5种致泻大肠埃希氏菌不同浓度下的国标法检出率分析.pdf
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1、Oct.2023 CHINA FOOD SAFETY 95分析检测5 种致泻大肠埃希氏菌不同浓度下的 国标法检出率分析胡春红,陆其聪*(四川省轻工业研究设计院有限公司,四川成都 610081)摘要:目的:研究 5 种致泻大肠埃希氏菌使用 GB 4789.62016 法检测时,不同初始浓度下,二次增菌取不同接种体积的检出率。方法:不同初始浓度下(1 3 CFUmL-1,10 30 CFUmL-1,100 300 CFUmL-1)的 5 种致泻大肠埃希氏菌加入营养肉汤增菌后,取不同体积(10 L、50 L、100 L、500 L、1 000 L)的预增菌液接种于肠道增菌肉汤管中,培养后划线于伊红美
2、蓝琼脂(Eosin-Methylene Blue,EMB)和麦康凯琼脂(MacConkey Agar,MAC)平板,观察并记录平板中菌落生长情况,计算检出率。结果:5 种致泻大肠埃希氏菌接种量在 10 CFU 及以上时,二次增菌时取 10 L 预增菌液至肠道增菌肉汤中,均能检出。5 种致泻大肠埃希氏菌接种量在 1 3 CFU 时,二次增菌时取 10 L 和 50 L 预增菌液至肠道增菌肉汤中,平均检出率均不能达到 100%;二次增菌时接种体积增加到 100 L 时,肠道集聚性大肠埃希菌EAEC(CICC24186)、肠出血性大肠埃希菌 EHEC(CICC24187)、产肠毒素大肠埃希菌 ETE
3、C(CICC24190)的检出率能达到 100%,而肠道侵袭性大肠埃希菌 EIEC(CICC24188)、肠道致病性大肠埃希菌 EPEC(CICC24189)的检出率仍不能达到 100%。结论:在实际检测工作中,在所检样品中致泻大肠埃希氏菌含量较低时,可以考虑增加二次增菌的接种量,减少漏检可能。关键词:致泻大肠埃希氏菌;国家标准方法;检出率Analysis of the Detection Rate of 5 Kinds of Diarrheagenic Escherichia Coli at Different Concentrations by National Standard Meth
4、odHU Chunhong,LU Qicong*(Sichuan Light Industry Research and Design Institute Co.,Ltd.,Chengdu 610081,China)Abstract:Objective:To study the detection rates of 5 types of diarrhea causing Escherichia coli using the GB 4789.62016 method at different initial concentrations and different inoculation vol
5、umes for secondary enrichment.Method:Five types of diarrhea causing Escherichia coli at different initial concentrations(1 3 CFUmL-1,10 30 CFUmL-1,100 300 CFUmL-1)were added to nutrient broth for enrichment,and different volumes(10 L,50 L,100 L,500 L,1 000 L)inoculate the pre enrichment solution int
6、o the intestinal enrichment broth tube,and after cultivation,line it on eosin methylene blue(EMB)and macconkey agar(MAC)plates.Observe and record the bacterial colony growth in the plates,and calculate the detection rate.Result:When the inoculation amount of 5 types of diarrhea causing Escherichia c
7、oli was 10 CFU or above,10 L of pre enriched liquid was taken into the intestinal enrichment broth during the second enrichment,and all of them could be detected.When the inoculation amount of 5 types of diarrhea causing Escherichia coli is 1 3 CFU,10 L and 50 L of pre enriched liquid are taken duri
8、ng the second enrichment into the intestinal enrichment broth,and the average detection 作者简介:胡春红(1991),女,四川内江人,本科,助理工程师。研究方向:食品微生物检验检测。通信作者:陆其聪(1987),女,四川内江人,硕士,工程师。研究方向:食品微生物检验检测。E-mail:。96 食品安全导刊 2023年10月(上)分析检测rate cannot reach 100%;when the inoculation volume increases to 100 L during the second
9、 enrichment,the detection rates of E.coli EAEC(CICC24186),E.coli EHEC(CICC24187),and E.coli ETEC(CICC24190)can reach 100%,while the detection rates of invasive E.coli EIEC(CICC24188)and pathogenic E.coli EPEC(CICC24189)cannot reach 100%.Conclusion:In practical testing work,when the content of Escher
10、ichia coli causing diarrhea in the tested samples is low,it can be considered to increase the inoculation amount of secondary enrichment to reduce the possibility of missed detection.Keywords:diarrheagenic Escherichia coli;national standard law;detection rate致泻大肠埃希氏菌是一类重要的食源性病原体,是引起肠道疾病相关的食源性疾病的主要病原
11、菌,可导致人或动物腹泻、腹痛甚至出血性腹泻1-2。常见的引起人类发病的致泻大肠埃希氏菌有 5 种,包括肠道致病性大肠埃希氏菌、肠道侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒素大肠埃希氏菌、产志贺毒素大肠埃希氏菌(或称为肠出血性大肠埃希氏菌)与肠道聚集性大肠埃希氏菌3-4。致泻大肠埃希氏菌存在于人和动物的肠道中,人群普遍易感,会引起急性胃炎、急性菌痢、出血性肠炎等多种疾病,传播方式多种多样,包括饮用水、食物、日常生活用品、蚊蝇昆虫传播等5。食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量(GB 299212021)6规定肉制品(仅适用于牛肉制品、即食生肉制品、发酵肉制品类)、即食果蔬制品(仅适用于去皮或预切的水果及上述
12、类别混合食品)中,致泻大肠埃希氏菌不得检出。此类食品易受食品从业人员和食材本身的微生物污染,且一旦污染,微生物繁殖速度较快。在对食品从业人员和公共场所从业人员进行卫生检测时,致泻大肠埃希氏菌的检出率明显高于沙门氏菌和志贺氏菌7。近年来,致泻性大肠埃希氏菌在急性腹泻粪标本中的检出率有所增加8-9。致泻性大肠埃希氏菌引起的食品安全问题对人类健康和社会经济造成了严重的影响10。食品中致泻大肠埃希氏菌的检测是预防和控制由该菌引起的食源性疾病的关键11。近年来,大多学者致力于研究致泻大肠埃希氏菌的致病机制和分子生物技术,而对标准中样品前处理方法的研究较少,有文献中写明当进行阳性对照时,染菌量应控制在每
13、25 g 样品中含 10 100 CFU 活菌,但对选择此浓度的原因没有提及12。本次实验主要研究采用食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验(GB 4789.62016)(以下简称国标法)检测时染菌量的范围,以及在较低染菌量时是否能检出病原菌。1材料与方法1.1材料与试剂标 准 菌 株:产 肠 毒 素 大 肠 埃 希 菌 ETEC(CICC24190)、肠 道 侵 袭 性 大 肠 埃 希 菌 EIEC(CICC24188)、肠 道 致 病 性 大 肠 埃 希 菌 EPEC(CICC24189)、肠 道 集 聚 性 大 肠 埃 希 菌 EAEC(CICC24186)、肠 出 血
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