:B文章编号:10 0 6-90 7 0(2 0 2 3)0 4-0 46 9-0 3产气荚膜梭菌(clostridiumperfringens)原名产气荚膜芽孢杆菌,存在于土壤、食物、污水等多种环境中,可分泌2 0 多种毒素或酶,可能参与病理生理学过程,与气性坏疽、食物中毒和非食源腹泻等多种疾病有关。按产生的6 种主要毒素:毒素(CPA)毒素(CPB)、8毒素(ETX)、毒素(ITX)、肠毒素(CPE)、毒素(Ne t B),产气荚膜梭菌分为A:CPA;B:C
4、PA,CPB,ETX;C:CPA,CPB,CPE(+/-);D:C PA,ET X,C PE(+/-);E:CPA,ITX,CPE(+/-);F:C PA,C PE;G:CPA,NetB等7 种类型2 。感染A型和C型毒素会导致人类疾病,其中A型是大多数产气荚膜梭菌相关食物中毒和非食源性腹泻的致病原3。北京市房山区2021年8 月下旬报告1起聚集性腹泻事件,初筛致病原为产气荚膜梭菌,为了解致病原的病原学特征,进行了培养、质谱和分子分型分析,结果如下。1材料与方法1.1样品本起疫情搜索到病例9例,共采集样品25份,包括肛拭子9份(3例餐馆从业人员和6 例患者),粪便样品3份(3例患者),餐馆案板
5、刀具、冰箱冷藏、操作台等涂抹样品8 份,肉汤、驴颈肉、驴后腿肉、驴肋排肉、驴肝等食品样品5份。1.2主要仪器与试剂FilmArray测试仪器、胃肠道感染检测芯片、CFX96荧光定量PCR仪、CHEFMAPPER脉冲场凝胶电泳仪、GelDoc凝胶成像系统(美国伯乐),基质辅助激光解析飞行质谱(autoflexspeed,德国布鲁克公司),MIR-254-PC低温恒温培养箱(日本松下)。核酸快速提取试剂盒(江苏硕世),食源性致病菌核酸多重实时荧光PCR检测试剂(北京卓诚惠生),限制性内切酶Xbal和Smal(美国NEB),胰陈亚硫酸盐环丝氨酸琼脂(TSC,北京君立康),哥伦比亚血平板(北京陆桥);
6、所有试剂均在有效期内使用且质控合格。1.3方法1.3.1初筛采用FilmArray测试仪器进行快速鉴定:将所有样品制成1个混合样,采用多病原快速分析测试条(GI)进行13种细菌(弯曲菌、难辨梭菌、类志贺邻单胞菌、沙门菌、弧菌、小肠结肠耶尔森菌、致泻大肠)、4种寄生虫(隐孢子虫、环孢子虫、疾阿米巴、兰伯氏贾第鞭毛虫)、5种病毒(腺病毒、星状病毒、诺如病毒、轮状病毒、扎如病毒)的快速筛选。PCR检测:若多病原快速分析测试条(GI)结果为阴性,则用核酸快速提取试剂盒提取所有样品核酸,采用食源性致病菌核酸多重实时荧光PCR检测试剂盒进行11种病原菌(单核细胞增生性李斯特菌、沙门菌、大肠埃希D0I:10
7、.13668/j.issn.1006-9070.2023.04.027作者简介:刘海波(198 6 一),女,内蒙古赤峰人,副主任技师,主要从事病原菌检测方面的工作.470Jiangsu J Prev Med,Jul.,Vol.34,No.42023江苏预防医学2 0 2 3年7 月第34卷第4期菌0 157、金黄色葡萄球菌、弧菌属、克罗诺杆菌属、志贺菌、气单胞菌、蜡样芽孢杆菌、弯曲菌和产气荚膜梭菌)核酸筛查。1.3.2分离培养及鉴定按GB4789.132012食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验对食品样品进行产气荚膜梭菌定量分析;其他样品划线接种于TSC平板,37 厌氧2 4h培
8、养,进行产气荚膜梭菌定性分析。挑取典型菌落于血平板37 厌氧2 4h培养后用飞行质谱进行鉴定,根据文献4进行PFGE分型分析,对分离株进行全基因组测序(上海伯杰医疗科技有限公司),采用泛基因组图分析菌株的同源性,分析毒株携带6 种主要毒素的情况和利福平耐药基因(mprF)、四环素耐药基因tetB(P)、tetA(P)和红霉素耐药基因(ermQ)等4种耐药基因的情况。2结果2.1疫情基本情况本起疫情共搜索到病例9例,男、女性分别为5、4例,年龄3 6 6 岁;临床表现主要为腹泻(8/9)、腹痛(7/9)、里急后重(2/9);腹泻次数为3 12 次/d,为稀便(5/8)和粘液便(3/8);5名于8
9、月2 9日到医院就诊,另有4名在家自行服药,无危重或死亡病例。5例就诊病例均进行血常规检测,1例淋巴细胞百分数升高、粒细胞百分比降低,其他4例血常规指标正常。患者就餐情况调查,9例均居住于房山区某村,仅有共同就餐地点为某餐馆,就餐日期为8 月2 8 日午餐(3例)和晚餐(6 例);8 月2 8 日餐馆提供食物为驴肉、驴板肠、火烧、驴杂面条、拌豇豆、拌土豆丝、拌藕片、煮花生、拌腐竹木耳、小米粥。9例病例均食用了驴肉,7 例食用驴杂面条,5例食用驴板肠,4例食用?拌菜,潜伏期1.5 17 h,平均10 h。2.2致病原原初筛混合样多病原快速分析测试条(G I)结果为阴性。采用食源性致病菌核酸多重实
10、时荧光PCR检测:9份样品阳性,总体阳性率36.0 0%(9/2 5);其中肛拭子6 份阳性(患者4例、餐馆工作人员2 例),阳性率为6 6.6 7%;3份患者粪便样均为阳性,CT值为:2 4.0 1 33.15;其余样品均为阴性。2.3致病原分离和鉴定米将2 5份样品进行分离培养,9份核酸阳性的样品培养后有典型可疑菌落,命名为YQCP19。经飞行质谱鉴定后均为产气英膜梭菌;对9株菌进行PFGE分型分析,带型不完全一致。9株分离株全基因组测序后,绘制泛基因组图,显示9株核心基因相似度很高,其中YQCP6、YQ CP1、YQCP7、YQ CP8、YQ CP2、YQ CP5这6 株菌与芬兰排泄物检
11、出的产气荚膜梭菌(CP075981)高度同源,YQCP9与芬兰排泄物检出的产气荚膜梭菌(CP075979)高度同源;YQCP3与德国排泄物检出的产气荚膜梭菌(CP0 7 597 7)高度同源;YQCP4与芬兰鲑鱼中检出的产气荚膜梭菌(CP075970)高度同源。见图1。Tree(58 strains)CP065632CP010994CP075992LS483461CP010993CP073070CP065681LS483393CP065677CP075922CP023410NC_008261CP065675CP075953CP075927CP013101LR698985CP075912CP07
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