元宝枫籽油饼粕蛋白的提取工艺研究.pdf
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1、 鲁东大学学报(自然科学版)()():收稿日期:修回日期:基金项目:山东省医用食品重点项目()通信作者简介:王晓洁()女教授硕士研究生导师博士研究方向为免疫与营养:.:././.元宝枫籽油饼粕蛋白的提取工艺研究宋艳丽王晓洁鲍 诚卞菲菲(鲁东大学 生命科学学院山东 烟台)摘要:本研究采用不同方法从元宝枫籽油饼粕中提取蛋白并脱盐以蛋白提取率、纯度和脱盐率为指标选择最佳蛋白质提取工艺 不同的蛋白质提取方法中采用 法、盐析法、碱溶酸沉法、酸沉碱溶法的粕蛋白提取率和纯度分别为 和、和、和、和 其中 法的提取效果最好 提纯后采用透析法对 法提取的蛋白溶液进行脱盐研究结果显示粕蛋白溶液在 下透析 脱盐率为
2、蛋白纯度为 脱盐效果和蛋白纯度综合最优关键词:蛋白提取碱溶法 法盐析法脱盐中图分类号:.文献标志码:文章编号:()元宝枫()是槭树属的落叶乔木因外形类似于我国古代“金锭元宝”而得名是我国的特有树种其种子无毒并且富含蛋白质和油脂主要分布在我国黄河中下游及东北南部地区 元宝枫作为一种油料作物其籽油在 年被列入“新资源食品”名单 元宝枫籽油富含不饱和脂肪酸和人体必需的脂肪酸(亚油酸)具有抗癌、促进细胞修复等作用其含有的神经酸对神经修复以及保健大脑有显著功效填补了国内木本植物油无神经酸的空白 元宝枫籽油可作为不饱和脂肪酸添加至特殊医学用途配方食品中因其来源丰富、价格低的特点使其成为特医食品开发的质高物
3、美的新原料 元宝枫籽油饼粕是榨取元宝枫籽油后的副产品通常把它作为废料或者动物饲料的原料但其饼粕内还富含蛋白质含量高达 以上因此在粕蛋白的再利用方面还存在巨大的潜力但目前元宝枫籽油饼粕蛋白的提取工艺研究较少提取效率也相对较低饼粕的不断废弃造成了大量的资源浪费和环境污染 为优化饼粕蛋白的提取方法更好的对饼粕进行循环利用本研究利用酸沉碱溶法、碱溶酸沉法、盐析法和 法对元宝枫籽油饼粕进行蛋白提取并通过比较粕蛋白提取率和提取纯度最终得到最适合元宝枫籽油饼粕蛋白提取的方法 由于在提取粕蛋白过程中会产生一部分可溶性盐为了降低溶液中的盐离子浓度将提纯后的样品进行透析袋脱盐处理以提高蛋白纯度最终得到元宝枫籽油饼
4、粕蛋白脱盐的最优方法为元宝枫籽油饼粕的重新利用提供数据支持 材料与方法.材料与试剂本研究所用材料为元宝枫籽油饼粕(山东易丰健康产业内(烟台)有限公司)本研究所用试剂为氢氧化钠(西陇科学股份有限公司)、盐酸(烟台远东精细化工有限公司)、硫酸(国药集团化学试剂有限公司)、硫酸铜(天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、硫酸钾(国药集团化学试剂有限公司)、硫酸铵(天津市天河化学试剂厂)、氯化钠(天津市福晨化学试剂厂)、无水乙醇(烟台三和化学试剂有限公司).仪器与设备本研究使用的仪器和设备如下:台 第 期宋艳丽等:元宝枫籽油饼粕蛋白的提取工艺研究 式低速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)、自动凯式定氮
5、仪(济南海能仪器股份有限公司)、恒温水浴振荡器(上海仪表集团公司制造三部佳敏仪表有限公司)、酸度计(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)、电子天平/(梅特勒托利仪器(上海)有限公司)、原子吸收分光光度计(烟台昊清生物科技有限公司)、电热鼓风干燥箱(上海博讯事业有限公司医疗设备厂)、电子万用炉(天津市泰斯特仪器有限公司)、电炉温度控制器(龙口市先科仪器有限公司)、型高速多功能粉碎机(浙江省永康市金穗机械制造厂)、普通型透析袋()(上海源叶生物科技有限公司).方法.样品预处理将 元宝枫籽油饼粕放入高速多功能粉碎机中粉碎 待饼粕磨成粉状将其装入带有名称和日期标签的透明自封袋中备用.元宝枫籽油饼粕蛋白的
6、提取与制备 )酸沉碱溶法提取蛋白参照郭倩等和张英蕾等的方法并加以优化 称取 元宝枫籽油饼粕于 倍去离子水中搅拌均匀后加入适量浓度为 的盐酸调节 值至 搅拌 这时大部分蛋白质沉析粗纤维形成浆状物 离心 弃上清留沉淀 用去离子水将沉淀洗出加入浓度为 的氢氧化钠调节 值为 离心 取上清弃沉淀将上清 值调节至中性放入烘箱 烘干后用凯式定氮法测定蛋白含量)碱溶酸沉法提取蛋白参照文献 的方法并加以优化 称取 元宝枫籽油饼粕加入到 倍去离子水中搅拌均匀加入适量浓度为 的氢氧化钠调节溶液 值至 于 恒温水浴锅中搅拌 离心 弃沉淀取上清 上清用浓度为 的盐酸调节 值至 离心 后用去离子水洗出沉淀 将溶于去离子水
7、的沉淀加入浓度为的氢氧化钠调节 值为 放入烘箱 烘干后用凯式定氮法测定蛋白含量)法提取蛋白参照王海东等和赵晨煊等的方法并加以优化 第一步清蛋白提取 称取 元宝枫籽油饼粕加入 倍去离子水中搅拌均匀并置于恒温水浴锅中 搅拌 离心 取上清上清即为清蛋白提取液沉淀用于下一步蛋白提取 将上清液的 值调节为 离心 收集沉淀 用烘箱 烘干后称取其产品重量并用凯式定氮法测蛋白含量第二步球蛋白提取 取第一步中第一次离心得到的沉淀加入 倍 氯化钠溶解后续收集步骤与清蛋白的收集步骤相同 将得到的上清液的 值调节为 离心 弃上清收集沉淀用烘箱 烘干后称取产品重量并用凯式定氮法测蛋白含量第三步醇溶蛋白提取 取第二步中第
8、一次离心得到的沉淀加入 倍 的无水乙醇溶解收集步骤与清蛋白的收集步骤相同 将得到的上清液的 值调节为 离心 弃上清收集沉淀用烘箱于 烘干后称取其产品重量并用凯式定氮法测其蛋白含量第四步:谷蛋白提取 取第三步中第一次离心得到的沉淀加入 氢氧化钠溶解收集步骤与清蛋白收集步骤相同 将得到的上清液的 值调节为 离心 收集沉淀用烘箱烘干后称取其产品重量并用凯式定氮法测其蛋白含量)盐析法提取蛋白参照文献的方法并加以改进 称取 元宝枫籽油饼粕于 倍去离子水中溶解搅拌均匀置于恒温水浴锅 搅拌 离心 收集上清加入硫酸铵至饱和度(根据硫酸铵饱和度常用表计算)下静置 后 离心 弃上清将沉淀转入透析袋并置于装有去离子
9、水的容器中透析 期间每隔 换一次水得到的蛋白溶液放入烘箱 烘干后称取产品重量并用凯式定氮法测其蛋白含量.元宝枫籽油饼粕蛋白提取率和纯度的测定采用凯式定氮法测定元宝枫籽油饼粕提取物中蛋白质的含量和元宝枫籽油饼粕中的蛋白质含量从而计算蛋白提取率和纯度:鲁东大学学报(自然科学版)第 卷元宝枫籽油饼粕蛋白含量的计算公式为:().式中:为试样中元宝枫籽油饼粕蛋白含量()为试样消耗盐酸标准滴定液的体积()为试剂空白消耗盐酸标准滴定液的体积()为盐酸标准滴定溶液浓度()为氮换算蛋白质的系数取值 为试样中元宝枫籽油饼粕的质量()元宝 枫 籽 油 饼 粕 蛋 白 提 取 率 计 算 公式 为:蛋白提取率 提取物
10、中蛋白质的含量元宝枫籽油饼粕中蛋白质总含量 元宝枫籽油饼粕蛋白纯度计算公式 为:蛋白纯度 提取物中蛋白质的含量提取物的质量.元宝枫籽油饼粕蛋白的脱盐工艺研究参照刘军等的透析袋脱盐方法并加以改进 使用之前实验确定的适合元宝枫籽油饼粕蛋白的提取方法制取用于脱盐实验的样品溶液将样品溶液装进透析袋并放入容器中将去离子水加入容器内并置于 下进行透析脱盐每隔 换一次水换水时需戴上无菌一次性塑胶手套避免用手直接触碰透析袋外表面 在透析进行到第、时分别取样转入带有时间标记的烧杯中并置于烘箱中 烘干之后进行氮含量与钠含量测定根据钠含量与氮含量的变化确定元宝枫籽油饼粕蛋白溶液的最佳脱盐时间.钠含量鉴定方法钠质量分
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